草木樨流浸膏片联合督灸对HLA-B27阳性强直性脊柱炎患者Th1、Th2和Th17的影响

卢秀花

临沂市中心医院，山东 临沂 276400

强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis，AS)是一种主要侵犯骶髂关节和脊柱致中轴关节骨融合的自身免疫性疾病，AS患者外周血Th1、Th17细胞数明显增高，Th2细胞数明显减低[1]，AS在中医属“脊痹”， 主要采用清热利湿、滋补肝肾、活血通络、行痹止痛的疗法，植物草木樨具有清热解毒的作用，草木樨流浸膏片联合督灸[2,3]经临床应用证实，其对强直性脊柱炎有明显的临床疗效。我们通过应用草木樨流浸膏片联合中医督灸疗法治疗AS，检测AS患者血清中Th1、Th2、Th17及炎症因子的水平，探讨这种疗法产生疗效的可能机制。

1 材料和方法

1.1 试验药物草木樨流浸膏片(日本大阪生晃荣养药业 Seiko Eiyo Yakuhin Co.LTD)，每片含草木樨流浸膏25mg，批号: M-B003、M-B004；双氯芬酸钠片，北京诺华制药有限公司，每片25mg，批号:X0112201304。

1.2 病历选择标准

1.2.1 选择标准 (1)符合1984年修订的AS纽约标准；(2)年龄18～60岁；(3)病情处于活动期，即符合下列三项中的任一项：①晨僵时间＞30min；②全身疼痛或脊柱疼痛Likert四级积分≥2分；③血沉(Erythrocyte sedimentation rate，ESR)或C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)高于正常；(4)未接受过治疗或曾仅使用非甾体抗炎药物治疗；(5)患者依从性好；(6)HLA-B27阳性。

1.2.2 一般资料 选取我院中医科2014年11月—2018年10月AS患者40例，男34例，女6例，年龄28～56岁，平均(31.9±7.6)岁，病程0.5～19年，平均(11.2±6.5)年。将入选患者随机分为两组，各20例。试验组年龄(29.4±9.2)岁，病程(11.6±8.7)年；对照组年龄(28.3±3.9)岁，病程(9.3±4.3)年，两组对比无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.3方法

1.3.1 给药方法 试验组给予草木樨流浸膏片(日本生晃荣养药品株式会社)1mg/kg(以草木樨流浸液量计)，tid；对照组给予双氯芬酸钠片(北京诺华制药有限公司)1mg/kg，tid，两组患者均给予督灸治疗。

督灸治疗方法为：令患者裸背俯卧于床上，取大椎穴至腰腧穴的脊柱部位。常规消毒后，沿棘突均匀地撒督灸粉(主要成分为肉桂、丁香、麝香、斑蝥等成分)，成线条状之后敷贴桑皮纸，再涂抹姜汁如条状，然后再在纸上铺生姜泥呈梯状，姜末将左右骶髂关节包起来，之后在姜泥上置三角锥形艾柱，点燃艾柱上中下三点，任其自然自灭，连灸3状后移去姜泥及艾灰，用湿热毛巾轻轻擦干净。灸后局部皮肤红润，48h内禁止洗澡，施灸时间为10:00～15:00，每周督灸一次，两次为一疗程。

1.3.2 检测指标及方法 分别于治疗前及治疗4周后，清晨空腹静脉采血5～10mL于EDTA抗凝管中，用EPICS-XL型流式细胞仪(美国Beckman-Coulter 公司)按照Ficoll试剂说明书操作，分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)，加入30ul抗人CD3和CD4抗体，避光温育20min进行细胞染色，用预冷的PBS洗涤后，按固定与透膜试剂盒说明书操作对细胞进行固定和透膜处理，再分别加入20ul抗人IFN-γ、IL-4、IL-17A荧光抗体进行胞内染色，用流式细胞仪自带的FlowJo软件分析Th1(CD3+CD4+IFN-γ+)、Th2(CD3+CD4+IL-4+)和Th17(CD3+CD4+IL-17+)细胞比例。

1.3.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件进行分析，计量资料以平均值±标准差(χ－±S)表示，符合正态分布用t检验，非正态分布用非参数秩和检验。假设检验使用双侧检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 两组治疗前后淋巴细胞Th1、Th2和Th17比例±S，n=20)Tab1 Th1, Th2 and Th17 ratio of lymphocyte in two groups before and after treatment ±S，n=20)

表1 两组治疗前后淋巴细胞Th1、Th2和Th17比例±S，n=20)Tab1 Th1, Th2 and Th17 ratio of lymphocyte in two groups before and after treatment ±S，n=20)

注： 治疗后, 试验组与对照组比较, ＊P＜0.05

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表2 两组治疗前后炎症因子变化(±S，n=20)Tab2 Changes of inflammatory factors in two groups before and after treatment (±S，n=20)

表2 两组治疗前后炎症因子变化(±S，n=20)Tab2 Changes of inflammatory factors in two groups before and after treatment (±S，n=20)

注： 两组治疗后与治疗前比较, #P＜0.05, 治疗后观察组与对照组比较, ＊P＜0.05

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2 结果

2.1 两组治疗前后各临床评价指标变化治疗前，试验组和对照组相比，Th1、Th2和Th17相比差异无统计学意义；治疗后，与对照组相比，Th1、Th17比例明显下降，见表1。

2.2 T细胞因子治疗前，两组比较差异无统计学意义，两组治疗后与治疗前比较，细胞因子水平均明显下降，治疗后观察组与对照组比较，细胞因子IL-2、IFN-γ水平明显下降，细胞因子IL-4、IL-10水平明显下降，IFN-γ/IL-4比值明显降低，其中治疗后IL-2、IFN-γ和IFN-γ/IL-4两组比较差异具有统计学意义(P＜0.05)，见表2、表3。

3 讨论

AS是一种与HLA-B27阳性明确相关的慢性免疫性疾病，其发病机制尚不明确，目前认为主要与人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen, HLA)B27相关，研究显示[2]，其中约90%～95%的AS患者存在HLA-B27基因阳性。正常机体的Th1细胞亚群主要分泌IL-2、IFN-γ、IL-17，主要参与机体的细胞免疫，Th2细胞主要分泌IL-4、IL-6和IL-5等细胞因子，主要参与机体的体液免疫[4]。IL-4决定Th0细胞分化为Th1和Th2亚群的关键性调控因子，当IL-4在高水平，Th0细胞分化为Th2细胞为主，当IL-4缺乏时，IFN-γ会发挥促分化作用，使Th0细胞分化为Th1细胞[5]，另外，Th17可分泌IL-6/IL -17和TNF-α，加重AS的病理变化，Th17可转变为分泌Th1细胞因子的细胞，Th1和Th17共同参与了AS的炎症反应[6]。AS患者存在Th1、Th17细胞比例上调，引起细胞免疫功能亢进，促进炎症的发生发展，Th2细胞比例降低，其介导的免疫抑制作用减弱，联合检测这三种细胞比例值有助于AS病情的监测[1]。

AS在中医属“脊痹”，主要采用清热利湿、滋补肝肾、活血通络、行痹止痛疗法。草木樨是一年生或两年生豆科植物，具有清热解毒的药效。草木樨流浸膏片是草木樨植物的提取物，主要成分为香豆素酸、黄酮、多糖类物质，能显著抑制炎症反应、减轻水肿和疼痛。研究显示，草木樨流浸膏片对强直性脊柱炎、类风湿性关节炎具有良好的临床疗效[2,7]。督灸是祖国医学用于治疗强直性脊柱炎的传统疗法，具有良好的临床疗效，对延缓强直性脊柱炎的病情进展具有显著效果[8,9]。我们通过联合应用草木樨流浸膏片和督灸治疗AS，患者病情得到明显改善[3]。

本研究结果显示，草木樨流浸膏片联合督灸治疗后，患者外周血Th1、Th17细胞比例明显降低，炎症因子IL-2、IFN-γ、IL-10表达水平明显降低，提示此种治疗方案可能通过调节患者外周血Th细胞亚群比例，降低AS患者体内炎症因子水平，从而缓解患者病情。

草木樨流浸膏片联合督灸可用于治疗AS，推测此种治疗方案可能通过降低Th1和Th17细胞比例，降低相关炎症因子IL-2和IFN-γ的作用机制，从而发挥作用。

表3 两组治疗前后IFN-γ/IL-4比值比较 (±S, n=20)Tab3 Comparison of IFN-gamma/IL-4 ratio between the two groups before and after treatment ±S, n=20)

表3 两组治疗前后IFN-γ/IL-4比值比较 (±S, n=20)Tab3 Comparison of IFN-gamma/IL-4 ratio between the two groups before and after treatment ±S, n=20)

注： 两组治疗后与治疗前比较, #P＜0.05, 治疗后观察组与对照组比较, ＊P＜0.05

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