湖北省武汉市某门诊猫传染性腹膜炎病例统计分析

唐小娟 ，王 姗 ，尹伊娅 ，胡长敏 ，2，丁明星 ，2，陈建国 ，2，韩 丽 ，2

（1. 华中农业大学动物医学院，湖北武汉 430070；2. 华中农业大学动物医院，湖北武汉 430070）

猫传染性腹膜炎（Feline infectious peritoniti，FIP）是由猫传染性腹膜炎病毒（Feline infectious peritonitis virus，FIPV）引起的一种慢性、渐进性、致死性猫科动物传染病，以腹膜炎、大量腹水积聚或各脏器出现肉芽肿病变以及高致死率为主要临床特征[1]。此病主要经呼吸道传播，也经消化道及昆虫媒介传播。FIPV主要感染0.5～5岁的猫，1岁以下幼猫易感性更强，纯种猫、混养猫及流浪猫更易感。该病有的呈急性暴发，常发生于幼猫，有的呈慢性，病程可持续数周，甚至达4个月之久。感染病例即使获得良好的治疗，其死亡率也非常高[2]。FIPV在分类上属于套式病毒目（Nidovirus）冠状病毒科（Coronaviridae）冠状病毒属（Coronavirus），与猫肠道冠状病毒（FECV）同属于猫冠状病毒（FCoV）[3]。FIPV为单股正链、不分节段的RNA病毒，病毒粒子呈螺旋状对称，有囊膜，囊膜表面有花瓣状纤突，在电子显微镜下呈日冕状[4]。FIPV编码4 种主要结构蛋白，即刺突蛋白（S蛋白）、膜蛋白（M蛋白）、小包膜蛋白（E蛋白）和核衣壳蛋白（N蛋白）[5]。1963年Holzworth 在美国首次报道本病，1977年确定该病病原为冠状病毒[6]。目前已报道的检测FIPV方法有血清学检测、RTPCR、核酸探针检测、基因芯片检测等[7]。目前尚无有效疫苗和特效药物来进行FIP防控[8]，因此了解各地FIPV流行特征，对于该病防控具有重要意义。华中农业大学动物医院是武汉市极具代表性的动物医院，其就诊病例范围覆盖了武汉市各个地区。因此，本研究以华中农业大学动物医院门诊病例为代表，对2017年11月至2018年9月的门诊病例进行FIP检测分析，以期为了解该病的流行特点及其临床防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要仪器

高速冷冻离心机：Eppendorf；核酸扩增仪：博日科技有限公司生产；核酸电泳系统：北京六一公司生产。

1.2 主要试剂

RNAiso Reagent：TaKaRa公司产品；ExTaq Buffer、dNTPs、ExTaq DNA 聚 合 酶、DL-2000 DNA Marker：宝生物工程（大连）有限公司产品；猫传染性腹膜炎抗原试纸条：韩国安捷公司生产。

1.3 病料采集

用棉签从直肠或从新鲜粪便中直接取样，浸入样品稀释管，并搅拌10次，盖紧盖子并混匀3～5次，静置1 min，然后迅速送往实验室检测。2017年11月至2018年9月，共采集1 036份临床疑似患病猫粪便样品。

1.4 临床诊断

病猫主要表现为渗出性和非渗出性两种类型。渗出性表现为：病猫食欲减退，精神极度沉郁，体温升高，呼吸急促，体重较轻，腹部明显膨大，触诊腹部无痛感，但有明显波动感，血液白细胞总数增加等。非渗出型主要表现为眼、中枢神经、肾脏和肝脏损伤：眼角膜水肿，眼房液变红，眼前房有纤维蛋白凝块；后驱运动障碍，背部痉挛；肝脏黄疸，肾功能衰竭或肿大。

1.5 样品检测

1.5.1 快速检测 将所采集的粪便样品，采用韩国安捷公司生产的猫传染性腹膜炎抗原试纸条进行检测，按厂家产品说明书进行操作。具体步骤如下：取出试纸平放于宽敞干燥的操作台面，用提供的吸管小心吸取样品上清（不要将粪便颗粒吸取出来），并用滴管向样品孔精确垂直加入4滴混合液，5～10 min后判断结果。C线（质控线）为红色，T线为检测线。判断标准：T线为红色，判断为阳性，否则为阴性。若C线不出现颜色，表示结果无效，应重新检测。

1.5.2 RT-PCR检测 根据GenBank中的FIPV S基因核酸序列，用Primer 5.0软件设计FIPV鉴定引物，扩增的片段长度为705 bp（FIPV-S-F：5′-CACTYAATGCHTWTGTGTCTCARAC-3′；FIPV-S-R：5′-GCCACACATACCANGGCCATTTTAC-3′）。引物由北京奥科鼎盛生物科技有限公司合成。将来源猫FIP临床症状明显，但FIPV抗原快速诊断试纸条检测为阴性的样品以及30份阳性样品，采用PCR方法复检：将所采集的样品按照RNAiso Reagent使用说明书进行病毒基因组提取，再按程序进行PCR扩增（94 ℃预变性5 min，94 ℃变性 30 s，50 ℃退火 30 s，72 ℃延伸 45 s，35个循环，最后72 ℃延伸10 min），对扩增产物使用琼脂糖电泳方法进行鉴定。

2 结果与分析

2.1 总体情况

本研究对华中农业大学动物医院2017年11月至2018年9月的1 036份就诊猫粪便样品，采用FIPV抗原快速诊断试纸条检测，检出阳性61份，阳性检出率为5.9%（61/1 036）。随机选取30份快速诊断试纸条检测为阳性的病料，利用PCR复检，结果仍为阳性。对来源猫临床症状明显，但抗原快速诊断试纸条检测为阴性的样品，进行PCR复检，结果仍为阴性。

2.2 时间分布

对2017年11月至2018年9月各月份的FIPV阳性病例进行统计，发现FIP的季节性特征并不明显，大部分月份的阳性检出率在6.0%～8.0%之间。2018年1月的阳性检出率最高，为13.4%，2017年11月、12月和2018年5月的阳性检出率较低，在3.0%左右（表1）。

表1 各月份就诊病例的FIPV检测结果统计

2.3 群间分布

2.3.1 品种 本研究对就诊猫品种进行了相关分析，发现FIPV阳性病例中，英国短毛猫占比最高，为41.7%，其次是田园猫和美国短毛猫，分别为23.3%和11.7%。这3种猫的阳性数量占总阳性数量的76.7%（图1），表明这3种猫对FIPV易感。

图1 不同品种门诊猫的FIPV阳性数量占比

2.3.2 性别、年龄 本研究对就诊阳性猫按性别进行统计，发现雄性猫43只，占比70.0%，而雌性仅18只，占比30.0%。对就诊阳性猫按年龄进行统计，发现阳性病例主要为1岁以下的幼猫，占比72.1%，1～3岁的占比21.3%，而3岁以上的占比6.6%（表2），说明阳性病例中以幼猫为主。

表2 不同年龄门诊猫的FIPV阳性数量统计

3 讨论

本研究以华中农业大学动物医院的门诊病例为代表，对2017年11月至2018年9月的猫FIPV阳性病例进行统计分析，发现阳性检出率为5.9%。该检测结果在一定程度上反映了武汉市乃至全国的FIP流行情况，关于其真实流行情况，需要进行更加系统全面的流行病学调查才能确定。

时间分布分析发现，该病的季节性特征并不明显，大部分月份的阳性检出率在6.0%～8.0%之间。2018年1月的阳性检出率最高（13.4%），而2017年11月、12月和2018年2月、5月的阳性检出率较低，其原因可能与临床就诊病例数量偏少有关，也可能与5月份武汉市气候适宜，适合幼猫的成长和护理有关，其真正原因需进行深入探究。此外，该病的暴发是否受地域差异、气候差异、饲养规模和饲养习惯等因素的影响，也需要进行后续系统调查。

群间分布分析发现，英国短毛猫、田园猫和美国短毛猫以及雄性猫的阳性占比较高。由于本研究仅对一家动物医院的门诊病例进行统计，也未对猫品种进行阳性检出率对比，仅统计分析了阳性病例中的占比情况，其结果并不能说明该类猫对FIPV最易感，只能表示该类猫受FIPV影响较严重。雄性猫的阳性占比明显高于雌性，这与王杰等[9]报道的结果一致，这很有可能与雄性猫的饲养率高于雌性，且雄性猫的活动性在一定程度上高于雌性猫有关。英国短毛猫、田园猫和美国短毛猫阳性占比较高，可能与此类品种猫饲养数量偏高有关。此后需要结合各种猫的流行病学调查，进一步确定该病发病率与性别、品种之间的关联性。

检测结果显示，1岁以下幼猫病例数量占比较高，从某种意义上说明幼猫对此病较易感，这与FIP的流行特点一致，也与吕艳枝等[10]、张丽等[11]的研究报道相一致。其原因可能与幼龄猫抵抗力低有一定关系，因此临床上要特别注意幼猫的FIP防治。