母猪初乳中猪圆环病毒3型的检测与分析

黄二素，梁海英，曾智勇*(编译)

（贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

猪圆环病毒3型(PCV3)是一种近年来被广泛报道的新型猪圆环病毒。尽管PCV3的发病机制尚不清楚，但已有文献报道表明，在临床上表现为母猪繁殖障碍，如流产、木乃伊胎、死胎，心肌炎，在猪皮炎肾病综合征(PDNS)，呼吸道疾病及神经系统疾病等病症的猪体内均可检测到PCV3。同样，PCV3在健康猪群中也能被检测到。此外，在不同年龄段的猪体内也能检测到PCV3。然而，PCV3在感染猪群中的传播方式尚未明了。通常而言，病毒的垂直传播是病毒在猪群中持续存在和传播的关键因素。有研究表明，PCV2经初乳传播在哺乳仔猪的垂直感染中起着重要作用，随后通过水平传播使得PCV2在断奶仔猪中传播。PCV3是否亦可通过初乳垂直传播尚未见报道。Kedkovid R等首次对泰国已感染PCV3的母猪群的初乳进行PCV3的检测鉴定，并就血清及初乳中PCV3滴度的关系进行了探讨。

Kedkovid R等于2017年经批准（批准协议号：1731064），在泰国拉查布里省某农场采集38头1～6胎次母猪的血清和初乳(分娩后6h内)样本，初乳样本使用前经900 g离心10 min去除脂肪层后，分别取150 µL初乳和血清样品使用NucleoSpin病毒RNA核酸提取试剂盒提取病毒核酸，并运用Wang等建立的基于TaqMan的 qPCR检测方法对血清和初乳样品进行PCV3检测；使用Palinski等先前公布的PCR测定法将PCV3阳性DNA片段（601～1 626 nt）进行108～101的系列稀释制作标准曲线，该DNA片段也用作qPCR测定的灵敏对照。随即使用仪器的内部软件完成目标DNA的拷贝数计算，测定的检测限为4 log基因组拷贝/mL；为了确认初乳样品中PCV3的存在，随机选择高PCV3滴度的初乳样品，再进行靶向PCV3部分ORF2区域(1～363 nt)的PCR检测，将PCR产物送至First BASE Laboratories Sdn Bhd(马来西亚)测序，并对获得的基因组序列应用BioEdit 7.0.9.0进行序列分析；使用GraphPad Prism 5对获得的PCV3数据进行统计学分析。

本次实验结果表明，血清和初乳样本中PCV3检出率分别为47.37%和44.74%，初产母猪初乳中PCV3检出率最高约为71%，经产母猪初乳中PCV3检出率为33%～43%。阳性动物血清和初乳中PCV3病毒滴度分别为5.06±0.44(n=18)和5.02±1.08(n=17)的对数基因组拷贝数/mL，其差别不明显。根据血清中的病毒滴度将母猪分为3组，高病毒血症母猪(9头)、低病毒血症母猪(9头)和非病毒血症母猪(20头)，其中高病毒性母猪初乳样品中PCV3的滴度(100%)显著高于其他两组，所以推测部分初乳中PCV3会受到病毒血症的影响。尽管血清和初乳中PCV3的检出率不同，但血清与初乳中PCV3的滴度呈正相关(相关系数0.49%)。根据母猪的繁殖参数(TB、BA、SB、MF)发现，母猪PCV3病毒血症的强弱和初乳中病毒含量的高低均未导致母猪生产性能发生明显的不同。将PCV3的部分ORF2序列与此前报道的泰国PCV3、PCV2(GenBank登录号：AF027217) 和PCV1（GU799575)进行比对，同源性分别为97.80%、54.41%和52.92%。 遗传系统进化树分析表明，其与先前报道的PCV3a处于同一进化分支，所以确定该PCV3属于PCV3a，并将其命名为PCV3/Thailand/RB01/17株（MH158731）。

Kedkovid R等研究发现该猪场母猪初乳中PCV3滴度与Dvorak 等研究的初乳中PCV2滴度差别不明显；但与高病毒血症母猪群相比，往往在低病毒血症母猪群的血清和初乳中PCV3的阳性率更高。此外，有研究表明与经产母猪相比，初产母猪的仔猪PCV2和PRRSV双重感染的风险更高。此次实验虽从初乳样本和19日龄仔猪中检测到了PCV3，但是目前还未观察到初乳中PCV3对母猪产生的临床影响，推测可能与研究中使用的母猪数量不足以检测到小的或不常见的影响有关。同时，该研究利用宏观基因方法也检测到了猪星状病毒4型和肝炎病毒，因此尚不能确定PCV3是患病猪的主要病原体。

据相关研究报道，PCV2母源抗体的存在虽不能避免仔猪感染PCV2，但可使仔猪避免发生猪圆环病毒相关疾病（PCVAD），即推测初乳中也可能存在PCV3抗体。Kedkovid R等研究证明了PCV3与猪的呼吸道疾病复合体(PRDC)有关。有报道PCV3的感染最早发生在5周龄，并且本实验中患病猪有亚临床的感染，所以仔猪哺乳期感染PCV3对今后的生长发育可能会有影响。相关研究报道证明PCV3与其他病毒(尤其是PCV2)存在共同感染，但该实验中并未检测到PCV2，推测可能与该农场接种PCV2疫苗有关。目前尚不清楚患病动物与其他病原体共同感染是否会对初乳中PCV3产生影响。为了进一步了解母乳中PCV3对母猪和仔猪产生的影响，后续将开展更多关于初乳中PCV3病原检测的深入性研究，为后期对母猪的有效管理和PCV3控制奠定基础。