一种乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株的实验分析

研究背景概述

本文通过实验研制乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株，期望可以有效的治愈我国糖尿病患者。根据针对糖尿病中的免疫功能紊乱以及自由基毒素等致病因子对人体进行作用，从而降低人体机能中的胰岛素抵抗力以及胰岛功能，最终形成蛋白质、电解质以及脂肪等系列性代谢紊乱症状的分析。提出了研制一种乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株的思路。

具体研究内容

pBpp蛋白概述。pBpp蛋白属于一种功能性蛋白，可以用到人体的胰腺中，并且不必经过糖代谢机制，可以促进β细胞的增长和繁殖，加快胰岛素的分泌速度，而且对于人体的降糖操作刺激性不大，副作用也不大。

其次我们应当注意到的是，人体对pBpp蛋白的吸收率不高，口服形式的治疗方法不予推荐。并且由于目前技术水平制约，pBpp蛋白的制备和生产无法达到量产的规模。因此应用于实际的治疗当中还需要时日。

一种乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株的验证方法

依据乳酸乳球菌MG1363定植肠道的特性，在胃酸环境中能够很好的实现乳酸乳球菌MG1363对pBpp蛋白的保护作用，并促进重组蛋白集中分泌在肠道中，乳酸乳球菌MG1363介导，一方面实现了pBpp蛋白在人体内部的正常表达，另一方面提高了人体对pBpp蛋白的吸收率。

第一步：以斑马鱼粪便菌群DNA為模板，依托于pMG36e质粒，设计并运用一对引物，进行含有乳酸乳球菌分泌表达肽的pBpp蛋白表达基因的扩展。

第二步：在大肠杆菌中进行pMG36e质粒的扩增。

第三步：通过电转手段，在pBpp重组蛋白中导入一种乳酸乳球菌MG1363。

第四步：取实验小白鼠，通过药物针剂注射的方式，将50mg/kg计量的链脲佐菌素连续五天注射到小白鼠身上，使小白鼠患有糖尿病。并标注为I型糖尿病模型小白鼠。

第五步：取一组制备好的乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株，准备实验小白鼠，采取灌胃的形式，将乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株液体投放到小白鼠的体内，进行I型糖尿病模型小白鼠的病情治愈工作。

第六步：初期注意I型糖尿病模型小白鼠的给药分量，控制在52CFU/天的分量左右，而且给药的周期采取隔一天的形式进行，即两天给一次药。

第七步：采取一周为一次的监测周期，仔细观察1型糖尿病模型小白鼠体内的血糖数值变化。

实验结果表明：在实验治疗的过程当中，1型糖尿病模型小白鼠体内的血糖数值不仅得到了很好的控制，而且通过给药行为，恢复了正常数值范围，确定Ⅰ型糖尿病模型小白鼠被治愈成功。即说明一种乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株对于治愈糖尿病有一定的成效。

一种乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株的制备

第一步：进行含有Usp45乳酸乳球菌分泌表达信号肽的pBpp蛋白表达基因的制备，仍然以斑马鱼粪便菌群的总DNA为模板。

第二步：将第一步制备的试验品连接到pMG36e载体上，获得重组质粒。

第三步：将第二步的重组质粒投放到大肠杆菌中，获得重组菌株。

第四步：制备感受态的乳酸乳球菌MG1363，选取冻存状态下的乳酸乳球菌（MG1363），投放到MRS培养液基当中，控制厌氧环境下的温度，大约在三十摄氏度左右，上下浮动不超过两摄氏度。经过大约十二小时的静置培养以后，将培养基液中的菌液取出大约100pLus，将该液体均匀的涂抹在固体培养基平板上，保持相同的厌氧环境以及温度范围，经过大约十二小时的静置培养后，获得单菌落。

第五步：将plMG36e- Usp45- pBpp（重组质粒）从第三步的重组菌株中提取，使用电转方法，并设置1.8kv的电压，25uF的电容参数以及4.7ms的电转速度，将重组质粒投放到感受态的乳酸乳球菌中，在感受态的状态下，实现两者在电转杯中混合。

第六步：采取红莓素抗性筛选方法，获得一种乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株。

综上所述，一种乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株对于治愈糖尿病有一定的成效。

作者简介：

崔国贤（1987-），女，内蒙古通辽人，初级，大专，研究方向：微生物检测。