续断切制工艺的优化

李 妍， 王建科∗， 王新村， 王元镁

（1. 贵阳中医学院， 贵州 贵阳 550025； 2. 贵州同济堂中药材种植有限公司， 贵州 贵阳550009）

续断是传统常用中药， 首载于 《神农本草经》， 被列为上品[1］， 为川续断科植物川续断Dipsacus asper Wall. ex Henry 的干燥根， 在秋季采挖，除去芦头及须根， 清洗后用微火烘至半干， 堆积“发汗” 至内部变绿后再烘干[2］， 它含有三萜皂苷、 木通皂苷、 马钱子苷、 多糖、 β-谷甾醇等成分， 另外其挥发油主要组成有漪罗艾菊酮、 2， 4，6-三叔丁基苯酚等[1，3-6］。 药理研究表明， 续断对骨组织、 生殖系统、 免疫系统、 神经系统等均有一定影响， 具有抗炎、 抗衰老、 修复肝损伤等药理作用[7-14］。 然而， 目前续断切制工艺尚无具体的技术参数， 导致饮片质量参差不齐， 影响临床疗效发挥及相关产业发展， 故本研究采用正交试验优化该药材切制工艺， 为其进一步研究奠定基础。

1 材料

1.1 仪器 UltiMate 3000 型高效液相色谱仪（美国赛默飞世尔科技公司）； TU-1810 型紫外-可见分光光度仪（北京普析通用仪器有限责任公司）；AUW220D 型全自动电子天平[岛津仪器（苏州）有限公司］； 中药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）。

1.2 试药 川续断皂苷Ⅵ（批号GZDD-0006） 对照品购于贵州迪大生物科技有限责任公司。 续断采自贵州同济堂中药材种植有限公司续断种植基地（威宁县二塘镇梅花村）， 经贵阳中医学院生药教研室魏升华教授鉴定为续断科植物川续断Dipsacus asper Wall. ex Henry 的干燥根， 将其除去杂质， 洗净， 润透， 切薄片， 干燥， 筛去碎屑。 甲醇、 乙醇、 磷酸均为分析纯； 甲醇、 乙腈均为色谱纯； 水为纯净水，

2 方法与结果

2.1 川续断皂苷Ⅵ含有量测定

2.1.1 色谱条件 Agilent Eclipse C18色谱柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）； 流动相乙腈-0.20%磷酸（30 ∶ 70）； 检 测 波 长206 nm； 体 积 流 量1 mL／min； 柱温30 ℃； 进样量20 μL。 色谱图见图1。

图1 川续断皂苷ⅥHPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of asperosaponin Ⅵ

2.1.2 对照品溶液制备 取川续断皂苷Ⅵ对照品适量， 甲醇稀释成1.5 mg／mL， 精密量取1 mL 置于10 mL 量瓶中， 流动相稀释至刻度， 摇匀，即得。

2.1.3 供试品溶液制备 精密称取药材细粉约0.5 g， 置于50 mL 具塞锥形瓶中， 精密加入15 mL 90%甲醇， 密塞， 称定质量， 回流提取3 次， 每次30 min， 放冷， 90% 甲醇补足减失的质量， 摇匀，滤过， 合并滤液， 精密吸取1 mL， 置于10 mL 量瓶中， 流动相稀释至刻度， 摇匀， 0.45 μm 微孔滤膜过滤， 即得。

2.1.4 线性关系考察 精密称取川续断皂苷Ⅵ对照品15.05 mg， 甲醇稀释成1.505 mg／mL， 精密吸取0.05、 0.2、 0.8、 1.2、 1.8 mL 于2 mL 量瓶中，甲醇定容， 在“2.1.1” 项色谱条件下进样20 μL测定。 以进样量为横坐标（X）， 峰面积为纵坐标（Y） 进行回归， 得方程为Y=4.616 6X ＋1.038 3（r=0.999 8）， 在0.075 3～2.709 μg 范围内线性关系良好。

2.2 续断总皂苷含有量测定

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取川续断皂苷Ⅵ对照品适量， 甲醇定容至25 mL， 即得（0.226 mg／mL）。

2.2.2 供试品溶液制备 精密称取药材粉末约0.3 g， 加入60 mL 70% 乙醇， 超声 （500 W、40 kHz） 50 min， 滤过， 滤液置于100 mL 量瓶中，70%乙醇定容至刻度， 摇匀， 即得。

2.2.3 显色条件 精密吸取供试品0.3 mL 于10 mL比色管中， 沸水浴挥干溶剂， 精密加入甲醇2 mL、 浓硫酸3 mL， 密塞， 摇匀， 95 ℃恒温水浴中加热20 min 后， 再放入冰水浴中冷却5 min， 摇匀， 于528 nm 波长处测定吸光度。

2.2.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液0.3、0.4、 0.5、 0.6、 0.7、 0.8、 0.9 mL 于具塞试管中， 随行试剂作为空白对照， 按“2.2.3” 项下方法操作， 于528 nm 波长处测定吸光度。 以吸光度为纵坐标（A）， 进样量为横坐标（X） 进行回归，得方程为A = 3.641X-0.022 6 （r = 0.999 6），在0.067 8～0.203 4 mg 范围内线性关系良好。

2.3 水浸出物测定 参照2015 年版《中国药典》四部水浸出物项下热浸法测定。

2.4 醇浸出物测定 参照2015 年版《中国药典》四部醇浸出物项下热浸法测定， 以50%乙醇为溶剂。

2.5 切制工艺优化

2.5.1 单因素试验 以川续断皂苷Ⅵ、 总皂苷为评价指标， 对软化用水量（A）、 软化时间（B）、切制片型（C）、 干燥温度（D） 进行考察， 发现在软化用水量2 倍、 软化时间4 h、 切制片型横片、干燥温度80 ℃条件下效果最佳。

2.5.2 正交试验 在单因素试验基础上， 各因素选取3 个水平， 通过L9（34） 正交表安排试验。 取9 份药材， 每份1 kg， 按表1 参数设计， 加入不同用量水软化一定时间后取出， 切制成不同片型， 于不同温度下干燥， 得到9 份样品， 粉碎， 过40 目筛， 测定各成分含有量， 再进行综合评分。 根据所测成分在药材中的重要性， 设定权重分别为川续断皂苷Ⅵ40%、 总皂苷30%、 醇浸出物15%、 水浸出物15%， 计算公式为综合评分=川续断皂苷Ⅵ隶属度×40% ＋总皂苷隶属度×30% ＋醇浸出物隶属度×15%＋水浸出物隶属度×15% [隶属度= （指标值-指标最小值） /（指标最大值-指标最小值） ］， 满分1.00。 结果见表1， 方差分析见表2。

表1 试验设计及结果Tab.1 Design and results of tests

表2 方差分析Tab.2 Analysis of variance

由表1 可知， 各因素对综合评分的影响程度依次为D＞B＞C＞A， 即干燥温度影响最大， 软化用水量影响最小， 最优工艺为A2B3C1D2； 由表2 可知，各因素对实验结果均无显著性影响（P＞0.05）。 综合各因素考虑， 最终确定最优工艺为A2B3C2D2，即用4 倍量水软化药材， 软化时间6 h， 切横片，干燥温度70 ℃。

2.6 切制工艺比较 取药材3 份， 每份5 kg， 分别按“1.2” 项下传统工艺和“2.5.2” 项下优化工艺切制， 测定川续断皂苷Ⅵ、 续断总皂苷、 水浸出物、 醇浸出物含有量， 结果见表3 ～4。 由表可知， 优化工艺稳定可行， 测得值高于传统工艺。

3 讨论与结论

本实验所用续断采自种植基地， 按照传统工艺加工， 即将新鲜药材剪掉须根及芦头， 清洗干净，滤水， 60 ℃干燥箱中减重， 堆积“发汗” 以使药材内部变绿后再烘干。 切制时， 先用水软化续断，发现切制后其外表皮呈灰褐色， 而切面皮部呈墨绿色， 并且在软化过程中出现下色现象， 是否表明某些成分有损失或变化尚需进一步研究。

表3 传统工艺下含有量测定结果（n=3）Tab.3 Results of content determination under traditional process （n=3）

表4 优化工艺下含有量测定结果（n=3）Tab.4 Results of content determination under optimized process （n=3）

多指标综合评价符合中药多功效的用药特点，也可体现中医药思维的整体观念。 本研究采用该方法优化续断切制工艺， 所得最佳条件为取烘干减重50% “发汗” 后于60 ℃下干燥的药材， 加入4 倍量水软化6 h， 取出， 稍润， 横切3 mm 厚片，70 ℃下烘干， 川续断皂苷Ⅵ、 续断总皂苷、 水浸出物、 醇浸出物含有量分别为7.86%、 14.08%、43.71%、 42.93%， 四者均高于传统工艺， 可知优化工艺稳定可行， 可用于该药材加工。