美花圆叶筋骨草化学成分研究

杨 凡，王利霞，唐 飞，闫洪玲，沈晓飞，张 梅，赵文吉，谭玉柱*

1成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验 四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室—省部共建国家实验室培育基地，成都 611137；2四川大学华西第二医院 西部妇幼医学研究院，成都 610041；3四川省草原科学研究院，成都 610097

美花圆叶筋骨草AjugaovalifoliaBur.et Franch.var.calantha(Diels ex Limpricht) C.Y.Wu et C.Chen为唇形科(Labiate)筋骨草属(AjugaLinn.)植物,产于四川西部及西北部、甘肃西南部，是藏药达巴巴的来源之一[1-3]。其性味苦寒，功效清热解毒、凉血消肿，全草药用可治疗浮肿后流黄水、关节积黄水、骨松质发炎、筋骨疼痛等症[3]。其疗效显著，民间应用广泛。但关于其化学成分和药理活性的现代研究鲜有报道。课题组前期研究表明，筋骨草属主要含有二萜、甾体、黄酮等成分[4]。本文在前期研究基础上，进一步对其化学成分进行研究，为筋骨草属药用资源开发奠定基础。本实验采用70%丙酮水对美花圆叶筋骨草进行冷浸提取，减压浓缩后采用系统溶剂法得到各个萃取部位，通过多种色谱分离技术从乙酸乙酯部位中分离得到12个化合物，分别鉴定为2-methoxy-4-(2-propenyl)-phenyl-β-D-glucopyranoside(1)、oct-1-en-3-yl-β-glucopyranoside(2)、异地黄苷(3)、20-羟基蜕皮素-20,22-单丙酮化合物(4)、n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、(2S)-3-O-octadeca-9Z,12Z,15Z-trienoylglyceryl-O-β-D-galactopyranoside(6)、地黄苷(7)、乙酰哈巴苷(8)、水龙骨素 B(9)、香草乙酮(10)、筋骨草内酯(11)、α-(9Z,12′Z,15′Z)-octadecatrienoic acid monoglyceride(12)。化合物1～6、8、12为首次从该属植物中分离得到，化合物1～9，11～12为首次从该种植物中分离得到。本研究对分离得到的化合物3、4、7、9、11进行了抗炎活性和PHGDH抑制活性的测定，旨在为该种藏药资源的综合开发利用提供参考。

1 仪器与材料

Avance 400 MHz 超导核磁共振仪(德国Bruker公司)；LC50型中高压制备一体机(赛谱锐思北京科技有限公司)；酶标仪(美国Fisher公司)；Sephadex LH-20色谱填料(瑞士Pharmacia公司)；MCI树脂(日本三菱化学公司)；硅胶GF254薄层预制板(青岛海洋化工厂)；200 ～ 300目柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂)；色谱纯甲醇(美国TEDIA 公司)；氘代试剂(美国CIL公司)；优普UPT系列超纯水(成都优普电子产品有限公司)；其他试剂为分析纯(成都市科隆化学品有限公司)；LPS(中国上海Sigma公司， L-2880)；RAW264.7细胞株(中国科学院细胞库，上海)；DMEM + 10% FBS + 1% 双抗(青霉素，链霉素)(美国Hyclone公司)；CCK8，BAY 11-7085，Griess试剂(中国Beyotime公司)。

美花圆叶筋骨草于2017年12月采收于四川阿坝红原县邛溪镇，经中国科学院植物研究所系统与进化植物学国家重点实验室王强副研究员鉴定为唇形科筋骨草属植物美花圆叶筋骨草AjugaovalifoliaBur.et Franch.var.calantha(Diels ex Limpricht) C.Y.Wu et C.Chen，样品标本(JGC-1712)现存于成都中医药大学中药化学1001研究室。

2 提取与分离

美花圆叶筋骨草干燥全草6 kg，粉碎后用70%丙酮水溶液室温冷浸提取5次，浓缩提取液，依次用石油醚，乙酸乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯部位(210 g)经 MCI脱色素，再经硅胶柱色谱(氯仿-甲醇，10∶1 ～ 1∶1)梯度洗脱，薄层检识，合并相同流分，减压回收溶剂，得到6个组分 Fr.1 ～ Fr.6 。Fr.3 经中压制备色谱(甲醇-水，30∶70 ～ 100∶0 )梯度洗脱，薄层检识，合并相同流分，得到流分Fr.3.1 ～ Fr.3.8 ；Fr.3.3 经半制备 HPLC(甲醇-水，60∶40)分离得到化合物1(7 mg)和化合物2(5 mg)；Fr.3.4 经半制备 HPLC(甲醇-水，75∶25)分离得到化合物11(7 mg)和化合物4(8 mg)；Fr.3.6 经半制备 HPLC(甲醇-水，70∶30)分离得到化合物8(5 mg)。Fr.4 经 Sephadex LH-20 凝胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇，4∶6)洗脱，薄层检识，合并相同流分，得到流分Fr.4.1 ～ Fr.4.5 ；Fr.4.2 经半制备 HPLC(甲醇-水，70∶30)分离得到化合物12(12 mg)；Fr.4.3 经半制备 HPLC(甲醇-水，70∶30)分离得到化合物5(5 mg)； Fr.4.4 经半制备 HPLC(甲醇-水，60∶40)分离得到化合物3(4 mg)和化合物6(3 mg)和化合物9(5 mg)。Fr.5 经半制备 HPLC(甲醇-水，60∶40)分离得到化合物7(7 mg)和化合物10(5 mg)。

3 生物活性测定

3.1 抗炎活性筛选

取指数生长期的小鼠巨噬细胞 RAW264.7铺于24孔板(2.5 × 105细胞/孔)，在37 °C、5% CO2的培养箱中常规培养于DMEM培养液中，过夜，用50 μM浓度的单体化合物预处理2小时后，再加入LPS(0.5 μg/mL)反应24小时。以BAY 11-7085为阳性对照，通过Griess反应评估细胞培养基中的NO水平。

3.2 PHGDH抑制活性测定

将人源PHGDH基因(1-310)克隆至pET16载体，其N端携带有6×His标签。随后将载体转化至E.coliBL21，28 °C培养，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(ITPG)诱导蛋白表达。待菌液吸光度达到0.6～1.0(600 nm)，超声破碎细菌，Ni柱纯化，测定浓度后-80 °C冻存备用。配制所需试剂：

Mix1:0.1 mM 3-PG;0.1 mM resazurin;4 mM NAD+;0.001 U/μL diaphorase(30 μL)

Mix2:单体化合物(50 μL，25 μM)+ 0.5 μM PHGDH(20 μL)

首先将Mix2加入到96孔板中，于室温下孵育20 min。随后加入Mix1，使得总体系达到100 μL，室温继续孵育45 min。以CBR-5884为阳性对照，以550 nm激发，590 nm检测各孔吸光度值。

4 结构鉴定

化合物1 黄色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z349.125 9[M+Na]+(计算值为349.126 3)，相对分子量326，分子式C16H22O7；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:7.09(1H,d,J=8.3 Hz,H-6),6.83(1H,d,J=2.0 Hz,H-3),6.73(1H,dd,J=8.3,2.0 Hz,H-5),6.01～5.90(1H,m,H-8),5.09～5.00(2H,m,H-9),4.85(1H,d,J=7.4 Hz,H-1′),3.87(1H,dd,J=12.0,1.6 Hz,H-6′b),3.84(3H,s,2-OCH3),3.72-3.67(1H,m,H-6′a),3.52～3.33(6H,m,H-7,2′,3′,4′,5′);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:151.0(C-2),146.5(C-1),139.1(C-8),136.7(C-4),122.3(C-5),118.5(C-6),116.0(C-9),114.4(C-3),103.3(C-1′),78.3(C-5′),78.0(C-3′),75.1(C-2′),71.5(C-4′),62.7(C-6′),56.9(2-OCH3),40.9(C-7)。以上数据与文献[5]报道一致，故鉴定化合物1为2-methoxy-4-(2-propenyl)-phenyl-β-D-glucopyranoside。

化合物2 白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z313.162 4[M+Na]+(计算值为313.162 7)，相对分子量290，分子式C14H26O6；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.88(1H,ddd,J=17.3,10.4,7.1 Hz,H-2),5.20(1H,dt,J= 17.3,1.4 Hz,H-1a),5.09(1H,dt,J=10.4,1.4 Hz,H-1b),4.32(1H,d,J=7.8 Hz,H-1′),4.12(1H,td,J=7.1,5.8 Hz,H-3),3.81(1H,dd,J=11.9,2.5 Hz,H-6′a),3.64(1H,dd,J=11.9,5.5 Hz,H-6′b),3.39～3.14(4H,m,H-2′,3′,4′,5′),0.90(3H,t,J=6.8 Hz,H-8 );13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:141.2(C-2),116.1(C-1),103.3(C-1′),83.0(C-3),78.4(C-5′),77.9(C-3′),75.5(C-2′),71.8(C-4′),62.9(C-6′),35.8(C-4),33.1(C-6),25.8(C-5),23.8(C-7),14.5(C-8)。以上数据与文献[6]报道一致，故鉴定化合物2为 oct-1-en-3-yl-β-gluco-pyranoside。

化合物3 黄色油状物(甲醇)；ESI-MS：m/z675.226 3[M+Na]+(计算值为675.223 0)，相对分子量652，分子式C31H40O15；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:7.63(1H,d,J=15.9 Hz,H-7′′′),7.16(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′′′),7.02(1H,dd,J=8.2,2.0 Hz,H-6′′′),6.80(1H,d,J=8.2 Hz,H-5′′′),6.76(1H,d,J=8.2 Hz,H-5),6.69(1H,d,J=2.0 Hz,H-2),6.61(1H,dd,J=8.2,2.0 Hz,H-6),6.39(1H,d,J=15.9 Hz,H-8′′′),5.17(1H,d,J=1.9 Hz,H-1′′),4.51(1H,dd,J=11.9,2.3 Hz,H-6′),4.38(1H,dd,J=11.9,6.2 Hz,H-6′),4.33(1H,d,J=7.9 Hz,H-1′),3.99(1H,dd,J=9.1,2.8 Hz,H-5′′),3.95(1H,dd,J=3.5,1.8 Hz,H-2′′),3.86(3H,s,3′′′-OCH3),3.85(1H,m,H-7),3.79(1H,m,H-7),3.75(3H,s,4-OCH3),3.72(1H,d,J=3.3 Hz,H-3′′),3.69(1H,d,J=3.2 Hz,H-5′)2.80(2H,t,J=7.5 Hz,H-8),1.25(3H,d,J=6.2 Hz,H-6′′);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:169.2(C-9′′′),150.9(C-4′′′),149.6(C-3′′′),147.7(C-3),147.5(C-7′′′),147.3(C-4),132.9(C-1),127.9(C-1′′′),124.4(C-6′′′),121.3(C-6),117.2(C-5),116.7(C-5′′′),115.5(C-8′′′),113.0(C-2),111.9(C-2′′′),104.6(C-1′),102.9(C-1′′),84.3(C-3′),75.8(C-2′),75.6(C-5′),74.2(C-4′′),72.5(C-2′′),72.5(C-3′′),72.4(C-7),70.7(C-4′),70.2(C-5′′),64.8(C-6′),56.6(3′′′,4-OCH3),36.9(C-8),18.0(C-6′′)。以上数据与文献[7]报道一致，故鉴定化合物3 异地黄苷。

化合物4 白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z543.328 8[M+Na]+(计算值为543.3298)，相对分子量520，分子式C30H48O7；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.81(1H,d,J=2.3 Hz,H-7),3.95(1H,d,J=3.2 Hz,H-3),3.83(1H,dt,J=12.1,4.0 Hz,H-2),3.15(1H,dd,J=10.6,7.3 Hz,H-9),1.39(3H,s,H-29),1.32(3H,s,H-30),1.21(3H,s,H-21),1.20(3H,s,H-26),1.18(3H,s,H-27),0.96(3H,s,H-19),0.83(3H,s,H-18);13C NMR(CD3OD,100 MHz )δ:206.6(C-6),167.8(C-8),122.3(C-7),108.2(C-28),86.0(C-22),85.5(C-14),83.5(C-20),71.3(C-25),68.9(C-2),68.7(C-3),52.0(C-5),50.7(C-17),49.2(C-13),42.4(C-24),39.4(C-10),37.5(C-1),35.3(C-9),32.8(C-4),32.5(C-12),31.9(C-15),29.6(C-26),29.5(C-27),29.1(C-29),27.3(C-30),24.9(C-23),24.6(C-19),22.7(C-21),22.6(C-16),21.7(C-11),17.8(C-18)。以上数据与文献[8]报道的数据一致，故鉴定化合物4 为20-羟基蜕皮素-20,22-单丙酮化合物。

化合物5 黄色油状物(甲醇)；ESI-MS：m/z315.178 1[M+Na]+(计算值为315.178 4)，相对分子量292，分子式C14H28O6；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:4.24(1H,d,J=7.8 Hz,H-1′),3.89 -3.86(1H,m,H-8),3.85 -3.82(1H,m,H-6′a),3.69 -3.67(1H,m,H-6′b),3.55 -3.51(1H,m,H-8),3.37 -3.33(1H,m,H-3′),3.28 -3.26(2H,m,H-4′,5′),3.17 -3.13(1H,m,H-2′),1.61(2H,d,J=7.4 Hz,H-7),1.32 -1.28(10H,m,H-2,3,4,5,6),0.90(3H,t,J=6.9 Hz,H-1);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:104.6(C-1′),78.3(C-3′),78.1(C-5′),75.3(C-2′),71.9(C-4′),71.1(C-8),63.0(C-6′),33.2(C-7),31.0(C-6),30.7(C-5),30.6(C-4),27.3(C-3),23.9(C-2),14.5(C-1)。以上数据与文献[9]报道的数据一致，故鉴定化合物5为n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物6 黄色油状物(甲醇)；ESI-MS：m/z537.153 3[M+Na]+(计算值为537.152 5)，相对分子量514，分子式C27H46O9；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.44～5.25(6H,m,H-9′′),4.23(1H,d,J=7.5 Hz,H-1′),4.19 -4.10(2H,m,H-3),4.02～3.94(1H,m,H-1),3.91(1H,dd,J=10.5,5.2 Hz,H-1),3.83(1H,dd,J=3.3,1.1 Hz,H-4′),3.74(1H,m,H-6′a),3.66(1H,dd,J=10.5,4.6 Hz,H-6′b),3.57 -3.53(1H,m,H-2′),3.52 -3.49(1H,m,H-5′),3.47(1H,dd,J=9.7,3.3 Hz,H-3′),2.81(4H,t,J=6.0 Hz,H-11′′,14′′),2.35(2H,t,J=7.5 Hz,H-2′′),2.08(4H,m,H-17′′,8′′),1.62(2H,m,H-3′′),1.43 -1.27(8H,m,H-4′′,5′′,6′′,7′′),0.97(3H,t,J=7.5 Hz,H-18′′);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:175.6(C-1′′),132.9(C-16′′),131.2(C-15′′),129.4(C-12′′),129.3(C-13′′),129.0(C-10′′),128.4(C-9′′),105.5(C-1′),76.9(C-5′),75.0(C-3′),72.7(C-2′),72.0(C-1),70.4(C-4′),69.8(C-2),66.7(C-3),62.6(C-6′),35.1(C-2′′),30.8(C-4′′),30.4(C-5′′),30.3(C-6′′),30.3(C-7′′),28.3(C-8′′),26.7(C-14′′),26.6(C-11′′),26.1(C-3′′),21.6(C-17′′),14.8(C-18′′)。以上数据与文献[10]报道一致，故鉴定化合物6为(2S)-3-O-octadeca-9Z,12Z,15Z-trienoyl-glyceryl-O-β-D-galactopyranoside。

化合物7 棕黄色油状物(甲醇)；ESI-MS：m/z675.223 7[M+Na]+(计算值为675.223 0)，相对分子量652，分子式C31H40O15；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:7.65(1H,d,J=15.9 Hz,H-7′′′),7.18(1H,d,J=1.4 Hz,H-2′′′),7.07(1H,dd,J=8.2,1.4 Hz,H-6′′′),6.81(2H,d,J=8.2 Hz,H-5,5′′′),6.73(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.67(1H,dd,J=8.2,1.8 Hz,H-6),6.36(1H,d,J=15.9 Hz,H-8′′′)，5.20(1H,brs,H-1′′),4.92(1H,t,J=9.1 Hz,H-4′),4.37(1H,d,J=8.0 Hz,H-1′),3.87(3H,s,4-OCH3),3.80(3H,s,4′′′-OCH3),3.3～4.2(7H,m,H-2′,3′,5′,6′,4′′,5′′,7),2.81(2H,m,H-8),1.16(1H,d,J=6.2 Hz,H-6′′);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:168.4(C-9′′′),150.9(C-4′′′),149.5(C-3′′′),148.0(C-7′′′),147.7(C-3),147.5(C-4),133.0(C-1),127.8(C-1′′′),124.5(C-6′′′),121.3(C-6),117.2(C-5),116.7(C-5′′′),115.3(C-8′′′),113.0(C-2),112.0(C-2′′′),104.3(C-1′),103.1(C-1′′),81.6(C-3′),76.3(C-2′),76.2(C-5′),73.9(C-4′′),72.5(C-2′′),72.3(C-7),72.2(C-3′′),70.8(C-4′),70.5(C-5′′),62.5(C-6′),56.7(4-OCH3),56.6(4′′′-OCH3),36.7(C-8),18.6(C-6′′)。以上数据与文献[11]报道一致，故鉴定化合物7为地黄苷。

化合物8 棕黄色油状物(甲醇)；ESI-MS：m/z429.317 8[M+Na]+(计算值为429.319 2)，相对分子量406，分子式C17H26O11；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:6.38(1H,d,J=6.4 Hz,H-3),6.07(1H,d,J=1.3 Hz,H-1),4.91(1H,dd,J=6.4,1.4 Hz,H-4),4.59(1H,d,J=7.9 Hz,H-1′),4.29(1H,t,J=6.6 Hz,H-6′),3.89(1H,dd,J=12.0,1.7 Hz H-6′),3.71(1H,d,J=5.4 Hz,H-6),2.86(1H,s,H-9),2.18(1H,d,J=15.1 Hz,H-7),2.01(3H,s,H-12),1.95(1H,dd,J=15.1,4.5 Hz,H-7),1.46(3H,s,H-10);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:173.4(C-11),144.0(C-3),107.1(C-4),100.1(C-1′),94.7(C-1),88.8(C-8),78.3(C-6),77.8(C-3′),77.7(C-5′),74.7(C-2′),73.5(C-5),71.9(C-4′),63.0(C-6′),55.7(C-9),46.2(C-7),22.6(C-10),22.3(C-12)。以上数据与文献[12]报道一致，故鉴定化合物8为乙酰哈巴苷。

化合物9 无色油状物(甲醇)；ESI-MS：m/z519.294 4[M+Na]+(计算值为519.293 4)，相对分子量496，分子式C27H44O8；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.86(1H,d,J=2.6 Hz,H-7 ),4.02～3.92(2H,m,H-2,3),3.20(1H,m,H-22),1.21(3H,s,H-27),1.20(3H,s,H-26),1.19(3H,s,H-21),0.92(3H,s,H-19)，0.90(3H,s,H-18);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:202.5(C-6),167.5(C-8),120.7(C-7),85.2(C-14),80.5(C-5),78.6(C-22),78.0(C-20),71.4(C-25),70.4(C-3),68.6(C-2),50.6(C-17),48.1(C-13),45.6(C-10),42.5(C-24),39.2(C-9),36.3(C-4),34.4(C-1),32.7(C-12),31.9(C-15),29.9(C-27),29.1(C-26),27.5(C-23),22.7(C-11),21.6(C-16),21.2(C-21),18.2(C-19),17.1(C-18)。以上数据与文献[13]报道一致，故鉴定化合物9为水龙骨素 B。

化合物10 无色晶体(甲醇)；ESI-MS：m/z167.071 0[M+H]+(计算值为167.070 8)，相对分子量166，分子式C9H10O3；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:7.52～7.49(2H,m,H-6,2),6.92(1H,d,J=8.7 Hz,H-5),3.92(3H,s,3-OCH3),2.53(3H,s,H-8);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:197.0(C-7),150.6(C-4),146.8(C-3),130.3(C-1),124.2(C-6),113.9(C-2),109.9(C-5),56.2(3-OCH3),26.3(C-8)。以上数据与文献[14]报道一致，故鉴定化合物10为香草乙酮。

化合物11 黄色油状物(甲醇)；ESI-MS：m/z525.402 8[M+ Na]+(计算值为525.404 4)，相对分子量502，分子式C29H42O7；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.98(1H,d,J=2.4 Hz,H-7),4.20(1H,dd,J=12.6,4.1 Hz,H-22),3.98(1H,d,J=2.9 Hz,H-3),3.85～3.78(1H,m,H-2),3.55(1H,t,J=10.6 Hz,H-9),2.93(1H,t,J=9.1 Hz,H-17),2.77(1H,q,H-11),2.53～2.43(4H,m,H-23,28),2.40 -2.32(1H,m,H-16),2.26～2.19(1H,m,H-15),1.87(3H,s,H-27),1.82～1.72(2H,m,H-16,15),1.71～1.65(2H,m,H-1),1.29(3H,s,H-21),1.28(3H,s,H-18),1.24(3H,t,H-29),1.10(3H,s,H-19);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:212.5(C-12),205.4(C-6),169.3(C-26),163.2(C-8),157.5(C-24),124.0(C-7),121.8(C-25),90.1(C-14),84.1(C-22),76.1(C-20),68.6(C-2),68.4(C-3),62.2(C-13),51.5(C-5),44.4(C-17),40.5(C-10),37.7(C-1),37.4(C-9),37.2(C-11),32.5(C-4),32.1(C-15),30.9(C-23),28.2(C-28),23.9(C-19),22.0(C-21),21.3(C-16),17.7(C-18),12.2(C-27),11.9(C-29)。以上数据与文献[15,16]报道一致，故鉴定化合物11为筋骨草内酯。

化合物12 黄色油状物(甲醇)；ESI-MS：m/z352.071 3[M+ Na]+(计算值为352.072 8)，相对分子量352，分子式C21H36O4；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.38～5.31(6H,m,H-9′,10′,12′,13′,15′,16′),4.15(1H,dd,J=11.4,4.4 Hz,H-1),4.06(1H,dd,J=11.4,6.3 Hz,H-1),3.82(1H,q,J=5.5 Hz,H-2),3.55(2H,dd,J=5.6,1.8 Hz,H-3),2.81(4H,t,J=5.9 Hz,H-11′,14′),2.35(2H,t,J=7.4 Hz,H-2′),2.09(4H,q,J=7.4,6.9 Hz,H-3′,8′),1.41～1.27(10H,m,H-4′,5′,6′,7′,17′),0.97(3H,t,J=7.5 Hz,H-18′);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:175.7(C-1′),132.9(C-16′),131.2(C-9′),129.4(C-12′),129.4(C-13′),129.0(C-15′),128.4(C-10′),71.3(C-2),66.7(C-1),64.3(C-3),35.1(C-2′),30.8(C-5′),30.4(C-7′),30.3(C-4′,6′),28.30(C-8′),26.7(C-11′),26.6(C-14′),26.1(C-3′),21.6(C-17′),14.8(C-18′ )。以上数据与文献[17]报道一致，故鉴定化合物12为α-(9′Z,12′Z,15′Z)-octadecatrienoic acid monoglyceride。

5 生物活性测定结果

本实验运用脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7生成的NO细胞模型对化合物3、4、7、9、11进行了抗炎活性测定，以Bay 11-7085为阳性对照，测试浓度为50 μM，通过测定化合物对NO的抑制作用评价其抗炎活性。3-磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)是丝氨酸合成途径的关键酶，与多种肿瘤的发生发展密切相关。抑制PHGDH活性可以表现出一定的抗肿瘤作用。本实验对上述化合物进行了PHGDH抑制活性测定，以CBR5884为阳性对照，测试浓度为25 μM。结果显示化合物3、4、7、9、11对NO抑制率不显著，没有明显的抗炎活性；化合物7对PHGDH具有一定的抑制作用，其抑制率为23.3%。

6 讨论

唇形科筋骨草属植物在全世界范围内有超过300多种，其药用历史悠久，广泛应用于治疗发热，风湿，痛风，哮喘，糖尿病等症。目前，对于筋骨草属植物的研究主要集中于金疮小草，紫背金盘，苞叶筋骨草等品种，关于美花圆叶筋骨草的化学成分研究报道很少。本课题组前期从美花圆叶筋骨草中主要获得脂溶性成分，如二萜、甾体、黄酮、香豆素等成分，但其极性成分如糖苷类则报道较少。因此本研究通过优化提取分离流程，重点对其极性成分进行研究，从乙酸乙酯部位中共分离鉴定了12个化合物，化合物1～3、5～7为糖苷类，化合物4、9、11为甾体类，化合物8为环烯醚萜类，化合物10为酚类，12为长链脂肪醇类，其中化合物1～6、8、12为首次从该属植物中分离得到，化合物1～9、11～12为首次从该种植物中分离得到，进一步丰富了本种药用植物的化学成分。化合物3、4、7、9、11的抗炎与PHGDH抑制活性研究表明，所筛化合物3、4、7、9、11均无抗炎活性，化合物7对PHGDH具有抑制作用，其抗肿瘤作用有待进一步研究。

本论文在前期研究基础上，进一步丰富了美花圆叶筋骨草的化学成分类型，为该种藏药资源的综合开发和利用奠定了基础；针对其抗炎活性和PHGDH抑制活性进行了初步筛选，尽管活性结果不尽如人意，但是对于此类分子生物活性的后期研究具有一定的参考价值和指导意义。结合美花圆叶筋骨草的民间应用经验和临床疗效，其抗炎活性值得挖掘研究，然而关于其抗炎的药效物质基础尚不明确，本研究结果提示其甾体类成分、糖苷类成分非其抗炎的有效成分，其它成分如二萜等将是我们后期的研究重点。