SKP 2、kindlin- 2在前列腺癌组织中的表达及其与患者临床特征的关系

刘畅，王庆伟，罗振宇，连艳珍

1鹤壁市人民医院泌尿外科，河南鹤壁458000；

郑州大学第一附属医院2泌尿外科，3病理科，4检验科，郑州450052

前列腺癌是男性常见的泌尿系统恶性肿瘤，前列腺癌患者的生活质量较差，生存时间较短，生命安全受到严重的威胁[1-2]。在前列腺癌的病理机制方面，细胞因子或者肿瘤相关蛋白能够通过影响前列腺移行上皮细胞的异常增殖，参与前列腺癌的早期发生。细胞S相激酶相关蛋白2（S-phase kinase associated protein 2，SKP2）表达水平的升高能够通过干预肿瘤细胞的细胞周期，导致肿瘤的G1/S期细胞的比例上升，加剧肿瘤细胞的异常核DNA分裂，进而促进前列腺癌的发生[3]；kindlin-2蛋白是黏附分子蛋白成员，对肿瘤细胞的黏附和浸润能力具有促进作用，能够提高肿瘤细胞的浸润深度和浸润范围，加剧肿瘤细胞生物学特征的恶化[4]。本研究通过观察前列腺癌组织中SKP2、kindlin-2的表达水平，分析其与前列腺癌患者临床特征的关系，旨在为临床上对前列腺癌的临床治疗和病情评估提供参考依据，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2015年7月至2018年3月鹤壁市人民医院收治的70例前列腺癌患者作为研究对象。选取70例前列腺癌患者的前列腺癌组织标本。纳入标准：前列腺癌的诊断标准参考中华医学会制定的标准[5]；经前列腺穿刺或手术后病理学检查确诊；手术前未接受过放疗、化疗、免疫学治疗或激素治疗。排除标准：前列腺癌复发；伴有其他部位的恶性肿瘤；伴有尿路结石、尿路感染。70例前列腺癌患者的年龄为54～79岁，平均年龄为（67.5±7.5）岁；T分期：T1期20例，T2期24例，T3期20例，T4期6例；N分期：N0期47例，N1期23例；M分期：M0期51例，M1期19例；血清前列腺特异性抗原（prostate specific antigen，PSA）水平＞20 ng/ml 36例，≤20 ng/ml 34例；Gleason评分：2～6分46例，7分6例，≥8分18例。另选取同期在本院接受治疗的70例前列腺良性增生患者的前列腺良性增生组织标本。70例前列腺良性增生患者的纳入标准：经病理学诊断证实为前列腺良性增生；未接受内分泌相关治疗。排除标准：合并尿路结石及感染。70例前列腺良性增生患者的年龄为50～79岁，平均年龄为（66.8±8.0）岁。两组患者的年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。全部患者及家属均对本研究知情同意并自愿签署知情同意书，且本研究经过医院医学伦理委员会审核批准。

1.2 免疫组织化学染色方法

石蜡包埋，连续性切片，厚度为3 μm，60℃烤片60 min，常规脱水后，采用乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）进行抗原修复，加入 10 μl蒸馏水，加入 10%过氧化氢 5 μl，室温下孵育30 min，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）洗涤3次，每次3 min，加入浓度为1∶1000的kindlin-2、SKP2蛋白的单克隆抗体（购自罗氏公司），37℃孵育60 min，PBS洗涤3次，每次3 min，加入辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的kindlin-2、SKP2蛋白二抗（1∶1500稀释，购自罗氏公司），37℃孵育20 min，PBS洗涤3次，每次3 min；加入显色剂，PBS冲洗和复染，脱水，在50倍显微镜下进行观察。

1.3 免疫组织化学染色结果评分标准

免疫组织化学结果判定：kindlin-2蛋白的阳性着色表达于细胞质，SKP2蛋白的阳性着色表达于细胞核，呈黄色、棕黄色、褐色颗粒状。①根据染色强度评分：0分为无色，1分为淡黄，2分为棕黄色，3分为褐色、黑色；②根据阳性细胞数目所占比例评分：阳性细胞数目所占比例≤10%为1分，阳性细胞数目所占比例11%～50%为2分，阳性细胞数目所占比例51%～75%为3分，阳性细胞数目所占比例＞75%为4分。两种积分相乘，总分＜3分为阴性，≥3分为阳性[6]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用两独立样本t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 前列腺癌组织和前列腺良性增生组织中的kindlin- 2、SKP 2蛋白表达情况的比较

前列腺癌患者前列腺癌组织中kindlin-2、SKP2蛋白的阳性表达率均明显高于前列腺良性增生患者的前列腺良性增生组织，差异均有统计学意义（χ2=20.833、19.899，P＜0.01）。（表1）

2.2 不同临床特征前列腺癌患者前列腺癌组织中kindlin- 2、SKP 2蛋白的表达情况

表1 两种组织中kindlin- 2、SKP 2蛋白的表达情况[n（%）]

T分期为T3～T4期、N分期为N1期、Gleason评分为8～10分前列腺癌患者前列腺癌组织中kindlin-2蛋白的阳性表达率均高于T分期为T1～T2期、N分期为N0期、Gleason评分为2～7分的前列腺癌患者，差异均有统计学意义（χ2=4.941、5.373、4.641，P＜0.05）；不同M分期、PSA水平前列腺癌患者前列腺癌组织中kindlin-2蛋白的阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。T分期为T3～T4期、N分期为N1期、PSA水平＞20 ng/ml、Gleason评分为8～10分前列腺癌患者前列腺癌组织中SKP2蛋白的阳性表达率均高于T分期为T1～T2期、N分期为N0期、PSA水平≤20 ng/ml、Gleason评分为2～7分的前列腺癌患者，差异均有统计学意义（χ2=4.936、4.759、4.613、8.426，P＜0.05）；不同M分期前列腺癌患者前列腺癌组织中kindlin-2蛋白的阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表2）

3 讨论

长期的临床随访观察发现，相比于良性前列腺病变患者，前列腺癌患者的3年生存率或者5年生存率明显下降，给予综合性治疗措施进行治疗后，患者的无进展生存期仍然无明显改善[7-10]。通过肿瘤生物学指标评估前列腺癌患者的病情具有重要的意义，其能够在指导临床诊疗及评估预后方面发挥重要的作用。本研究对前列腺癌患者前列腺癌组织中SKP2、kindlin-2蛋白表达情况的分析，能够在揭示前列腺癌病情进展机制的同时，为临床上前列腺癌患者的病情评估提供参考。

表2 70例不同临床特征前列腺癌患者前列腺癌组织中kindlin- 2、SKP 2蛋白的阳性表达情况

SKP2是细胞周期调控相关蛋白，其能够影响肿瘤细胞的周期，提高肿瘤细胞快速跨越G0期的能力，从而促进恶性肿瘤的发生。SKP2蛋白的丝氨酸和巯基结构能够促进其对肿瘤细胞持续性自我增殖调控的作用。相关研究还认为，SKP2能够影响肿瘤细胞的生物学特征，进而参与恶性肿瘤的发生、发展过程[11]；kindlin-2是黏附蛋白相关因子，其能够通过影响肿瘤细胞的上皮-间充质转化，促进肿瘤细胞浸润深度的增加，并提高肿瘤细胞的变形能力，从而促进恶性肿瘤的发生[12]。相关研究已经探讨了SKP2蛋白的表达与妇科恶性肿瘤的关系[13]，但是，对于前列腺癌组织中SKP2、kindlin-2蛋白表达情况的分析不足。本研究发现，前列腺癌患者前列腺癌组织中kindlin-2、SKP2蛋白的阳性表达率均明显高于前列腺良性增生患者的前列腺良性增生组织（P＜0.01），提示SKP2、kindlin-2蛋白的阳性表达在前列腺癌的发生、发展过程中具有重要的作用。分析其基础方面的原因，考虑与以下病理性改变有关[14-154]：①SKP2表达水平的升高能够影响细胞周期依赖性蛋白激酶的激活，导致肿瘤细胞G1/S期细胞的比例上升；②kindlin-2蛋白表达水平的升高能够影响肿瘤细胞内NF-κB信号通路的激活，提高前列腺上皮移行细胞异常裂变的风险。廖顺鸿[16]发现，相比于良性前列腺组织，在前列腺癌患者中，SKP2的阳性表达率明显升高；在合并明显泌尿系统转移的患者中，SKP2的阳性表达率更高。通过探讨SKP2、kindlin-2蛋白的表达情况与前列腺癌患者临床特征的关系，可以发现在临床分期较晚、N1期或者Gleason评分较高的患者中，kindlin-2蛋白的阳性表达率较高，提示kindlin-2蛋白的表达与前列腺癌的发生密切相关，这主要是由于Kindlin-2蛋白阳性表达率的升高能够促进肿瘤细胞上皮-间充质转化的发生，增加浸润深度和扩大浸润范围，加剧临床分期的进展。同时，kindlin-2还能够提高前列腺癌移行上皮细胞黏附淋巴结组织的能力，进而促进淋巴结转移的发生。另外，SKP2蛋白的表达情况可能与前列腺癌患者的TNM分期、PSA水平、Gleason评分有关；其中，在PSA水平较高的患者中，SKP2蛋白的阳性表达率高，这主要是由于PSA水平越高，肿瘤细胞的增殖速度越快，SKP2蛋白的合成和释放越明显。

综上所述，在前列腺癌患者的前列腺癌组织中，SKP2、kindlin-2蛋白的阳性表达率均明显上升，同时，SKP2、kindlin-2蛋白的表达与前列腺癌患者的临床特征密切相关。本研究的局限性在于未对SKP2、kindlin-2蛋白的表达情况与前列腺癌患者预后的关系进行探讨，因此，后续研究将扩大样本量进一步探讨SKP2、kindlin-2蛋白在前列腺癌临床诊疗过程中的应用价值。