涂片检查在细菌培养中的应用

李晓娟

（南阳胸科医院，河南 南阳 473000）

在微生物检验中，由于培养需要时间长，而涂片简单快速，因此形态学检查就成为临床快速获得病原学依据的方法之一。通过涂片可以了解标本的合格性，炎症类型（感染性、变态反应性等）以及导致感染的微生物种类和感染类型（单一感染还是混合感染），分离菌的宿主反应性（感染？定植？正常菌群？）。并且可以通过形态及时为临床提供治疗依据，达到抗生素的合理利用，减少耐药菌株的产生。细菌形态学是一种快速辅助诊断方法，在感染性疾病中的价值勿容置疑[1]。

表1 2016年1月至2017年7月标本

1 材料与方法

1.1 一般资料：收集2016年1月至2017年7月胸科医院培养标本，标本类型包括痰液、尿液、切口分泌物、胸腹水、脓液、胆汁、脑脊液共996例。

1.2 主要试剂及仪器：革兰染液，瑞氏姬姆萨染液，抗酸染液（珠海贝索公司），离心机（江苏江堰），显微镜（日本OLYMPUS）。

1.3 取材及制片：不同部位采取不同采集方法。参照《实用临床微生物检验与图谱》中，临床常见标本的采集运送及处理章节。

痰标本采用自然咳痰法、支气管镜采集法。尿液采用清洁中段尿采集法、导尿法。切口分泌物：首先用无菌生理清洗病灶表面的腐生菌，用无菌棉拭子先蘸少许无菌生理盐水，然后采取深部靠近正常组织部位的分泌物，置于装有1 mL无菌生理盐水的无菌拭子中。胆汁，胸腹水采用穿刺方法获取标本。非脓性的胸腹水采取增菌培养。

1.4 涂片染色及镜检：痰液标本用无菌生理盐水洗涤后接种涂片染色，分别进行革兰染色，瑞氏姬姆染色，抗酸染色；尿标本，切口分泌物，胆汁标本接种后剩余标本离心（3000 r/min 离心10 min），取沉渣涂片，进行革兰染色；脓性标本直接涂片革兰染色。各种染色方法参照说明书步骤操作。

2 涂片镜检结果

996例标本中，通过涂片发现不合格标本207例，不合格标本中痰占大多数。合格标本进行细菌培养，其中涂片和培养结果一致的标本数为742例，二者结果不一致的标本数47例。不一致结果中多见的是脓液。主要原因可能是不做厌氧培养导致厌氧菌不生长。见表1。

3 讨 论

涂片检查在细菌培养中占据着重要位置，没有涂片的细菌培养就如同盲人摸象。但是在日常微生物工作中，许多医院脱离涂片只看重培养，更有甚者连涂片也不做只做培养。最终导致的结果就是非致病菌当成致病菌处理，误导临床，增加患者负担，导致耐药菌株的产生，同时患者又得不到及时准确的治疗。

对于痰标本，涂片可帮助筛查不合格标本，对于不合格标本不用进行培养。对于合格的标本先接种再涂片，分别进行革兰染，瑞氏-姬姆萨染色，抗酸染色。如涂片未发现病原体，看到大量淋巴细胞应考虑为病毒感染等[2]。抗酸染色发现抗酸性杆菌，提示临床有可能是结核。涂片发现革兰阳性双球菌，矛尖相对，有荚膜，直接报告临床疑为肺炎链球菌感染.如果涂片见大量炎症细胞，革兰阴性细长杆菌（位于胞内），菌体外裹一层厚重的黏液质，疑似黏液性铜绿，及时通知临床经验用药的同时加用大环内酯类药物[3-4]。因为大环内酯类抗生素对细菌生物被膜有抑制作用，与其他体外药敏试验敏感的抗生素合用，对治疗产生生物被膜细菌所致的慢性感染有较好的疗效。如涂片并未发现它与多形核粒细胞（PMN）吞噬或伴行，应判断为定植，不做处理。

脓液标本，对于未开展厌氧培养的医院，涂片就显得尤为重要，因为正常情况下，封闭囊腔液多是需氧厌氧混和感染，单纯的需氧培养是发现不了致病菌的。但是我们可通过涂片提示临床是否有厌氧菌感染。如涂片革兰染色见到革兰阳性杆菌，直角分枝，成对，Y、V、T形短链或成簇，提示为放线菌感染。

尿液标本，如涂片见到3种菌并且有真菌孢子，首先考虑尿液来自尿袋，很多护士为了取样方便，直接从尿袋留取标本。

胆汁标本，首先涂片革兰染色观察标本的合格性，合格的标本用来做培养，不合格的直接弃之。如镜下观察有无蛋白凝块，有无白细胞裸核，看到这此成分，说明是一份合格标本，可以用来做培养并将涂片所见细菌依据形态第一时间通知临床，有助于临床经验用药。如涂片超过三种以上细菌，而且形态各异，比例上又接近粪便，那么提示这份标本很可能被肠内容物污染，没必要继续做下去，因为这样培养的结果是毫无意义的。

再者原始标本涂片所得到的信息要及时和临床沟通，因为人体体表与外界相通的器管很多。如泌尿生殖道、肠道、呼吸道等都存在着种类及数量不同的细菌，它们的存在与正常人体维持着正常的微生态环境。在日常的工作中我们要根据标本部位，涂片结果，培养结果综合分析才能得出正确结论。不结合涂片只看重培养，会使我们失去方向导致错误结果，还会导致人体正常微生态环境破坏，对患者反而不利，并且还可能造成肝肾等器管的损伤。对于培养出来的是否是病原菌，同样应该结合直接涂片分析。

由于形态学的特殊性，在微生物检验中它是最难的，没有任何捷径可走的，只能要求每一位从业者熟练基本功，多学，多看，及时总结经验。才能及时准确报告结果，为临床提供诊断依据。

综上所述，涂片在细菌培养中有着举足轻重的作用，没有涂片的培养是不可靠的，只有严格遵守涂片培养两结合的方法，才能把微生物检验做好做强。