卵巢子宫内膜异位症患者BDNF、CA125水平检测及其诊断价值分析

李红霞 孟宪宁 霍志平 吴亚男 王宏利 郝媛媛

[摘要] 目的 探究卵巢子宫内膜异位症患者的脑源性神经营养因子（BDNF）、糖类抗原125（CA125）水平变化及其诊断价值。 方法 选择2017年2月～2018年6月中国石油天然气总公司中心医院（以下简称“我院”）妇产科收治的78例卵巢子宫内膜异位症（EMs）患者作为EMs组，另选择同期在我院进行常规体检的50例健康女性作为对照组。比较两组患者以及不同r-AFS病理分期患者的BDNF表达情况及血清CA125水平，分析卵巢EMs发病、r-AFS病理分期与BDNF表达、血清CA125水平的相关性，计算BDNF、CA125单项检测以及联合检测在诊断卵巢EMs中的诊断效能。 结果 EMs组患者的BDNF表达及血清CA125水平均明显高于对照组（P < 0.05）。不同r-AFS病理分期患者的BDNF表达及血清CA125水平存在显著差异（P < 0.05），BDNF表达、血清CA125水平随着r-AFS病理分期的增高而明显升高。BDNF表达及血清CA125水平与卵巢EMs发病、r-AFS病理分期均呈明显正相关性（P < 0.05）。BDNF、CA125联合检测诊断卵巢EMs的敏感度、特异度和准确率分别为98.72%、100.00%和99.22%，明显高于BDNF、CA125单项检测（r > 0.7，P < 0.05）。 结论 BDNF表达及血清CA125水平的异常升高与卵巢EMs的发生、发展密切相关，BDNF、CA125水平联合检测有助于卵巢EMs的分期诊断和病情评估。

[关键词] 卵巢子宫内膜异位;r-AFS分期;脑源性神经营养因子;糖类抗原125

[中图分类号] R737.31;R711.71          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）03（b）-0080-04

病理活检是诊断卵巢子宫内膜异位症（EMs）的“金标准”[1～3]，但其属于有创检查，且检查过程比较繁复。相关研究[4]发现，脑源性神经营养因子（BDNF）在多种恶性肿瘤中存在高表达，卵巢EMs尽管属于良性病变，但也具有侵袭性强、复发性高等类似恶性肿瘤的生物学行为。糖类抗原125（CA125）是一种与卵巢癌相关的糖类蛋白，其在卵巢EMs患者发病时会显著升高，因此常作为辅助诊断卵巢EMs的参考指标[5]。本研究对卵巢EMs患者的BDNF、CA125水平进行检测，分析、探讨其诊断价值，旨在为卵巢EMs的早期诊断提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年2月～2018年6月中国石油天然气总公司中心医院（以下简称：“我院”）妇产科收治的78例卵巢EMs患者作为研究对象，将其作为EMs组，年龄21～40岁，平均（31.58±5.12）岁。纳入标准：①均经病理学明确诊断为卵巢EMs[6];②月经周期正常;③卵巢子宫内膜分离简单、彻底。排除标准：①卵巢、子宫发育异常者;②近6个月内服用激素或其他影响月经周期药物者;③合并有血液系统疾病、心脑血管疾病、恶性肿瘤、肝肾功能不全者。选择同期在我院行常规体检的50名健康女性作为对照组，所有入选者经妇科、超声检查未见异常，年龄20～41岁，平均（31.49±5.08）岁。本研究经我院医学伦理委员会审核批准，所有受检者均对本研究均知情同意并签署了知情同意书。两组患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 BDNF的测定  EMs组患者取卵巢异位病灶组织，对照组受检者取子宫内膜组织，获取样本组织后采用10%福尔马林缓冲液固定，石蜡包埋组织块后连续切片（片厚4 μm），其后进行免疫组化染色。

以已知阳性标本为阳性对照，磷酸緩冲盐溶液（PBS）代替一抗为阴性对照。石蜡切片行常规脱蜡、水化后采用乙二胺四乙酸（EDTA）修复液（pH=9.0）进行高温高压抗原修复，滴加50 μL内源性过氧化物酶阻断剂阻断10 min，滴加兔抗人BDNF单克隆抗体（abcam108319，以1∶200的浓度进行稀释）后在室温环境下孵育1 h，滴加50 μL生物素标记的羊抗鼠/兔IgG孵育10 min，滴加50 μL链霉素抗生物蛋白-过氧化酶孵育10 min，在DAB显微镜下观察显色，自来水冲洗，苏木精复染，盐酸酒精分化，自来水冲洗反蓝，脱水透明，封片。

BDNF主要在上皮细胞或腺上皮细胞胞质中表达，阳性效应产物为黄色或棕黄色颗粒。免疫组化染色后将切片置于400倍光镜的光学显微镜下进行观察，随机选择5个具有上皮细胞或腺上皮细胞的高倍镜视野进行图像采集。采用组织化学评分（H-score）法[7][H-score=∑Pi（i+1）]对不同组织切片中的BDNF表达进行评价，其中i表示细胞染色强度，不着色为0分，黄色、浅棕色为1分，棕色为2分，棕褐色为3分;Pi表示每种染色强度细胞所占比例，波动范围为0%～100%，每张切片的H-score最终分值为5个高倍镜视野评分的平均值，以H-score分值≥2分为阳性[8]。

1.2.2 CA125检测  两组均于非月经期清晨抽取空腹肘部静脉血5 mL，静置在室温环境下自动凝固，以3500 r/min的转速离心5 min，分离血清，放置在-20℃的环境下保存，待测。采血当日应用酶联免疫吸附法（ELISA法）对血清CA125水平将进行测定，仪器为罗氏COBA8000化学发光仪，试剂盒为罗氏公司配套提供，检测过程严格按照试剂盒说明书进行，CA125>35 U/mL时为阳性[9]。

1.3 观察指标

比较BDNF在EMs组患者卵巢异位病灶及对照组受检者子宫内膜中的表达情况，并比较两组的血清CA125水平;比较不同r-AFS病理分期患者的BDNF表达及血清CA125水平情况;分析卵巢EMs发病及不同r-AFS病理分期与BDNF表达、血清CA125水平的相关性，计算并比较BDNF、CA125单项检测与两者联合检测在诊断卵巢EMs上的诊断效能。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行分析和处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验;计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验;相关性检验采用Pearson相关分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组BDNF表达及血清CA125水平比较

本研究采用H-score法对不同组织切片中的BDNF表达进行评价。EMs组患者的H-score评分、血清CA125水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 不同r-AFS病理分期患者的BDNF表达及血清CA125水平情况比较

不同r-AFS病理分期患者的BDNF表达及血清CA125水平比较，差异有统计学意义（P < 0.05），BDNF在卵巢异位病灶中的表达以及血清CA125水平随着r-AFS病理分期的增大而明显升高。见表2。

2.3 卵巢EMs发病及r-AFS病理分期与BDNF、CA125的相关性

Pearson相关性分析显示，卵巢EMs发病、r-AFS病理分期与BDNF表达以及血清CA125水平均呈明显正相关（P < 0.05）。

2.4 BDNF、CA125单项及其联合检测在卵巢EMs诊断中的诊断效能比较

BDNF、CA125联合检测诊断卵巢EMs的敏感度、特异度和准确率分别为98.72%、100.00%和99.22%，明显高于BDNF、CA125单项检测，差异有统计学意义（P < 0.05）。

3 讨论

卵巢EMs既有恶性肿瘤侵袭、转移、复发等特点，又有生长限制性的本质差异[9-10]。卵巢EMs的发病机制目前尚未明确，且部分患者临床表现不典型，缺乏特异性，难以做到早期诊断。病理活检作为诊断卵巢EMs的“金标准”，尽管能够对卵巢EMs做出明确诊断，但是其属于有创检查，且检查过程比较繁复[11]。寻求一种简便易行、创伤小、诊断准确性高的检查手段对于及早诊断、及时治疗卵巢EMs非常必要[12]。

卵巢EMs发生时，病灶表面和周围存在大量的新生血管，新生血管的生成是其病情进展的关键步骤[13]。BDNF作为神经营养因子家族中的重要成员，其通过与其受体TrKB结合促进血管内皮细胞中蛋白激酶B（AKT）的磷酸化[14-15]，进而促进血管形成，并在神经纤维的生长、存活和分化以及肿瘤发生、躯体内脏疼痛和高敏感性中发挥重要作用。

r-AFS病理分期作为目前临床上最为常见的卵巢EMs分期标准，主要是依据卵巢异位病灶的大小、浸润程度、黏连程度及范围等项目进行量化分级，能够比较准确地体现卵巢EMs的病變情况及严重程度[16]。本研究结果显示，BDNF在EMs组患者卵巢异位病灶中的表达明显高于其在健康女性子宫内膜中的表达，且不同r-AFS病理分期患者间的BDNF表达也存在显著差异，r-AFS病理分期越高，其BDNF表达越高。提示BDNF可能参与了卵巢EMs的发生和发展，其高表达可能进一步促进了子宫内膜在异位种植过程中的失巢凋亡抑制、促进细胞侵袭、增殖以及新生血管的生成[17-18]，导致异位病灶不断形成、加重，而异位病灶可继续合成BDNF，从而形成恶性循环。

CA125是一种体腔上皮细胞分泌的高分子糖蛋白表面抗原，普遍认为是卵巢肿瘤的标志物之一，其血清水平变化与子宫内膜发育密切相关[19-21]。正常情况下，子宫内膜分泌的CA125几乎不能通过腹膜屏障，然而当子宫内膜出现异位种植时，盆腔腹膜屏障受损，大量CA125进入机体血液循环，血清CA125水平显著提升[22]。本研究结果显示，EMs组患者的血清CA125水平明显高于同期健康女性，且EMs组患者的血清CA125水平随着r-AFS病理分期的增大而明显升高。提示血清CA125水平与卵巢EMs的发生、发展及预后有关，血清CA125水平随着卵巢EMs病理分期的严重性增加而升高，可将其作为评估卵巢EMs病情的客观指标[23-25]。

本研究通过Pearson相关性分析发现，BDNF表达及血清CA125水平与卵巢EMs发病、分期均呈明显正相关（r > 0.7，P < 0.05）。BDNF、CA125联合检测诊断卵巢EMs的敏感度、特异度和准确率分别为98.72%、100.00%和99.22%，明显高于BDNF（分别为89.74%、90.00%、89.84%）、CA125单项检测（分别为88.46、86.00%、87.50%）。BDNF表达以及血清CA125水平可作为诊断、评估卵巢EMs子宫内膜异位种植增生的可靠指标。

综上所述，卵巢EMs发生时患者的BDNF表达和血清CA125水平异常升高，BDNF、CA125可能参与了卵巢EMs的发生、发展，BDNF、CA125水平联合检测结果可作为参考指标用于卵巢EMs的分期诊断和病情评估。

[参考文献]

[1]  倪琴，秦萌，张凤格，等.卵巢子宫内膜异位症恶变25例临床病理及预后分析[J].现代妇产科进展，2018，27（5）：369-371.

[2]  Karimi-Zarchi M，Dehshiri-Zadeh N，Sekhavat L，et al. Correlation of CA-125 serum level and clinico-pathological characteristic of patients with endometriosis [J]. Int J Reprod Biomed（Yazd），2016，14（11）：713-718.

[3]  陈惠娴，张真真，万贵平.子宫内膜异位患者CXCL16的表达情况及诊断价值[J].中国医药导报，2018，15（15）：92-95.

[4]  温丽，郭珍，常春红，等.子宫内膜异位症患者血清和腹腔液中VEGF、IL-6、TNF-α、CA125表达及临床意义[J].现代中西医结合杂志，2017，26（5）：467-470.

[5]  韩玉双，徐伟，徐延明.血清CA125、TIMP-1及EMAb在子宫内膜异位症诊断中的价值[J].中国妇幼保健，2018， 33（12）：2657-2659.

[6]  中华医学会妇产科学分会子宫内膜异位症协作组.子宫内膜异位症的诊治指南[J].中华妇产科杂志，2015，50（3）：161-169.

[7]  洪玮，段华，汪沙，等.BDNF及TrKB在子宫内膜异位症在位内膜和异位病灶组织中的表达及意义[J].中国计划生育和妇产科，2018，10（3）：32-36.

[8]  Rocha AL，Vieira EL，Ferreira MC，et al. Plasma brain-derived neurotrophic factor in women with p8elvic pain：a potential biomarker for endometriosis？ [J] Biomark Med，2017，11（4）：313-317.

[9]  湯礼宾，章志福，麦丽兰.血清CA125、VEGF、MCP-1在子宫内膜异位症诊断中的应用价值[J].临床和实验医学杂志，2018，17（10）：1085-1088.

[10]  Vetvicka V，Laganà AS，Salmeri FM，et al. Regulation of apoptotic pathways during endometriosis：from the molecular basis to the future perspectives [J]. Arch Gynecol Obstet，2016，294（5）：897-904.

[11]  姚金翠，刘巧玲.子宫内膜异位症患者血清糖类抗原-125、人附睾分泌蛋白4、糖类抗原-199表达情况及其临床意义分析[J].中国妇幼保健，2017，32（12）：2608-2610.

[12]  路士芬.CA125诊断子宫内膜异位症的意义及相关因素分析[J].标记免疫分析与临床，2015，22（7）：654-656，659.

[13]  郭新颖，郭华峰.EMT合并不孕患者AcrAb、Sp17Ab、CA125水平与术后妊娠结局的关系[J].实验与检验医学，2018，36（3）：437-439，442.

[14]  Hirsch M，Duffy JM，Kusznir JO，et al. Variation in outcome reporting in endometriosis trials：a systematic review [J]. Am J Obstet Gynecol，2016，214（4）：452-464.

[15]  王芸，闻姬，方舟，等.BDNF基因的Val66Met多态性与子宫内膜异位症性不孕的相关性及对IVF-ET助孕结局的影响[J].国际生殖健康/计划生育杂志，2018，37（1）：10-14.

[16]  凌华萍，仝进毅.超声、癌胚抗原125和人附睾分泌蛋白4在卵巢癌和卵巢子宫内膜异位囊肿鉴别诊断中的价值[J].中国妇幼保健，2017，32（22）：5517-5519.

[17]  刘云鹭，李维丽，刘萍，等.脑源性神经营养因子及其受体P75在ⅠB1～ⅡB期宫颈鳞癌和正常宫颈组织中的表达[J].中国实用妇科与产科杂志，2017，33（2）：200-204.

[18]  Wessels JM，Kay VR，Leyland NA，et al. Assessing brain-derived neurotrophic factor as a novel clinical marker of endometriosis [J]. Fertil Steril，2016，105（1）：119-128.

[19]  高淑平，柯琼浪，谭天照.CA125及ROMA在阳春地区子宫内膜异位症患者风险评估中的应用研究[J].国际检验医学杂志，2017，38（24）：3420-3423.

[20]  王晓贤.联合检测血清HE4、CEA、CA125在卵巢癌诊断及治疗中的意义[J].中国医药科学，2018，8（23）：75-78.

[21]  龙平，洛若愚.腹腔镜联合醋酸亮丙瑞林治疗子宫内膜异位症合并不孕的临床效果[J].中国医药导报，2017， 14（26）：76-78，82.

[22]  Baggio S，Zecchin A，Pomini P，et al. The Role of Computed Tomography Colonography in Detecting Bowel Involvement in Women With Deep Infiltrating Endometriosis：Comparison With Clinical History，Serum Ca125，and Transvaginal Sonography [J]. Comput Assist Tomogr，2016， 40（6）：886-891.

[23]  黄蓉，王玲，邓宇傲，等.子宫内膜异位症患者子宫内膜PDGF、LN表达及其与血清CA_（125）水平相关性研究[J].实用妇产科杂志，2016，32（2）：113-116.

[24]  刘树皖，杨修军.HE4、CA125及血浆Fbg联合检测在卵巢癌患者早期诊断中的临床价值[J].中国现代医生，2017，55（36）：131-133.

[25]  陈红.血浆溶血磷脂酸及CA125与子宫内膜癌临床病理特征之间的关系分析[J].中国医药科学，2017，7（22）：47-50.

（收稿日期：2018-07-23  本文编辑：王   蕾）