猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒三联活疫苗创制与应用

主要完成人：

冯 力（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所），

时洪艳（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所），

陈建飞（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所），

佟有恩（哈尔滨维科生物技术开发公司），

张 鑫（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所），

王牟平（哈尔滨国生生物科技股份有限公司）

提名单位：黑龙江省

猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪轮状病毒（PoRV）引起的猪病毒性腹泻可导致7日龄以内仔猪死亡率高达100%，导致“连窝端”，被誉为哺乳仔猪死亡的“第一杀手”，且无有效治疗药物，每年因此造成的经济损失超过百亿元。针对我国这三种病毒普遍存在且混合感染日趋严重的现实问题，为遏制其带来的严重产业危害，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研究员、猪消化道传染病创新团队首席科学家冯力带领项目团队历经12年科学攻关，发明了我国首个安全高效猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒（G5型）三联活疫苗（以下简称猪病毒性腹泻三联活疫苗），攻克了三种病毒混合感染无疫苗可用的产业难题，实现了猪病毒性腹泻精准高效防控。其领衔的“猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒三联活疫苗创制与应用”项目获2018年度国家技术发明奖二等奖。

在TGEV、PEDV、PoRV三种病毒中，有两种冠状病毒，其血清型单一，但是轮状病毒血清型众多，中国流行情况如何，必须先摸清楚，疫苗的研发才能有的放矢。为了解疫情，掌握猪腹泻病的流行和感染状况，摸清轮状病毒优势基因型，冯力及其团队克服养猪场都建在远离城市的农村或山区，交通极不方便的困难，跋山涉水，深入疫情发生地开展流行病学调查，明确了三种病毒是我国主要腹泻病原，在众多的猪轮状病毒基因型中，G5型为优势基因型，为疫苗的研发提供了坚实有力的科学依据。

冯力介绍，三联活疫苗不是单单把三个病毒混在一起那么简单，为保证三个病毒混在一起效果不打折，在如何提高效价方面他们投入了大量的精力。此外，在疫苗株与野毒株的区分，包括检验工作上他们同样遇到了很多难题，但逢山开路、遇水搭桥，难点被他们一一解开。

通过坚持不懈的攻关，他们发明了适应传代细胞系的安全性高、免疫原性好且具有独特分子标记的弱毒株，攻克了三种猪腹泻病毒难以适应细胞、致弱过程中免疫原性减弱、强弱毒株难以区分的世界性难题。在病毒致弱过程中，采用敏感细胞系和未吃初乳仔猪交替继代，结合固相病毒蚀斑克隆及全基因组测序等技术，优选安全性高、免疫原性好的克隆株，独创了猪腹泻病毒分离致弱体系，发明了安全、稳定、免疫原性好并具有独特分子标记的三种弱毒株，为三联活疫苗的创制及产业化生产奠定了关键性基础。除此之外，他们创建的传代细胞系替代原代细胞系的生产新工艺，突破了原代细胞培养过程中外源病毒污染难以控制的技术瓶颈，能降低生产成本约2/3，为疫苗制造与检验规程及质量标准的制定提供了新路径。

该项目产品2014年获得国家二类新兽药证书，并在2015年3月24号成功上市。为了将项目科研成果尽快应用到生产实际，冯力及其团队深入基层，开展猪病毒性腹泻防控知识合技术的宣传，手把手将技术教给养殖户和技术员。目前，三联活疫苗已推广到我国除台湾、香港、澳门以外的所有省区市，累计推广2560万头份，免疫覆盖仔猪1.54亿头，实现销售收入2.01亿元。对三种病毒混合感染引起的腹泻防控收到了很好的效果，断奶仔猪数得到了提升，达到了一针免疫防控三种疫病的效果。同时，因为减少了免疫次数，降低了免疫劳动强度，减少了免疫应激，极大方便了免疫接种，受到使用者的一致好评。该项目成果相继获得国家发明专利2项；国家二类新兽药证书1项；黑龙江省技术发明奖一等奖1项，中国专利优秀奖1项，中国农业科学院杰出科技创新奖1项；制订行业标准2项；发表文章百余篇，并被Nature等杂志引用，极大地推动了国内外三种腹泻病防控理论与技术体系的丰富和完善。