SPF金黄地鼠乳汁成份分析

夏 爽，范方玲，甘 露，夏 放

(成都生物制品研究所有限责任公司，成都 610023)

金黄地鼠(golden hamster;Mesocricetusauratus)又称叙利亚地鼠，毛色呈金黄色，成年体重120～150 g左右，染色体22对。金黄地鼠作为常用实验动物，在医学动物实验研究中的作用越来越受到重视，使用量仅次于小鼠、大鼠和豚鼠而居啮齿类第4位[1]。金黄地鼠的用途主要在三个方面，首先是对可诱发肿瘤的病毒很易感，肿瘤组织接种到口腔颊囊中易生长，也便于观察，同时还是能够诱发胰腺癌的唯一动物模型。故成为肿瘤学研究中最常用的动物；第二， 金黄地鼠常年发情，妊娠期短，性成熟早，繁殖传代快，发情周期准确，特别适用于生殖生理研究；第三，金黄地鼠组织细胞体外培养容易建立二倍体细胞株，特适合组织培养研究。肾细胞可被做成细胞培养物接种病毒，用以分离或制备疫苗；为了长期保持已有SPF金黄地鼠种群的质量优势，最大限度降低种群被污染的风险，为此需要建立一支无菌金黄地鼠种群，可以通过剖腹产技术，由无菌金黄地鼠代乳或者将无菌金黄地鼠直接降级为SPF金黄地鼠，从而避免种群由于污染而面临毁灭的危险。无菌金黄地鼠还可作为某些人类肠道疾病的动物模型，在生物医学研究领域有着不可替代的价值[2]。本文对金黄地鼠乳汁的主要成份进行测定，并与牛乳、人乳及婴儿配方奶的主要成分进行比较，为下一步创建无菌金黄地鼠种群的人工哺乳工作及配方乳的配制工作提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 实验动物

SPF级金黄地鼠种群来自成都生物制品研究所有限责任公司[SCXK(川)2016-126]，分批选取60只分娩后(1～10 d)的哺乳期雌鼠。动物饲养间为C级屏障系统[SYXK(川)2016-090]，温度控制范围(20～26)℃，相对湿度40%～70%，日光照12 h，饲养间内保持清洁、安静、通风良好，定期消毒。金黄地鼠全价颗粒饲料，主要营养成份符合国家实验动物配合饲料标准GB14924.1-2001和GB14924.3-2010，怀孕哺乳期间自由采食。本实验遵循实验动物使用的3R原则给予人道主义关怀。

1.2 实验方法

1.2.1 地鼠乳汁的采集

每批选取10只分娩后(1～10 d)的哺乳期雌鼠，先将幼崽与母鼠分笼饲养4 h以上，保持母鼠水料充足。4 h以后给母鼠注射3%戊巴比妥钠每只0.6 mL，后继续注射兽用缩宫素(宁波市三生药业有限公司，2 mL：每支10单位)每只0.3 mL。待母鼠完全麻醉处于放松状态后，暴露乳头，用温水清洁乳头皮肤并轻柔按摩，用自制电动吸奶装置收集乳汁，隔日1次,连续3～5次，每只金黄地鼠采取乳汁总量约6～10 mL，每次采集完毕立即冻存于-26℃保存备用。

1.2.2 检测方法

将所冻存的金黄地鼠乳汁(混合样品)低温运送至广州金域医学检验中心有限由该中心按照国家标准的方法进行检测，其中粗蛋白：参照GB/T 6432-1994 7.2；粗脂肪：参照GB/T 6433-2006；乳糖：参照GB/T 5413-2010第二法；灰分：参照GB/T 5009.4-2016第一法；水分：参照GB/T 5009.3-2016第一法；PH:参照GB/T5009.237-2016；钾、锌、锰、钙、铁、钠、铜、镁、铝：参照GB/T5009.268-2016第一法；磷：参照GB/T 5009.87-2016第一法；氟：GB/T 5009.18-2003第三法；维生素C:参照GB/T 5009.86-2016第一法；维生素K1:参照GB/T 5009.158-2016第一法；维生素A参照GB/T 17817-2010第一法；维生素D:参照GB/T 5009.82-2016第四法；维生素E:参照GB/T 17812-2008第一法；维生素B1:参照GB/T 5009.84-2016第一法； 维生素B2:参照GB/T 5009.85-2016第一法；维生素B6:参照GB/T 5009.154-2016。

1.3 数据处理

所有数据均采用国际标准单位换算。

2 结果分析

2.1 金黄地鼠乳汁成分

金黄地鼠乳汁由水分和总干物质组成，其中总干物质中又包括了脂肪、蛋白质、乳糖、矿物质及维生素等[3](表1)。金黄地鼠乳水分含量86.9%、脂肪2.4%、蛋白质6.95%、乳糖2.61%、灰分0.83%(表1)。

2.2 金黄地鼠乳成分分析

金黄地鼠乳和牛乳、人乳的主要成份十分相似，都是由水分、脂肪、蛋白质、乳糖、钙、磷、钾、钠、镁、铜、锌等物质构成[4]。本次参考的婴儿配方奶粉为荷兰生产的海普诺凯婴儿配方奶粉(0～6个月龄适用)，金黄地鼠乳中蛋白质含量明显高于牛乳、人乳及婴儿配方奶粉，分别为牛乳的1.66倍，人乳的3.52倍，婴儿配方奶粉的4.63倍；金黄地鼠乳中脂肪含量低于牛乳和婴儿配方奶粉，仅为牛乳的35.6%，婴儿配方奶粉的68.4%，与人乳接近；金黄地鼠乳中乳糖含量最低，仅为牛乳的58.7%，人乳的41.4%，婴儿配方奶粉的18.5%；金黄地鼠乳微量元素中钾、钠、铜锌的含量明显高于牛乳、人乳及婴儿配方奶粉；维生素B2、维生素B6的含量也明显高于牛乳、人乳及婴儿配方奶粉，具体参见表2。

表1 金黄地鼠乳主要成份含量表

表2 金黄地鼠乳，牛乳、人乳和婴儿配方奶粉主要营养成分

3 讨论

金黄地鼠在动物模型建立以及疫苗制造过程中的用途越来越广泛，为进一步拓展金黄地鼠的应用范围，计划建立无菌金黄地鼠种群。建立无菌金黄地鼠种群的必要性：可以长期保持已有SPF金黄地鼠种群的质量优势，防止和避免SPF金黄地鼠种群受到污染而种群毁灭的危险；可以实验性用于乙脑等疫苗的生产，以克服因SPF金黄地鼠携带菌污染细胞培养过程；作为人类疾病动物模型的材料，可用于多种人类疾病动物模型的建立和肠道菌群的研究。培育无菌动物通常采用无菌剖腹产方法，然后用配方乳或代乳喂养。乳汁是乳腺在受神经和内分泌的调节下，肠内吸收的物质与血液之间的过滤，提取分离而生成，对自然环境中培育新生子代的成活率起到关键的作用[8]。本文对金黄地鼠乳汁的主要成分进行检测，发现与人乳、牛乳、婴儿配方奶粉的主要营养成分十分相似，均由水、脂肪、蛋白质、乳糖、矿物质及维生素等组成，初步弄清金黄地鼠乳的主要成份及含量。并与牛乳、人乳及婴儿配方奶粉的主要成分比较，由于哺乳动物物种特性的差异，金黄地鼠乳汁与牛乳、人乳及婴儿配方奶粉在成分含量上还是存在明显差异；同时可以根据金黄地鼠乳汁高蛋白、低脂肪和低乳糖的特点指导人工乳配方成分的调制，以提高人工喂养仔鼠的成功率，为建立无菌金黄地鼠种群提供科学依据和基础保障。

注：金黄地鼠是仓鼠科仓鼠亚科金仓鼠属动物，在公开出版物中使用仓鼠作为名称更为科学。但鉴于目前我国实验动物国家标准中提到的动物的种类都是地鼠，作为专业人员能够清楚该物种在动物分类中地位，并不妨碍科学研究的成果和使用，故本文在发表时仍沿用“金黄地鼠”，待国标修订后再统一命名为“仓鼠”。