基于清炒法对党参物性及有效成分含量变化的研究△

陈天朝，王娇，李瑞颖，贾晴晴，程思卿，马彦江

1.河南中医药大学 药学院，河南 郑州 450008；2.河南中医药大学第一附属医院 药学部，河南 郑州 450000；3.许昌市中医院 药学部，河南 许昌 461000

清·徐灵胎的《医学源流论》·方药·制药论记载：“或制其形，或制其味，或制其性，或制其质……”。说明古人已认识到炮制能改变中药的形、色、气、味，从而改变中药的性能。中药炮制包括水制、火制、水火共制等多种方法，尤其是火制(即清炒法)包括炒黄、炒焦、炒炭，是对饮片的直接加热处理，且工艺最简单、最基本[1-2]。多糖类药材党参为桔梗科植物党参的干燥根，具有补中益气、生津养血的功效[3]。其作为常用药材，在我国具有悠久的“药食两用”历史[4]。党参的炮制方法较多，有米炒，土炒，炒焦，炒炭，蒸制等。临床上使用炮制品也较多，如党参片，焦党参，炒党参，米炒党参，党参炭等[5-6]。基于上述，根据前期课题组研究基础，研究生药饮片-炒黄饮片-炒焦饮片-炒炭饮片的动态过程，集成中药宏观属性如中药饮片物性，分子属性大分子、小分子的量变为指标；通过研究控制炮制工艺技术参数，调整中药中成分的含量及其比例，确定其适宜的工艺技术参数。

1 实验仪器及材料

101AS-1型不锈钢数显电热鼓风箱(功率1.8 kw苏州江东精密仪器有限公司)、BSA224S-CW电子天平(德国赛多利斯)、KSY可控硅温控制器(沈阳节能电炉厂)、A-13箱式电阻炉(沈阳节能电炉厂)、CMAG HP7德国IKA加热板(上海子期实验设备有限公司)、电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司)、T11型智能滴定系统(上海晟声自动化分析仪器有限公司)、MH-500型可调式电热套(功率0.2 kw北京科伟永兴仪器有限公司)、FW-500高速万能粉碎机(北京科伟永兴仪器有限公司)、2015年版《中华人民共和国药典》药典筛(浙江上虞市道墟五四仪器厂)、研钵(江西景德镇)、UliMate 3000高效液相色谱仪(赛默飞公司)。

党参(批号：1804092)购自安徽普仁中药饮片有限公司，经陈天朝主任药师鉴定，符合2015年版《中华人民共和国药典》一部项下的各饮片来源规定；分析纯，党参炔苷(上海源叶生物科技有限公司，批号：203N8B47231，纯度≥98%)。

2 方法

2.1 饮片制备

根据前期预实验，选择炒黄、炒焦、炒炭三种炮制方法，根据饮片炮制的形、色、气、味、质确定炮制实验温度和时间，炮制工艺如下表1。

表1 不同党参炮制品对应炮制工艺

2.2 物料参数的测定

2.2.1 相对密度测定 用100 mL量筒，量取50 mL轻质液状石蜡，静置3 min，待凹液面稳定，用电子天平称取约5 g饮片物料，投入盛有已知体积的轻质液状石蜡的量筒中，静置3 min，读取体积，计算饮片物料相对密度。每种饮片平行测定三次，取平均值作为饮片的相对密度值[7]，如下表2。

(1)

通过SPSS相关性分析，相对密度与炮制工艺参数P(X1、X2)=0.101，可得出相对密度与炮制工艺之间无显著性差异。

2.2.2 氧化值测定 准确称取约5 g中药饮片和200 mL蒸馏水于500 mL圆底烧瓶，混合均匀后接入蒸馏装置，精确收集前50 mL馏分。用移液管准确移取10 mL馏分于滴定瓶内，加入5 mL H2SO4水溶液和10 mL 0.002 mol·L-1KMnO4溶液，振荡均匀后室温下反应30 min。加入5 mL 10% KI水溶液，滴加Na2S2O3标准溶液，使溶液由黄棕色或深黄色变成浅黄色时，加淀粉溶液为指示剂1 mL，用0.02 mol·L-1Na2S2O3标准溶液滴定至无色，记录消耗Na2S2O3标准溶液体积为A mL[8-9]。另以中药饮片等质量水代替样品重复操作进行空白试验，记录消耗Na2S2O3标准溶液体积为B mL，如下表3根据公式(2)计算氧化值Ox。

表2 不同党参炮制品相对密度测定结果

注：*表示P<0.05，差异显著；**P<0.01，差异高度显著；X1炮制温度；X2炮制时间。

(2)

式中：C为硫代硫酸钠标准溶液的浓度(mol·L-1)；200为样品体积(mL)；0.002为高锰酸钾溶液的浓度(mol·L-1)；V为样品蒸馏馏分的取样量(mL)；M1为称取样品的质量。

表3 不同党参炮制品氧化值测定结果

通过SPSS相关性分析，发现氧化值与炮制温度相关性P(X1)=0.047，可知氧化值与炮制工艺之间有显著相关性。

2.2.3 吸水率测定 称取约5 g中药饮片，精密称定置盛有100 mL纯化水的磨口锥形瓶中浸泡，分别在累积时间达到0、10、20、40、60、120、240、480、720、1440 min后用尼龙网过滤，测定原100 mL浸泡用水剩余体积。以浸泡用水体积几乎不再减少为时间节点，对饮片在此时间下测定，每种饮片平行测定3次，取平均值作为饮片吸水率，如下表4。

(3)

表4 不同党参炮制品吸水率测定结果

通过上述数据可知，运用SPSS软件分析，(P<0.05)吸水率与炮制工艺(X1、X2)有显著性，但在(P<0.01)时无显著性，可知吸水率与炮制工艺之间显著性不明显。

2.2.4 pH值测定 准确称取约5 g中药饮片，加水100 mL在室温条件下，2.2.3项下测定时间浸泡。取滤液，测定pH值，每种饮片平行测定三份，取平均值，作为该饮片pH值，如下表5。

表5 不同党参炮制品PH测定结果

通过SPSS分析，可知(P<0.01)时，炮制工艺与pH之间有显著性。

2.3 物料主成分含量测定

2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取党参炔苷对照品0.005 3 g，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成0.530 0 mg·mL-1的党参炔苷对照品溶液。

2.3.2 检测波长的选择 取适量党参炔苷对照品用甲醇配制溶液，以甲醇为空白，在190～600 nm波长范围内波长扫描。可知党参炔苷在268 nm处有最大吸收，故以此为检测波长。

2.3.3 色谱条件 色谱柱为Agilent ZORBAX SB-Aq(5 μm，4.6 mm×250 mm)柱，流动相为乙腈-水(体积比25∶75)，流速为1.0 mL·min-1，柱温25 ℃，检测波长268 nm，进样量5 μL。理论塔板数以党参炔苷计不低于5000。党参及各炮制品色谱图如下图1～5，色谱图分析结果见表6。

表6 不同党参炮制品色谱峰分析结果

注：“—”表示未测出该成分。

图1 党参炔苷对照品液相色谱图

图2 党参液相色谱图

图3 党参炒黄液相色谱图

图4 党参炒焦液相色谱图

图5 党参炒炭液相色谱图

由以上结果分析可知，可以通过4号峰有无来区分炒黄和生品，党参炒焦后出现了党参炔苷和3号峰消失，1、2号峰增大的情况，产生了新的4号峰。党参炒炭后，伴随着1、2、4号峰减小，产生5、6、7、8四个新的特征峰。

2.3.4 标准曲线制备 精密吸取党参炔苷对照品溶液0.08、0.18、0.375、0.75、1.5、2.5 mL置10 mL溶量瓶中，加甲醇定容，浓度分别为4.24、9.54、4.24、19.875、39.75、79.5、132.5 μg·mL-1对照品溶液；在波长268 nm下方法进样测定，记录色谱峰面积，以峰面积Y对进样浓度X(μg·mL-1)进行线性回归，得标准曲线方程，如下表7，图6。

表7 党参炔苷线性关系

图6 党参炔苷标准曲线图

通过分析得出党参炔苷峰面积Y与浓度X(μg·mL-1)线性关系为：Y=0.039 4X-0.043 2求得r=0.999 7说明党参炔苷在浓度4.24～132.5 μg·mL-1之间与其对应的峰面积线性关系良好。

2.3.5 精密度试验 分别取浓度为4.24、19.875、132.5 μg·mL-1对照品溶液，波长268 nm下连续进样5次，每次5 μL，计算RSD值，如下表8。

表8 党参炔苷测定精密度考察结果

由上表测定结果可知，在高、中、低三个剂量连续进样条件下，RSD值均小于3%，表明该仪器精密度良好。

2.3.6 稳定性实验 取党参生品供试品溶液，波长268 nm下分别于0、2、4、8、12、24 h后进样测定，得党参炔苷峰面积，计算其RSD值，如下表9。

由稳定性实验测定结果可知，RSD值为0.79%，表明通过此法处理的供试品，在24 h内稳定性良好。

表9 党参样品中党参炔苷稳定性测定结果

2.3.7 重复性实验 精密称定党参生品细粉5份，加入甲醇25 mL，超声处理30 min，3000 r·min-1离心20 min，过滤后上清液用甲醇定容于25 mL备用，制备溶液5份，268 nm波长下测定党参炔苷峰面积，如下表10。

表10 党参样品中党参炔苷重复性性测定结果

由重复性实验测定结果可知，RSD值为1.32%，表明通过此法处理的党参样品来测定党参炔苷，其重复性良好。

2.3.8 加样回收实验 称取党参生品细粉9份，同重复性实验操作制备溶液9份，在波长268 nm下测定党参炔苷峰面积，其RSD值如下表11。

由上表可知党参炔苷加样回收方法良好。

表11 党参样品中党参炔苷加样回收测定结果

3 结论

3.1 对物性的影响

中药清炒炮制工艺通过对物性参数变化的影响而表现为动态传递过程，主成分含量经清炒炮制后存在主成分之间的相互转化，物性与炮制工艺之间存在某种传递性。

炒制火候对党参药材的外观性状和内在质量有显著影响。随着火候的加深，党参相对密度逐渐下降，炮制改变了党参内部结构，使得饮片内部形成空腔。党参pH(炒炭除外)值呈下降趋势，证明随着炮制加深，药材中离子解离度变大，电离出H+增多。通过测定药材的pH值，可对中药方剂学和药物制剂学的研究提供某些参考[10]。党参炮制后氧化值呈现上升趋势，炒焦后氧化值上升最明显，反映炮制后改变其性质[11]。表明随着炒制程度的加大，改变了挥发油的稳定性，散失程度不断加大[12]。

3.2 对小分子影响

多糖是由10个以上的单糖分子通过糖苷键聚合而成的，是分子量较大的多聚物[13]。经炒制后党参炔苷含量显著下降，出现新峰，说明还水溶性糖随炮制程度加深而降低，党参物料基础为葡萄糖分子，受热之后动态转化，分子重新排列组合后可以相互转化。查阅相关文献发现米炒对党参多糖含量影响无统计学意义；表明党参炮制过程中多糖含量增加主要由炒制引起，辅料米无实质作用[14]。

炮制是中医药的特色，经炮制产生的多种饮片规格在临床的功用侧重不同，其机理尚不完全清楚。清炒炮制不仅是通过指标性成分的变化与否来说明炮制是否合格达标，同时物性指标也能判断炮制关键和指标性成分之间存在一定的作用关系，同样影响着炮制饮片临床疗效的发挥[15-16]。