复方多花黄精混合提取物的降血脂作用

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(1.中国医学科学院药用植物研究所丽水研究中心,浙江丽水 323000;2.丽水市林业科学研究院，浙江丽水 323000；3.浙江维康药业股份有限公司,浙江丽水 323000)

高脂血症(hyperlipidemia,HLP)是动脉粥样硬化、心脑血管疾病等发病的主要诱因[1],并呈年轻化趋势,严重威胁人类的健康和生命。中医认为,产生高脂血症的原因除了饮食不当,胆固醇、饱和脂肪酸摄入较多外[2],中年以后肾气渐衰,肝阳上亢,脾胃输布功能失调,湿热郁结,痰浊内生是主要病因。西药降血脂副作用比较大,因此利用中草药降血脂一直备受关注。以制何首乌、枸杞子、黄精、山楂复方提取物为主要成分的降脂灵片,具有补肝益肾、养血明目功效,用于肝肾不足型高血脂症[3];复方青钱柳茶水提取物可显著降低血清总胆固醇TC、血清甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)[4];精制山荷降脂方对高脂血症具有显著的治疗效果[5]。

复方多花黄精冲剂以多花黄精为主药,以枸杞、荷叶、山楂、决明子4种药食同源药材为辅药。多花黄精为中药材黄精基源植物之一,具有补气养阴、益肾、健脾、润肺等功效,可用于脾胃气虚、胃阴不足、肺虚燥咳、劳嗽咳血、精血不足、腰膝酸软、须发早白、内热消渴等[3],其化学成分主要为黄精多糖、甾体皂苷等[6],具有抗肿瘤[7]、降血脂[8]、抗病毒[8]、抗艾滋病[9-10]、抗炎[11]、提高学习记忆能力[12]等药理活性;枸杞子养肝、滋肾、润肺,与黄精配伍降脂效果明显[13];荷叶有清暑利湿、升发清阳、凉血止血等功效,降血脂、降胆固醇和减肥作用显著[14];山楂消食健胃、化浊降脂,与决明子按一定比例3∶1脂效果最好[15]。该配方具有补肝、益肾、健胃、祛湿等功效,克服了多花黄精滋腻助湿之弊,民间临床已有应用,降脂效果非常明显,但无现代药理学理论支撑。因此,对其进行系统的药理作用研究,阐明其药理作用及机制,具有十分重要的意义。

本试验采用高血脂大鼠模型,评价复合多花黄精提取物对大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)的影响,为其产品的深度开发和临床应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

总胆固醇测定试验剂盒(批号07284/00002745)、甘油三酯测定试剂盒(批号07258/00002453)、高密度脂蛋白胆固醇测定试验剂盒(批号21052/00002947)和低密度脂蛋白胆固醇测定试验剂盒(批号21550/00002950) 德国DiaSys Diagnostic Systems GmbH(进口分装);胆固醇(批号Z95506)和胆酸钠(批号C5654) 山东西亚化学工业有限公司;白砂糖(批号20140610) 杭州雅丽食品有限公司;辛伐他汀(20 mg/片,批号M016763) 杭州默沙东制药有限公司;SD大鼠雄性,清洁级,体重(206.0±10.3) g 浙江省实验动物中心(实验动物生产许可证号:SCXK(浙)2014-0001);多花黄精、荷叶、枸杞子、山楂和决明子 浙江维康药业股分有限公司;大鼠全价营养颗粒饲料 浙江省实验动物中心提供。

日立7020全自动生化分析仪 日本日立株式会社;YJ501S超级恒温水槽 上海跃进医疗器械厂;L-550离心机 长沙湘仪离心机仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 复方多花黄精混合提取物(FHT)的制备 FHT由丽水市林业科学研究院根据以下配方和优化提取方法制得。配方:多花黄精,荷叶、枸杞子、山楂、决明子,药材总量1360 g。其中:多花黄精、枸杞子采用水提,药材共550 g,烘干,50目粉碎,浸泡30 min,加热回流水提2 h,过滤,经旋转蒸发仪减压浓缩(70 ℃,0.08 Mpa)至浸膏状,转置于60 ℃干燥箱干燥2.5～3.0 h,获干浸膏粉99.78 g,黄精多糖含量约64.36%;荷叶、山楂、决明子利用醇提,药材共810 g,烘干,100 目粉碎,酒精浓度75%下浸提2 h,过滤,经旋转蒸发仪减压浓缩(50 ℃,0.08 Mpa)至浸膏状,转置于60 ℃干燥箱干燥2.0～2.5 h,,获干浸膏粉134.71 g,荷叶碱含量0.3417 mg/g。提取液旋转蒸发仪减压浓缩期间需适时调整控制压强与蒸馏瓶旋转速度。上述两种干粉混合均匀,得到FHT 234.49 g,即1 g相当于5.8 g生药材。

1.2.2 造模及给药方法 高血脂动物模型建立:SD大鼠68只,饲养于清洁级动物房内,温度18～26 ℃,相对湿度50%～60%,光照明暗交替各12 h,通风22次/h。大鼠按体重随机分成2组,一组58只,用于高血脂动物模型,给予定制的高脂饲料(维持饲料中添加20.0%蔗糖、15.0%猪油、1.2%胆固醇、0.2%胆酸钠)喂养造模;另一组10只,为空白组,给予大鼠全价营养颗粒饲料。每周称体重1次。造模大鼠给予高脂饲料第一周后,各组大鼠眼内眦采血,采血后尽快分离血清,测定血清TC、TG水平。剔除3只血清TG水平低于空白组平均TG水平的大鼠后,将55只模型大鼠用于降血脂试验。

给药方法:55只造模大鼠按血清总胆固醇水平随机分成5组,分别为黄精混提物高、中、低剂量组,辛伐他汀阳性组,模型组。另10只空白组(对照)继续保留。分组后,黄精混提物高、中、低剂量组每天经口给予黄精混提物30、15、7.5 g生药/kg,“生药”均为原药材的量,指按照FHT制备后换算成生药材的量;辛伐他汀阳性组每天经口给予辛伐他汀2 mg/kg,给药体积均为1.5 mL/100 g体重,模型组和空白组给予等体积蒸馏水,连续给予42 d。空白组继续给予大鼠全价营养颗粒饲料,模型组、阳性组、黄精混提物高、中、低剂量组继续给予高脂饲料。血清生化测定在给药1 h后进行,各大鼠眼内眦采血,采血后尽快分离血清,测定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C。

FHT配制:取345 g FHT药粉,加蒸馏水至1000 mL配成0.345 g/mL溶液,用于高剂量组给药,对倍稀释后的药液用于中剂组给药,再对倍稀释后的药液用于低剂量组给药。

1.2.3 检测指标 每周记录大鼠体重1次;采用全自动生化分析仪每两周测量血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平1次。

1.3数据处理

所有数据统计均用SPSS 16.0软件进行。计数资料采用卡方检验。计量资料进行描述性统计和方差分析。组间对比分析用单因素方差分析方法(ANOVA),组间先进行方差齐性检验,以0.05作为检验水准。方差齐时,多个试验组之间的相互比较用LSD检验;方差不齐时先对原始数据进行数据变换,再对变换后的数据进行方差分析。如变换后的数据仍不符合方差齐性要求,改用非参数两个独立样本(Nonparametric test-2 independent samples)的mann-whitney-U检验。p<0.05时为有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 复方多花黄精混提物对大鼠体重的影响

黄精混提物对大鼠体重的影响结果见表1。试验过程中,给药第五周辛伐他汀阳性组有1只大鼠死亡,死亡原因不明。各组大鼠每周体重原始数据符合方差齐性要求(p>0.05)。各组大鼠体重与模型组比较的均值差经LSD检验,黄精混提物高、中、低剂量组对大鼠体重均没有显著影响(p>0.05),辛伐他汀阳性组于给药第二周体重显著低于模型组(p<0.05),其它各时间点与模型组比较无显著差异(p>0.05)。由此可见,黄精混提物在降低血脂的同时,并未对大鼠体重造成显著影响。

表1 黄精混提物对大鼠体重的影响Table 1 Effects ofPolygonatum cyrtonemaprescription extracton body weight of

2.2 分组后各组大鼠血清TC、TG水平

分组后各组大鼠血清TC、TG水平结果见表2。分组后各组大鼠血清TC原始数据符合方差齐性要求(p>0.05)。经LSD检验,模型组大鼠血清TC水平极显著高于空白组(p<0.01),说明模型成立;模型组与各给药组比较均无显著差异(p>0.05),说明分组合理。经LSD检验,分组后各组大鼠血清TG原始数据不符合方差齐性要求(p<0.05),对原始数据进行平方根变换后符合方差齐性要求,变换后模型组大鼠血清TG数据极显著高于空白组(p<0.01),说明模型成立;模型组与各给药组间均无显著差异(p>0.05),说明分组合理。

表2 分组后各组大鼠血清TC、TG水平Table 2 The level of serum TC and TG in each group after

2.3 复方多花黄精混提物对大鼠TC水平的影响

黄精混提物对高血脂大鼠TC的影响结果见表3。各组大鼠给药后第二周、第四周、第六周TC原始数据均符合方差齐性要求(p>0.05)。给药二周后,黄精混提物高剂量组TC显著低于模型组(p<0.05),辛伐他汀阳性组和空白组TC极显著低于模型组(p<0.01)。给药四周后,辛伐他汀阳性组和空白组TC极显著低于模型组(p<0.01),黄精混提物高剂量组、中剂量组TC显著低于模型组(p<0.05)。给药第六周后,黄精混提物高、中剂量组TC均极显著低于模型组(p<0.01)，而低剂量组显著低于模型组(p<0.05),辛伐他汀阳性组TC极显著低于模型组(p<0.01)。说明黄精混提物30 g生药/kg和15 g生药/kg均能显著降低TC水平。中医认为,肾气不足、肝阳上亢、脾胃功能失调、湿热郁结是引起高血脂的主要病因[2]。民间临床用于降低血脂的复方黄精配方由黄精、枸杞子、荷叶、山楂、决明子5味药材组成,本试验证实了此配方降低血脂的效果。

表3 黄精混提物对高血脂大鼠TC的影响Table 3 Effects of Polygonatum cyrtonema prescription extract on serum cholesterol in hyperlipidemic

2.4 复方多花黄精混提物对大鼠血清TG水平的影响

黄精混提物对高血脂大鼠血清TG的影响结果见表4。各组大鼠第二周、第四周、第六周血清TG原始数据符合方差齐性要求(p>0.05)。给药二周后,辛伐他汀阳性组和空白组血清TG极显著低于模型组(p<0.01),黄精混提物高剂量组、中剂量组血清TG与模型组之间均有极显著差异(p<0.01)。给药第四周后,空白组及辛伐他汀阳性组血清TG极显著低于模型组(p<0.01),黄精冲剂高剂量组、中剂量组血清TG均显著低于模型(p<0.05)。给药第六周后,黄精混提物高、中剂量组、辛伐他汀阳性组、空白组血清TG均极显著低于模型组(p<0.01)。说明黄精混提物30 g生药/kg和15 g生药/kg均能显著降低血清TG水平。本实验选用的是混合型高脂血症动物模型,对动物体重影响不大。从表4可知,实验期间模型组和各给药组大鼠血清TG水平均有所下降,可能与动物的适应性有关,故高血脂动物模型试验时间一般不超过8周。

表4 黄精混提物对高血脂大鼠血清TG的影响Table 4 Effects of polygonatum cyrtonema prescription extract on serum triglyceride in hyperlipidemic

2.5 复方多花黄精混提物对大鼠血清HDL-C水平的影响

黄精混提物对高血脂大鼠血清HDL-C水平的影响结果见表5。各组大鼠第二周、第四周、第六周血清HDL-C原始数据符合方差齐性要求(p>0.05)。给药第二周后,辛伐他汀阳性组HDL-C水平显著高于模型组(p<0.05)。给药第四周后,辛伐他汀阳性组、空白组及黄精混提物高剂量组血清高密度脂蛋白均极显著高于模型组(p<0.01),黄精混提物中剂量组血清HDL-C均显著高于模型组(p<0.05)。给药第六周后,黄精混提物高剂量组、辛伐他汀阳性组及空白组血清HDL-C极显著高于模型组(p<0.01),黄精混提物中、低剂量组与模型组比较没有显著差异(p>0.05)。说明黄精混提物30 g生药/kg能显著升高血清HDL-C水平。

表5 黄精混提物对高血脂大鼠血清HDL-C水平的影响Table 5 Effects of Polygonatum cyrtonema prescription extract on serum high-density lipoprotein levels

2.6 复方多花黄精混提物对大鼠血清LDL-C水平的影响

黄精混提物对高血脂大鼠血清LDL-C水平的影响结果见表6。各组给药第二周、第六周大鼠血清LDL-C原始数据符合方差齐性要求(p>0.05),各组给药第四周大鼠血清LDL-C原始数据不符合方差齐性要求(p<0.05),原始数据经平方根变换后符合方差齐性要求(p>0.05)。给药第二周后,除空白组外,其它各给药组血清LDL-C与模型组比较均没有显著差异(p>0.05)。给药第四周后,黄精混提物高、中剂量组及空白组血清LDL-C均极显著低于模型组(p<0.01),而辛伐他汀阳性组显著低于模型组(p<0.05)。给药第六周后,黄精混提物高剂量组、辛伐他汀阳性组和空白组LDL-C与模式组之间均有显著差异(p<0.05)。说明黄精混提物30 g生药/kg能显著降低血清LDL-C水平。

表6 黄精混提物对高血脂大鼠血清LDL-C水平的影响Table 6 Effects of Polygonatum cyrtonema prescription extract on serum low density lipoprotein levels

3 结论

民间临床用于降低血脂的复方黄精配方由黄精、枸杞子、荷叶、山楂、决明子5味药食同源药材组成。本文制备了复方多花黄精配方的混提物,并通过高血脂大鼠模型评价发现,复方多花黄精混提物(30 g生药/kg和15 g生药/kg组)从给药第二周起就能明显降低血清TG水平,给药第四周后既能降低血清TG水平,也能降低TC水平和血清LDL-C水平,同时能明显升高血清HDL-C水平,其部分指标甚至优于阳性药物降脂灵,说明服用复方多花黄精混提物对高血脂人群是有益处的,也证实了民间复方黄精配方的降脂效果。