非典型猪瘟的诊断与防控

牛绪东 马梓承 李克鑫 李克钦 张春玮 胡栋 张元瑞 刘建柱*

1.山东农业大学动物科技学院

2.山东德信生物科技集团

3.济南鑫宝星动物药业有限公司

猪瘟（CSF）是由微RNA病毒目黄病毒科瘟病毒属猪瘟病毒（CSFV）引起的一种急性、热性、高度传染性疾病，是世界动物卫生组织（OIE）规定通报的疫病，也是我国自2007年以来一直实行强制免疫的一类传染病，是威胁养猪业的主要传染病之一。近几年，在临床上时常发生非典型猪瘟。作者于2018年4月28日接诊一例来自泰安市某养殖户饲养的已注射过猪瘟疫苗的猪群，发生了与典型猪瘟不全一致的非典型猪瘟的病例。通过实验室检查，从而得到确诊，现总结如下。

（一）发病情况

畜主在2018年春节后于一个月内分四批陆续从周围不同的地区购进119头15～40 kg体重的猪，进场后便陆续分别间隔免疫注射某厂家的猪瘟活疫苗（细胞源）、O型口蹄疫疫苗、圆环病毒灭活苗和伪狂犬疫苗。最近一个多月开始陆续发病和死亡，邀请多名兽医给予诊治，曾按附红细胞体病和弓形体病治疗，曾用磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、土霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、双黄连和黄芪多糖等药物进行治疗，均无明显效果。畜主来山东农业大学动物科技学院10 d前曾注射了两个厂家的猪瘟细胞苗（注：因原来厂家的疫苗暂时缺货，故购买了另一厂家的猪瘟疫苗），其中，大约半数猪只注射了原来厂家的疫苗，但是现在仍继续发病和死亡；剩余的半数猪注射了另一厂家的疫苗后仅个别死亡，现已趋于稳定。到畜主来诊之时，据统计已死亡29头，仍有36头发病。经作者诊断处理后一周内，比较严重者又死亡9头，未见新发病例。病情稳定后，经统计其发病率是 54.62%（65/119）、死亡率为31.93%（38/119）、病死率为58.46%（38/65）。

（二）临床症状

病猪表现营养不良，饮食欲减退或废绝，逐渐消瘦和贫血；可视粘膜及皮肤苍白，被毛无光泽，皮肤皲裂（见图1），有的皮肤上可见出血点；多数腹泻，排灰白色或灰黄色稀便，有的排“算盘珠样”的干粪，表面附有黏液（见图2）；个别出现呕吐现象；轻度咳嗽和气喘，有的流鼻涕；体温多在40℃～41℃之间；后期有的可见耳朵发紫，拉稀者死亡快，病程多在一周之内，排干粪者病程可延至2～3周。

图1 病猪表现消瘦、贫血、皮肤皲裂

图2 病猪多数拉稀，有的拉干粪

（三）病理剖检

尸体表现贫血苍白（见图3）；全身淋巴结肿胀，呈现“大理石样”花纹的周边出血现象（见图4），体表淋巴结周围可见淡黄色水肿（见图5）；心外膜轻度出血，心冠脂肪水肿（见图6）；双侧扁桃体肿胀、潮红（见图7）；尿液呈淡黄色，膀胱黏膜有少量出血点；脾脏轻度肿大，可见少量出血性梗死灶；肾脏贫血呈土黄色，其上可见多量针尖状出血点（见图8）；气管及支气管内出现泡沫状液体和少量黏痰（见图9），肺脏淤血、出血、水肿（见图10）；肝脏轻度肿大和淤血，胆囊扩张，胆汁浓稠内含多量颗粒状物（见图11）；胃底腺区轻度出血，贲门腺区呈现明显出血（见图12）；肠道轻度出血，大肠黏膜轻度水肿。

图3 尸体表现贫血苍白

图4 肠系膜淋巴结肿胀，呈现周边出血

图5 腹股沟淋巴结周围可见淡黄色水肿

图6 心外膜轻度出血，心冠脂肪水肿

图7 双侧扁桃体肿胀、潮红

图8 肾脏贫血性出血

图9 气管及支气管内有泡沫状液体和黏痰

图10 肺脏淤血、出血和水肿

图11 胆汁浓稠内含多量颗粒状物

图12 贲门腺区出血

（四）实验室诊断

分别采集病死猪的肺脏、淋巴结和脾脏，以备病料中四种病毒基因组的提取。

对CSFV进行RT-PCR检测。冻存于液氮中的组织病料（脾脏和淋巴结）解冻后取适量加入灭菌PBS并研磨成匀浆，10000 rpm离心4 min后取上清，使用北京全式金EasyPure Viral DNA/RNA kit 提取病毒核酸。根据GenBank中已发布的CSFV序列保守区设计引物，扩增目的片段为599 bp，上游引物序列：F-TRACCAYGCAYATGWCAGAAGTACC；下游引物序列：R-AGTCGACTTCCCTGGTTTCACTTG。经反转录后，采用 20 μl PCR 体 系：DNA 样本 3 μl，R-Mix 10 μl；E-Mix 0.3 μl；上下游引物各 1 μl；灭菌ddH2 o 4.7 μl。PCR 程 序：94 ℃5 min；94℃ 30 s、57℃ 40 s、72℃30 s，35 个循环；72℃ 10 min，4℃保存。PCR产物通过1%的琼脂糖凝胶电泳观察结果，该病料中CSFV核酸出现目的条带（见图13）。

笔者也对PRRSV和PRV、PCV2用病料中的肺脏和淋巴结，按照RNA/DNA提取试剂盒（购自上海生工生物公司）说明书分别进行了RT-PCR和PCR技术检测。这三种病毒的特异性引物均由北京伟嘉集团山东检测中心提供。分别进行了PCR特异性扩增，扩增片段大小 分 别为 432 bp、292 bp、785 bp。经过一系列步骤的严格操作，PCR产物通过1%的琼脂糖凝胶电泳观察结果，在该病料中PRRSV、PRV和PCV2核酸均未出现目的条带。

从左至右 M：DL 2 000 DNA marker；“＋”泳道依次为猪瘟、蓝耳、伪狂犬和圆环病毒的阳性对照；

“－”泳道依次为猪瘟、蓝耳、伪狂犬和圆环病毒的阴性对照；

“1”泳道依次为猪瘟、蓝耳、伪狂犬和圆环病毒的样品。

图13 PCR扩增产物电泳结果

（五）结论

根据流行病学、临床症状和病理剖检，作者初步诊断为CSFV和PCV2的混合感染性疾病。经（RT）PCR检测了4种病毒后得知，PRRSV、PRV和PCV2为阴性，仅CSFV为阳性，故该病例最终确诊为CSFV的单一感染。

（六）讨论与小结

1.发病原因。该猪场发生非典型猪瘟主要有以下几个原因，一是猪场原来使用的猪瘟疫苗可能存在问题，按常规跟胎免疫注射却没有阻断住CSFV的侵袭，当怀疑有猪瘟后，畜主可能又使用了由于保存不当或原本就质差的疫苗对部分猪进行了紧急免疫，所以这部分猪才没有被快速控制住本病的发生；其次是诊断不及时，延误了紧急免疫注射的最佳时间，造成猪场病毒量急增且长时间被污染，从而引发病情加重，造成了较大的经济损失；三是畜主自认为该猪场是个小型猪场，又远离村镇和其他养殖场，所以卫生消毒意识淡薄，每天只清扫猪舍很少进行大面积的卫生消毒工作，从而造成病原微生物的滋生与侵袭；四是，是否与饲料营养不全或存在霉菌毒素有关（有待进一步分析），使机体的免疫力降低，从而给CSFV的侵袭提供了方便。

2.处理方案及效果。该病例达到后，笔者于48 h内及时给予确诊，制定如下防制方案。（1）无害化深埋处理病死猪；（2）把免疫失败的猪群再重新按3倍量紧急免疫注射质量好的猪瘟细胞苗；（3）注射疫苗3 d后，猪场内外进行全面卫生消毒，1次 /d，连续 3 d，以后每 10 d 左右一次。环境消毒用3%的热火碱溶液，舍内带猪消毒用1∶800的三氯异氰尿酸钠溶液；（4）饲料内加入5天的氟苯尼考、复合VB和VC，主要是防止继发感染和增强机体免疫力；（5）饲喂易消化的全价日粮，清除霉败变质的饲料，供给清洁饮水。

半月后回访，经采取上述处理措施一周后未见新病例出现，猪群健康基本趋于稳定。因此，对该猪瘟病例的防制取得了比较满意的可靠效果。

3.免疫监测。有条件的养猪企业，在注射猪瘟疫苗之前应先检测其效价是否达到免疫注射标准，以防止因疫苗质量问题而影响免疫效果，给养猪生产造成不必要的经济损失。

免疫效果要通过免疫一周后进行抗体检测来确定。按生物统计的方法，最少应采集检测所免疫猪群的头数为（n代表免疫猪群总头数）头的血清，方可代表全群免疫的效果。如果免疫后抗体水平按PPA-ELSIA检测抗体法，OD490值达到0.3以上；按IHA检测抗体法，抗体滴度应大于6 log2，方可说明这次免疫的效果优良。否则，应更换疫苗效价达到免疫注射标准的猪瘟疫苗再重新进行免疫注射，免疫注射一周后再检测免疫效果，直至抗体水平达到保护要求为止。

4.非典型猪瘟的免疫。根据有关资料报道，目前我国许多地区的猪场虽然进行了猪瘟疫苗免疫，但仍然有部分猪群的免疫抗体低下，有的甚至只有20%的免疫合格率，这就说明了猪瘟疫苗免疫失败的原因主要有猪瘟病毒的持续性感染、混合感染、母源抗体干扰、免疫程序不当及疫苗质量问题等多个方面。

5.非典型猪瘟的诊断要点。临床上主见拉稀、贫血、渐瘦。特征性剖检变化为全身淋巴结肿胀并呈现红白相间的“大理石样”周边出血的现象，肾脏贫血性出血及胆汁浓稠等。根据以上特点，临床上可初步诊断为非典型猪瘟，确诊需要实验室检查如通过PCR技术检测到病原。

6.综合防控。目前，CSFV的感染率仍然较高，并时常引发临床表现，需要引起畜牧兽医工作者的高度重视。养殖场要制定并严格执行科学有效的生物安全措施，把好疫苗质量关，及时按科学程序免疫，定期做好监控，及时搞好卫生消毒等各项具体工作。