CD147与MMP-2在甲状腺癌组织中的表达及临床意义

赖敏栋 乐 飞

甲状腺是人体癌变率最高的内分泌器官，甲状腺癌约占全身恶性肿瘤的1%，近年来研究发现其发病率迅速增高[1]。传统临床研究甲状腺癌主要依赖组织病理学，随着医学技术的进步，分子病理学在甲状腺癌的诊断、治疗方案确定、评估预后等各个方面发挥了积极的作用[2-3]。本研究旨在探讨甲状腺癌组织表达白细胞分化抗原147(CD147)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的临床意义，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2017年3月至2018年5月期间在江西省肿瘤医院头颈外科接受治疗的85例甲状腺癌患者，所有患者均经病理组织学检查确诊，且既往均无甲状腺手术治疗史。85例患者中男性29例，女性56例；年龄22～79岁，平均(49.1±10.3)岁；肿瘤直径0.5～3.9 cm，平均(2.8±1.6)cm，淋巴结转移33例、无转移52例。

1.2 研究方法

1.2.1 甲状腺癌组织CD147、MMP-2表达的免疫组织检测 ①脱蜡：组织切片60 ℃烘烤2 h，二甲苯(Ⅰ)、二甲苯(Ⅱ)各10 min，100%酒精(Ⅰ)、100%酒精(Ⅱ)、95%酒精、85%酒精、70%酒精各5 min。PBS冲洗3 min×3次。②热修复：将组织切片置入柠檬酸钠缓冲液，高压锅加热至沸腾，1 min后关闭电源，自然冷却1 h。PBS冲洗3 min×3次。③H2O2封闭：在组织切片上滴加3% H2O2溶液，置入湿盒，室温下孵育10 min。PBS冲洗3 min×3次。采用吸水纸将组织边缘残留液体吸净。④滴加抗体：滴加50 μl一抗 ，4 ℃孵育过夜。PBS冲洗5 min×3次。再次采用吸水纸将组织边缘残留液体吸净，滴加50 μl二抗，37 ℃湿盒孵育20 min。PBS冲洗5 min×3次。⑤显色：滴加100 μl的DAB液，显微镜下可见黄色颗粒显色即可停止，流动水冲洗20 min。⑥复染：苏木精复染约4 min，流动水冲洗5 min。⑦脱水：70%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精(Ⅰ)、100%酒精(Ⅱ)各1 min。⑧透明及封片：二甲苯(Ⅰ)、二甲苯(Ⅱ)各5 min，中性树脂封片。

1.2.2 结果判定 筛选10个高倍镜视野共计数1000个细胞，细胞质呈棕黄色提示CD147、MMP-2表达阳性。细胞阳性比率≤1%、>1%～10%、>11%～50%、>50%分别计0、1、2、3分。细胞染色强度无、弱、中、强分别计0、1、2、3分。两项得分乘积>6分为高表达(3+)，4～6分为中表达(2+)，1～3分为低表达(1+)，0分为阴性[4]。

1.3 统计学分析

采用SPSS 21.0统计软件，组间性别、病理类型、淋巴结转移比较采用χ2检验，组间年龄、肿瘤直径比较采用成组设计t检验，甲状腺癌组织CD147、MMP-2的表达相关性采用Spearman 秩相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 甲状腺癌组织CD147、MMP-2表达情况分析

85例甲状腺癌患者组织标本中，CD147表达阳性63例、CD147表达阴性22例；MMP-2表达阳性54例、MMP-2表达阴性31例。

2.2 甲状腺癌组织表达CD147与患者临床特征的关系

甲状腺癌组织表达CD147与患者性别、年龄、病理类型无显著相关性(P>0.05)，与患者淋巴结转移、肿瘤直径有显著相关性(P<0.05)，见表1。由结果可知，CD147表达阳性患者肿瘤直径、淋巴结转移率显著高于CD147表达阴性患者，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 甲状腺癌组织表达CD147与患者临床特征的关系

2.3 甲状腺癌组织表达MMP-2与患者临床特征的关系

甲状腺癌组织表达MMP-2与患者性别、年龄无显著相关性(P>0.05)，与患者病理类型、淋巴结转移、肿瘤直径有显著相关性(P<0.05)，见表2。由结果可知，乳头状癌、滤泡癌、髓样癌、未分化癌患者甲状腺癌组织MMP-2表达阳性率分别为76.19%、60.00%、35.29%、66.67%，髓样癌患者甲状腺癌组织MMP-2表达阳性率显著低于乳头状癌患者，差异有统计学意义(P<0.05)。此外，MMP-2表达阳性患者肿瘤直径、淋巴结转移率显著高于MMP-2表达阴性患者，差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 甲状腺癌组织表达MMP-2与患者临床特征的关系

2.4 甲状腺癌组织表达CD147与MMP-2的相关性分析

甲状腺癌组织中CD147、MMP-2表达呈显著正相关(γs=0.487，P<0.05)。

3 讨论

甲状腺癌是人体头颈部以及内分泌系统最常见的恶性肿瘤之一。流行病学研究调查显示，2012年全国肿瘤登记地区甲状腺癌发病率为6.6/10万，世界人口调整发病率为4.8/10万，略高于全球平均发病率4.0/10万[5]。值得注意的是，甲状腺癌发病率仍然呈持续增长趋势，因此目前临床迫切需要探索一个研究甲状腺癌的新方向，以期为甲状腺癌患者的临床诊断、治疗及预后提供新方案。

CD147是由Biswas在人肿瘤细胞培养的上清液中发现的一种跨膜糖蛋白，进一步研究显示CD147低表达于人体多种正常组织，且其表达程度随着组织细胞不同而发生变化[6]。随着研究的深入，CD147被发现高度表达于多种恶性肿瘤细胞，并且在肿瘤细胞能量代谢、肿瘤新生血管生成、肿瘤细胞浸润及转移过程中发挥重要作用[7-8]。既往临床有关甲状腺癌组织表达CD147的文献报道主要是将其用于甲状腺癌的诊断与鉴别诊断[9]，以及其影响甲状腺癌细胞的增殖、侵袭和转移能力的机制[10]，而甲状腺癌组织表达CD147与患者临床特征相关性的文献报道则较少。本研究即对此进行探索，结果显示甲状腺癌组织表达CD147与患者性别、年龄、病理类型无显著相关性，而与患者淋巴结转移、肿瘤直径有显著相关性。

基质金属蛋白酶家族(MMPs)是一类锌离子依赖的内源性蛋白水解酶，目前已发现有28种。MMP-2属于Ⅳ型胶原酶，其主要功能就是降解Ⅳ型胶原与Ⅴ型胶原，但是也还可以降解Ⅰ～Ⅲ型胶原以及弹性蛋白，这些功能使得MMP-2在肿瘤侵袭过程中发挥了积极重要的作用[11]。既往临床甲状腺癌组织表达MMP-2的文献报道较多，本研究结果显示，甲状腺癌组织表达MMP-2与患者性别、年龄无显著相关性，与患者病理类型、淋巴结转移、肿瘤直径有显著相关性。尽管该结论与张静等[12]报道相一致，但却与杨光等[13]报道存在一定的区别。由此可见，甲状腺癌组织表达MMP-2的临床意义有待临床进一步大样本量研究。

对本研究数据进一步分析，结果显示甲状腺癌组织中CD147、MMP-2表达呈显著正相关。分析其原因，可能是CD147、MMP-2可能在甲状腺癌淋巴结转移、侵袭过程中发挥了协同作用所致。综上所述，下调CD147、MMP-2表达可能成为甲状腺癌治疗新的靶点，通过该方案进行治疗甲状腺患者有望获得更好的预后。