血浆miRNA-126表达与妊娠期高血压疾病的相关性分析

何晓焱 彭诗寒 赵磊 罗玉萍 刘霞

[摘要] 目的 研究血浆miRNA-126表达与妊娠期高血压疾病的相关性。 方法 选取2015年2月～2018年2月四川省泸州市人民医院诊治的妊娠高血压疾病患者93例作为研究对象，并将其按照疾病进行分组。其中妊娠期高血压组30例，轻度子痫前期组29例，重度子痫前期组34例。另取同期体检的健康妊娠妇女20名作为对照组。分别采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术检测各组研究对象的血浆miRNA-126表达情况;同时比较各组收缩压、舒张压、24 h蛋白尿水平，并将其与miRNA-126表达进行相关性分析。 结果 与对照组比较，妊娠期高血压组血浆miRNA-126表达下调，而轻度子痫前期组血浆miRNA-126表达低于妊娠期高血压组，重度子痫前期组血浆miRNA-126表达低于轻度子痫前期组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。妊娠期高血压组收缩压、24 h蛋白尿水平均明显高于对照组;轻度子痫前期组收缩压、24 h蛋白尿水平高于妊娠期高血压组;重度子痫前期组收缩压、24 h蛋白尿水平高于轻度子痫前期组;对照组舒张压水平低于妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。经Spearman相关性分析，妊娠期高血压疾病患者miRNA-126基因表达与其收缩压、舒张压、24 h蛋白尿水平均呈负相关（r = -0.583、-0.626、-0.611、均P < 0.05）。 结论 妊娠期高血压疾病患者血浆miRNA-126表达明显下调，且随着病情的逐渐加重，血浆miRNA-126表达下调越明显。血浆miRNA-126表达下调可能在妊娠期高血压疾病的发生、发展过程中发挥着至关重要的作用。

[关键词] 妊娠期高血压疾病;miRNA-126;血浆;轻度子痫前期;重度子痫前期

[中图分类号] R714.246          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）03（b）-0076-04

妊娠期高血压疾病主要是指特发于女性妊娠期的一种疾病，其具体病因尚未完全明确，发病率在所有妊娠妇女中为7%～15%[1]。有研究报道[2]显示，妊娠期高血压疾病是导致妊娠妇女死亡的第二大原因，其导致的妊娠妇女死亡比例占所有妊娠相关死亡人数的10%～16%，对妊娠妇女以及新生儿的生命健康安全造成了严重影响。该病主要是发生在妊娠20周后，临床主要表现为血压升高，可伴有蛋白尿以及多脏器损伤。如不给予及时有效的治疗，随着病情日益加重，患者会出现抽搐、昏迷、心力衰竭、脑出血以及死亡等[3]。内皮祖细胞功能紊乱是导致子痫前期内皮细胞损失的基础，其中miRNA-126在内皮细胞中存在明显高表达，在血管的新生及维持血管完整性中发挥着至关重要的作用。另有研究[4]表明，miRNA-126可通过增強血管的内皮生长因子及成纤维细胞生长因子的血管新生作用，同时可通过调节控制多种基因的表达介导血管发育、血管新生以及血管炎性反应等生理、病理过程。鉴于此，本研究探讨了血浆miRNA-126表达与妊娠期高血压疾病的相关性，以期为临床诊治提供数据指导，现作以下报道：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年2月～2018年2月四川省泸州市人民医院（以下简称“我院”）诊治的妊娠期高血压疾病患者93例作为研究对象。纳入标准：①所有患者均为首次妊娠;②均符合第7版《妇产科与内科学》教材所制订的相关诊断标准[5];③年龄>18岁;④入院前未接受任何相关治疗。排除标准：①伴有其他产科并发症或合并症者;②合并高血压病3级或继发性高血压者;③存在心、肝、肾等脏器功能严重障碍者。参照诊断标准[5]将所有妊娠期高血压疾病患者进行分组，妊娠期高血压组：妊娠20周后血压高于140/90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），且血压在产后12周内恢复正常;轻度子痫前期组：妊娠20周后血压高于140/90 mmHg，且伴有蛋白尿≥0.3 g/2 h或随机蛋白尿弱阳性，且血压在产后12周内恢复正常;重度子痫前期组：妊娠20周后血压高于160/110 mmHg，蛋白尿≥2.0 g/2 h或随机蛋白尿阳性，且血压在产后12周内水平恢复正常。其中妊娠期高血压组30例，年龄24～37岁，平均（30.41±5.88）岁;孕龄37～41周，平均（38.76±1.20）周。轻度子痫前期组29例，年龄25～38岁;平均（29.04±6.23）岁;孕龄37～41周，平均（37.59±1.83）周。重度子痫前期组34例，年龄22～38岁，平均（29.11±6.28）岁;孕龄36～41周，平均（37.44±1.80）周。另取同期于我院进行体检的健康妊娠妇女20名作为为对照组，年龄22～38岁，平均（28.48±6.33）岁;孕龄37～42周，平均（38.01±1.75）周。各组年龄、孕龄等情况比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.2 方法

分别采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术检测各组研究对象血浆miRNA-126表达情况，具体方式如下：分别采集各组研究对象清晨空腹静脉血10 mL，将其注入乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管，并于1 h内以4℃、3000 r/min离心10 min，提取血浆转移至新的EP管中。以16 000 g离心10 min，转移至EP管中保存于-80℃冰箱中待检。采用QIAGEN公司的miRNeasy Serum/Plasma Kit总RNA提取试剂盒提取血浆总RNA，采用Thermo生物分光光度计测定RNA样品OD260/OD280的值，初步判断RNA纯度。参照GeneBank数据库中的相关序列设计miRNA-126引物，以U6为参照基因。采用茎-环逆转录荧光技术进行定量PCR，内参为小核RNA U6。其中miRNA-126引物序列如下：上游引物：5′-GTCCGCTCGTACCGTGAGTAATA-3′，下游引物：5′-GTGCGTGTCGTGGAGTC-3′。采用逆转录试剂盒（购自美国TAKARA公司）进行逆转录反应，其中反应条件为37℃，30 min;75℃，5 min，获取逆转录产物后马上根据RT-PCR试剂盒（购自美国TAKARA公司）进行检测，具体操作严格按照试剂盒说明书进行，每个逆转录产物样本检测3次，循环阈值（Ct值）取平均值，配成20 μL的反应体系，其中PCR参数如下：95℃ 预变性15 min，94℃变性20 s，60℃退火34 s，72℃延伸60 s，40个循环。实验重复3次。采用2-△△Ct法计算miRNA-126的相对表达量。

1.3 观察指标

比较各组miRNA-126基因表达水平，同时比较各组收缩压、舒张压、24 h蛋白尿水平，并将其与miRNA-126基因表达水平进行相关性分析。收缩压、舒张压、24 h蛋白尿水平采用全自动生化分析仪进行检测。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析;相关性采用Spearman相关性分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组miRNA-126基因表达、收缩压、舒张压、蛋白尿水平比较

与对照组比较，妊娠期高血压组血浆miRNA-126表达明显下调，而轻度子痫前期组血浆miRNA-126表达低于妊娠期高血压组，重度子痫前期组血浆miRNA-126表达低于轻度子痫前期组，差异均有统计学意义（P < 0.05）;妊娠期高血压组收缩压、24 h蛋白尿水平均明显高于对照组，轻度子痫前期组收缩压、24 h蛋白尿水平高于妊娠期高血压组，重度子痫前期组收缩压、24 h蛋白尿水平高于轻度子痫前期组;对照组舒张压水平低于妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 相关性分析

经Spearman相关性分析可知，妊娠期高血压疾病患者miRNA-126基因表达与收缩压、舒张压、蛋白尿水平均呈负相关（r = -0.583、-0.626、-0.611，均P < 0.05）。

3 讨论

妊娠期高血壓疾病可能是多种复杂因素共同作用导致的结果，其中主要因素包括免疫调节功能紊乱、遗传因素、营养因素、母体内病理改变以及胎盘结构与胎儿发育异常等[6-10]。随着相关研究的逐渐深入，越来越多的学者认为妊娠期高血压疾病属于一种血管内皮细胞疾病，且与血管的形成、血管完整性以及血管损伤存在密切相关[11-13]。另有研究[14-15]显示，miRNA-126在内皮细胞中呈现高表达，其可促进血管新生，同时对维持内皮细胞稳态与血管的完整性起着至关重要的作用。

本研究发现，与对照组比较，妊娠期高血压组血浆miRNA-126表达较低，而轻度子痫前期组血浆miRNA-126表达低于妊娠期高血压组，重度子痫前期组血浆miRNA-126表达低于轻度子痫前期组，差异均有统计学意义（P < 0.05），这与既往研究[16-17]相符，提示血浆miRNA-126可能在妊娠期高血压疾病的发生、发展过程中起着至关重要的作用。分析原因，笔者认为血浆miRNA-126可能是通过以下途径参与妊娠期高血压疾病的发生、发展：①血浆miRNA-126可能参与子宫螺旋动脉重铸异常，从而导致母胎界面血压供应缺乏，促使胎盘有效灌注降低，造成胎盘局部组织缺血、缺氧，进一步促进了异常胎盘结构的形成，继而导致血管炎症反应与内皮细胞功能障碍，并最终引发妊娠期高血压疾病。②在miRNA-126表达下调时，其靶基因SPRED与PI3KR2均呈过表达状态，从而会对丝裂原活化蛋白激酶与磷脂酰肌醇-3-激酶信号途径产生较明显的抑制作用，进一步影响血管新生因子信号的传递，两者共同作用导致血管生成受阻、血液供应不足，导致处于氧化应激状态下的母胎界面形成，并相互影响造成恶性循环，从而促使母体血液循环缓慢进入胎盘释放部分细胞碎片，最终引起全身免疫反应，导致妊娠期高血压疾病的发生。目前，临床上已有不少研究报道[18-21]证实收缩压、舒张压、24 h蛋白尿水平是临床上评价妊娠期高血压疾病的金标准。经Spearman相关性分析可知，妊娠期高血压疾病患者miRNA-126基因表达与收缩压、舒张压、尿蛋白水平均呈负相关（r = -0.583、-0.626、-0.611，均P < 0.05）。这充分证明了上述结果，并提示miRNA-126可能在妊娠期高血压的发生、发展过程中起着至关重要的作用。临床上可通过联合检测血浆miRNA-126与收缩压、舒张压、24 h蛋白尿水平，从而对妊娠期高血压患者病情进行准确评估[22-24]。

综上所述，妊娠期高血压疾病患者血浆miRNA-126表达存在明显下调，且随着病情的逐渐加重，血浆miRNA-126表达下调越明显。血浆miRNA-126表达下调可能在妊娠期高血压疾病的发生、发展过程中发挥着至关重要的作用。

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（收稿日期：2018-08-03  本文编辑：王   蕾）