杨振萍,薛 红 ,呼延杰,白 妮,刘喜强
(陕西省延安市中医医院,陕西 延安 716000)
消痤饮为我院皮肤科协定处方,具有清热、解毒、凉 血、宣肺化痰及散结功效,临床用于治疗青年痤疮及脂溢性皮炎、糠秕孢子性毛囊炎等症。为方便携带和服用,本院制剂室拟将此协定处方制备为胶囊剂。本试验中采用正交试验法,考察水提工艺中的加水量、煎煮次数及煎煮时间对消痤胶囊水提物指标性成分绿原酸含量及干浸膏得率的影响,以确定最佳提取工艺。现报道如下。
仪器:LC-20AT型高效液相色谱仪(日本岛津公司);液体真空浓缩煎药机、十功能自动两煎煎药机(北京东华原医疗设备有限责任公司)。
试药:绿原酸对照品(中国食品药品检定研究院,批号为110753-200413,供含量测定用);消痤饮(延安市中医医院协定处方);甲醇、乙腈均为色谱纯,水为超纯水。
将消痤胶囊制剂处方水提物室温静置过夜(12 h以上),滤过,取上清液,减压浓缩,压力0.7 kPa,温度45℃。观察分离筒,待分离筒液面无变化时取出浓缩胆,称定质量,连续多次,直到质量恒定,浸膏粉即为样品。
2.2.1 色谱条件
色谱柱:Shim-Pack VP-ODS柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈 -5% 醋酸溶液(10 ∶90,V/V);流速:0.8 mL /min;检测波长:328 nm;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。
2.2.2 溶液制备
取绿原酸对照品5 mg,精密称定,置50 mL容量瓶中,用50%甲醇溶解并定容至50 mL,摇匀,即得对照品溶液(100 μg /mL)。取样品约 1 g,精密称定,置 30 mL锥形瓶中,加入50%甲醇 30 mL,超声处理 10 min,滤过,用50%甲醇补足30 mL,摇匀,即得供试品溶液。取按上述工艺条件制备不含金银花的干浸膏粉,取约1 g,精密称定,置30 mL锥形瓶中,加50%甲醇30 mL,超声处理10 min,滤过,用50%甲醇补足30 mL,摇匀,即得空白样品溶液。
2.2.3 方法学考察
系统适用性试验及空白干扰试验:精密吸取2.2.2项下对照品溶液、供试品溶液、对照品+供试品溶液、空白样品溶液各10 μL,分别进样,记录色谱图,详见图1。结果表明,样品中的其他组分对绿原酸的测定无干扰。
线性关系考察:取对照品溶液,制成质量浓度为140.00,70.00,35.00,17.50,8.75 μg /mL 的系列对照品溶液,分别进样,以峰面积为纵坐标(Y)、进样量为横坐标(X,μg)进行线性回归,得回归方程 Y=10.911X-7.5417,R2=0.999 9(n =5)。结果表明,绿原酸进样量在8.75~140.00 μg范围内与峰面积线性关系良好。
精密度试验:取高、中、低质量浓度对照品溶液,分别进样,记录峰面积,同一样品1 d内重复进样6次,同样3个质量浓度的对照品溶液连续测定6 d,计算含量。结果日内、日间精密度的 RSD分别为1.17%,0.14%,0.70% 和 1.15% ,0.48% ,1.25% (n = 6),表明仪器精密度良好。
稳定性试验:室温下取同一供试品溶液,24 h内连续进样6次,记录峰面积。结果的 RSD为0.15%(n=6),表明供试品溶液室温下在24 h内稳定。
重复性试验:取样品适量,依法制备供试品溶液,连续进样6次,记录峰面积。结果的 RSD为0.12%(n=6),表明方法重复性良好。
加样回收试验:取已知含量的样品 0.6 mL,加35 μg/mL 的绿原酸对照品 0.3 mL,依法制备供试品溶液混合进样10 μL,进样6次。结果见表1。
表1 绿原酸加样回收试验结果(n=6)
正交试验设计、结果及分析见表2至表4。通过分析,水提工艺最佳组合为A2B1C2或A1B3C3,即加8倍量水,煎煮2次,每次1 h;或加10倍量水,煎煮1次,每次2 h。3种因素的影响强度虽无显著差异,但煎煮次数影响明显大于其他2种因素。以总浸膏得率为考察指标的最佳组合为A3B1C3,考虑到水提物组方质地较轻,且组方中指标性成分绿原酸受热时间过长会被破坏,故采用A2B1C2方案作为消痤胶囊处方的水提工艺。
表2 因素水平表
表3 正交试验结果
表4 绿原酸得率方差分析结果
按制剂处方比例放大100倍,称取3份药材,按照试验筛选的最佳工艺,即加8倍水量,提取2次,每次1 h,进行验证。结果3批中试样品中绿原酸含量分别为 1.64,1.68,1.63 mg /g(生药),干浸膏粉得率分别为12.99% ,13.34% ,12.41% 。可见,优选的最佳提取工艺合理,具有较好的稳定性。
消痤胶囊制备处方来源于医院皮肤科使用近20年的协定处方,由犀角地黄汤合枇杷清肺饮加减,通过解毒散结清宣肺热,清热凉血清胃热而起到治疗作用,方中君药金银花有清热解毒、散结消痈功效[1-4]。金银花具有抑菌和抗炎作用,对金黄色葡萄球菌有一定抑制作用,若和连翘合用,抗菌范围还可互补[5]。本试验中以金银花有效成分绿原酸含量和干浸膏粉得率为考察指标[6-11],确定消痤胶囊水提物最佳工艺,方法简单,经试验及小批量生产,产品稳定性好,质量可控,可为制剂生产提供一定参考。