经治HBV感染者的HBV基因分型及其对核苷类药物的耐药情况

李少燕 柳明波

(广西医科大学第十附属医院暨广西钦州市第一人民医院检验科，钦州市 535000，电子邮箱：315902139@qq.com)

HBV是一种高变异病毒，可由外界环境免疫压力和各种抗病毒药物诱导发生变异成为HBV突变株。HBV耐药是指在核苷酸类似物作用下，HBV P区药物靶点的某些位点发生改变，导致这种药物对HBV的抑制作用下降或消失[1]。目前，HBV基因共有A～H 8个基因型，其基因型呈地区性分布，其中中国、日本和越南等东南亚国家主要以B基因型和C基因型为主。近年的研究表明，不同基因型HBV的致病性存在差异，基因型与乙型肝炎的病程发展和预后有关[2-4]。因此，HBV基因分型及耐药检测均有助于HBV感染者治疗方案的制定与预后判断。本研究对335例HBV感染患者的HBV基因分型及HBV对核苷类药物的耐药情况进行分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 纳入2015年1月至2017年12月我院住院部及门诊感染科收治的335例HBV感染者。纳入标准：符合《慢性乙型肝炎防治指南》中HBV感染诊断标准[2]；均服用过核苷类似物或正在服用核苷类似物进行治疗；预计生存时间>3个月；资料完整；签署知情同意书。排除标准：初次应用抗病毒药物的患者；合并肾、心和肺功能严重障碍或不全者；精神障碍或意识障碍者；合并其他感染，如甲肝病毒、丙肝病毒和HIV感染者；药物、酒精性及自身免疫性等肝病患者；哺乳或妊娠期女性。335例HBV感染者中，男性185例，女性150例；年龄40～78(56.3±10.1)岁；其中HBV携带者33例，急性肝炎16例，轻度慢性肝炎54例，中度慢性肝炎71例，重度慢性肝炎22例，重型肝炎10例，肝硬化39例，肝癌或肝占位10例。

1.2 试剂和仪器 HBV基因分型PCR微板核酸分子杂交-乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测试剂盒(批号：H201709001)由亚能生物技术(深圳)深圳有限公司提供；DG-3022A型酶标仪为国营华东电子管厂生产，9700型基因扩增仪由美国PE公司生产，3130Xl测序仪由ABI公司生产。

1.3 检测方法 收集患者空腹外周血8 ml，常温放置20 min，离心后取血清，-20℃储藏备用。采用PCR-反向点杂交法，检测HBV-B、HBV-C、HBV-D 3种常见基因型，其中野生位点7个，突变位点16个；严格按照试剂及仪器的操作步骤进行检测。根据ABI公司3130Xl测序仪自带的耐药分析软件分析HBV对核苷类药物的耐药情况。

1.4 统计学分析 应用SPSS 23.0进行统计分析。计量资料以(x±s)表示；计数资料以例数(百分比)表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HBV基因型与临床分型 335例患者中，80例HBV-DNA阴性，255例HBV-DNA阳性。255例HBV-DNA阳性患者中，HBV基因型以C型为主，占71.4%(182/255)，B型占24.3%(62/255)，B/C混合型占1.6%(4/255)，D型占0.8%(2/255)，未分型占2.0%(5/255)。C基因型的HBV患者原发性肝癌和肝硬化发生率[21.4%(39/182)]高于B基因型HBV患者[9.7%(6/62)]，(χ2=4.246，P=0.039)。见表1。

表1 HBV基因型与临床分型[n(%)]

2.2 HBV核苷类药物的耐药情况 255例HBV-DNA阳性标本中共检出30例耐药株，耐药率为11.8%(30/255)；26例(10.3%)对多种药物耐药；29例(11.4%)对拉米夫定(lamivudine,LAM)耐药，14例(5.5%)对阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)耐药。见表2。

表2 HBV耐药株分布情况[n(%)]

注：LdT为替比夫定，ETV为恩替卡韦。

3 讨 论

HBV的基因型存在区域性差异，具有一定的地理分布区域规律。有学者报告，A型主要分布在西欧和北美[5]，其Aa亚型主要分布于非洲，Ae亚型主要分布于欧洲和美国[6]；B型和C型主要分布在亚洲东部[7]；D型最主要分布于欧洲南部和中东，是地中海地区和欧洲的优势基因型，但在亚洲也有病例报道[8]。既往文献报告我国主要以B型和C型为主，也有少量A型和D型及B/C混合型感染，其中北方华东地区以C型为多，南方以B型占优势[9-10]，但各省之间不完全相同[11-13]。本研究结果显示，HBV-DNA阳性患者的HBV基因型以C型为主，与上述文献结果不同，提示HBV优势基因型无严格的地域分布，可能与HBV自然感染史不同及病毒变异后进化的结果有关。

HBV不仅可以引起急慢性病毒性肝炎，而且还与肝硬化和肝细胞癌的发生、发展关系密切[7]。HBV感染的临床转归一方面取决于患者的年龄和免疫力[14]，另一方面也与感染病毒株的基因型种类密切相关[7]。有研究表明，与B基因型比较，感染C基因型的HBV更容易导致活动性肝病和肝病快速进展，以及更高的肝细胞癌发生率[7]。与携带C基因型者相比，携带B基因型的HBV患者的HBeAg阳性率更低，而HBeAg血清转换率更高[15]。有学者发现，与携带B基因型者相比，携带C基因型的慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA水平较高[16]，且易引起较重的肝损伤和肝纤维化[17]。本研究结果也显示，携带C基因型的HBV感染者的原发性肝癌和肝硬化发生率略高于携带B基因型者(P<0.05)。但本研究未分析基因型与血清标志物HBeAg的关系，以及基因型与年龄、肝功能等其他指标的联系，今后将进一步研究，这将有助于了解HBV基因型与临床类型、预后及治疗方法等方面的联系。

本研究结果显示，我院HBV-DNA阳性患者的耐药率达11.8%，与桂林地区的耐药率10.5%相似[4]，但低于解放军302医院的耐药率28.2%[3]，这可能是因为本院患者和桂林地区HBV感染者均来源于同一地区，基因变异情况类似。本研究中，HBV-DNA阳性患者对LAM有较高的耐药率，与有关桂林地区[4]及解放军302医院[3]的研究结果相似。LAM是治疗HBV感染常用的抗病毒药物，其具有较好的病毒学应答效果，但是随着治疗时间延长，病毒耐药突变的发生率较高[18]。此外，有研究表明LAM换用ADV患者的耐药突变检出率远高于LAM加用ADV患者，提示LAM联合ADV使用效果较好[19-20]。因此，在服用或换用核苷酸类似物前如有条件应该进行HBV多位点耐药基因突变检测。

综上所述，经治HBV感染者的基因分型以C型为主，且HBV耐药形势严峻，检测核苷酸类似物耐药对制定用药方案、改善患者预后及以减少或延缓耐药株产生有重要的意义。