IELISA检测IgG在布鲁氏菌病监测中的应用

姜勇波 高晓丽 黄明 曹建滨 杨梦莉 李晓红

布鲁氏菌病（brucellosis）简称布病，属于一种人畜共患疾病[1]，发病后患者将表现出多汗、肝脾肿大、发热、关节疼痛等症状，严重影响其生活质量及身心健康。研究表明[2]，布鲁氏菌病主要发病原因为布鲁氏杆菌感染，因此提示积极采取有效措施提高布鲁氏菌抗体检出率对及时诊断病情具有积极意义。基于此，文章选取于2015年3月—2017年10月布鲁氏菌病监测工作中，以养殖牛羊和屠宰为职业，伴有发热、乏力、关节痛等布鲁菌病疑似症状人员，确诊的90例布鲁氏菌病患者作为本次研究对象。探讨IELISA检测IgG应用于布鲁氏菌病监测工作中的具体价值，以期为提高此病正确检出率提供可靠依据，以达到早发现、早防治的目的，现总结如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取于2015年3月—2017年10月布鲁氏菌病监测工作中确诊的90例布鲁氏菌病患者作为本次研究对象，90例患者均经临床检查确诊布鲁氏菌病，其中男52例、女38例，年龄19～71岁、平均（45.61±0.17）岁。

布鲁氏菌病诊断标准[3]：（1）具有布鲁氏菌病感染体接触史；（2）发生多汗、发热、骨关节疼痛、乏力、肌肉疼痛等布鲁氏菌病相关症状；（3）虎红平板凝集试验（RBPT）阳性；（4）试管凝集试验（SAT）1：100（++）及以上。

样本纳入标准：（1）确诊发生布鲁氏菌病；（2）对本次研究所需IELISA检测IgG具有良好耐受性；（3）对本次研究内容完全知情；（4）本次研究前自愿、独立签署知情同意协议。

样本排除标准：（1）合并其他细菌感染性疾病；（2）对本次研究中所需IELISA检测IgG无法耐受；（3）拒不签署知情同意协议；（4）妊娠、产褥、哺乳等特殊生理时期女性布鲁氏菌病患者。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 90例布鲁氏菌病患者均接受IELISA检测IgG，指定高年资、高职称实验室医师严格按照仪器试剂相关规定完成操作。记录90例布鲁氏菌病患者IELISA检测IgG结果，将所得数据输入统计学软件并与确诊结果做对比分析。

1.2.2 IELISA方法 采集待检者血清作为本次检测样本，微量板孔需经抗原包被，制作固相载体后将血清于板孔处加入，固相载体中存在的抗原与其所含抗体特异性结合并形成免疫复合物。将多余物质去除后加入IgG抗体（经酶标记），使之与前述免疫复合物反应后行洗板处理。将多余结合物除去并将底物加入，此时可见反应后生成有颜色产物，于450 nm波长处测量光密度值（optical density，OD），IgG与OD450值呈正相关（正比），利用绘制标准曲线方法得出标本中IgG水平，颜色强度、特异性抗体含量表现为正相关性（正比）。IgG值阴性标准为20 U/mL及以下，即IgG值检测结果在20 U/mL以上则提示此标本为阳性。

2 结果

90例布鲁氏菌病患者均顺利完成IELISA检测IgG，本次研究未见因故中断、自愿退出等异常情况。经分析可知，90例布鲁氏菌病患者经IELISA检测IgG阳性人数86例、阳性率为95.56%。

3 讨论

布鲁氏菌病是一种传染变态反应性人畜共患慢性传染病，既往由于牛羊等动物中布鲁氏菌病发病率较高，因此已引起畜牧兽医行业高度关注[4]。布鲁氏杆菌的感染途径包括消化道、皮肤黏膜等，人类从事挤奶、肉类加工、接触皮毛等途径均可感染布鲁氏杆菌[5]。由于近年来食品市场对牛羊肉、奶制品等需求量增加，人感染布鲁氏杆菌几率随之上升，而病情严重者不仅丧失劳动能力，甚至导致终身残疾，对家庭及社会造成严重负担[6]。因此提示，积极采取有效措施加强布鲁氏菌病监测工作已成为现阶段相关医务人员共同关注的重点。

细菌分离培养是现阶段临床用于诊断布鲁氏菌病的“金标准”，但此法存在培养条件苛刻、采样难度大、实验人员感染风险高等弊端[7]，且对慢性布鲁氏菌病患者经此法检出率较低，应引起相关医护人员注意。传统布鲁氏菌抗体检测技术包括虎红平板凝集试验、补体结合试验（CFT）、试管凝集试验等[8]，但由于SAT、RBPT存在一定的假阴性、假阳性情况[9]，而CFT操作复杂、对操作者要求较高且无法检测绵羊种布鲁氏菌[10]，因此上述方法均不利于临床推广。

IELISA是目前用于人间布鲁氏菌病监测工作的检测方法之一，利用聚苯乙烯微量反应板表面将特定抗体/抗原吸附，从而使聚苯乙烯微量反应板表面局部发生用酶标记的抗原抗体反应，将流离成分利用洗涤法洗涤并检测获得结果[11]。IELISA兼具放射免疫实验、荧光标记实验优点，结果可同时用酶标仪测定或肉眼直接观察，具有安全可靠、特异性及敏感性均较高等特点。文章对90例布鲁氏菌病患者分析可知，其经IELISA检测IgG阳性率为95.56%，此结论与国内外相关研究结果相符。布鲁氏菌病以男性发病率较高，高危职业涉及畜牧养殖业、兽医、农牧民等[12]，IELISA检测IgG对人间布鲁氏菌病的监测工作具有较高的应用价值。

综上，IELISA 检测有较高的准确率，方法简便、快速、自动化，适合于大样本筛查和布鲁氏菌病的监测工作。但应注意的是，IELISA检测IgG步骤复杂，不方便实际工作中针对少量标本进行检测。此外，虽然IELISA操作简单，但对仪器要求较高，因此不适用于各级基层机构应用。