猪大肠杆菌病的诊断与防治

2侯凤香2

(1.温州科技职业学院，浙江 温州 325006；2.温州市农业科学研究院)

大肠杆菌为环境常在菌，经口进入消化道，繁殖定居、终生伴随，通过粪便散播于周围环境，是一类能够引起人和动物共同感染的重要人兽共患病病原[1]。随着生猪大规模集约化生产养殖，猪大肠杆菌病的防治难度越来越大，特别是该病的防治主要依赖于抗生素，随着抗菌药物的大量使用，耐药菌株不断增加，并且呈现多重耐药，增加养殖成本，居高的病死率更是造成巨大经济损失；残留的药物、耐药菌不仅污染环境与食品，造成公共卫生安全隐患，更是对人类身心健康造成巨大威胁。因此加强对该病的诊断与检测，通过“少用药”“用好药”，是确保生猪产品安全，促进养猪业的绿色化、生态化发展重要途径[2-3]。

1 病原

大肠杆菌为原核生物，需氧或兼性厌氧菌，革兰氏染色为红色、阴性、短杆菌，无芽孢、常无荚膜、一般有数根鞭毛。大肠杆菌抗原结构复杂，菌体抗原主要为O抗原、H抗原、K抗原，通常以O∶K∶H的排列来表示其血清型，目前已知的O抗原173种、K抗原103种、H抗原60种，因此大肠杆菌血清型众多，且相互之间交叉缺乏保护，疫苗预防效果不佳[4]。该菌对营养要求不高，在血琼脂平板和普通琼脂平板上生长良好，对外界温度的抵抗力不强，通常60℃经过15 min即可灭活，常见的普通消毒剂如：百毒杀、过氧乙酸、优氯净等均可迅速将其杀死。

该病一年四季均可发生，寒冷多雨潮湿的季节发病严重，温暖干燥的季节发病少，天气突然变化、阴冷潮湿、饲料或是饲养条件的改变、卫生状况差等都可导致该病的发生。在任何猪场均有可能造成流行，难以根治。患病和携带病菌的动物为主要传染源，通过粪便排出病原体，污染外界环境如：饲料、水源、空气、器具以及母猪的皮肤、乳头等，分散于周边，长时间存在。新生仔猪通过饮食接触被污染的母猪及周边环境，从而感染致病性大肠杆菌引起腹泻[5]。

2 临床表现

大肠杆菌病在生猪养殖行业对仔猪生长阶段危害最为严重，主要体现在仔猪黄痢、白痢病和仔猪水肿病。

2.1仔猪黄痢 仔猪黄痢被称为早发性的大肠杆菌病，是由于仔猪感染病原性大肠杆菌而引起的一种急性且致死性高的疾病。主要表现以急性腹泻、排黄色水样稀便、迅速消瘦，终因脱水而死亡。1-3日龄的仔猪患病率高，但随着猪日龄的增加猪体患病率逐渐降低。

该病患病范围广，季节和气候变化对仔猪患黄痢的概率存在影响，降水量高的季节发病率高，干燥的季节发病率低。且密集养殖的发病率较分散养殖的发病率高。

2.1.1临床特征 病原性大肠杆菌的潜伏期短，一般在1-3 d，有少数会在7日龄左右发病。传染快，如猪窝内出现一头病猪，该窝其余猪会在1-2 d内相继患病，死亡率高达100%。发病特征最初为急性腹泻，排出黄灰色带有腥臭气味稀薄如水样的粪便，腹泻频率高，每隔数分钟就会发生1次腹泻，病体出现迅速脱水，导致短时间内器官功能衰竭，最后昏迷死亡。

2.1.2剖检结果 尸体表面因皮肤干燥而发生皱缩，口腔内壁粘膜发白，胃部膨大，其内容物为不完全消化物。病灶主要位于肠道部位，肠道剖检可观察到显著的肠道急性卡他性炎症，其中十二指肠部位最为严重，且周围黏膜有充血肿胀和出血现象，心脏，肝肾和肾脏存在出血与局部坏死[6]。

2.2仔猪白痢 是10-30日龄左右的仔猪养殖过程中较为常见的疾病。仔猪白痢特征为排乳白色或灰白色粥样稀便，该病具有较高的发病率，但致死率较低。造成该病的原因与养殖场当地的气候变化、仔猪饲养环境、卫生管理状况有关。

2.2.1临床特征 一般患病仔猪无明显的体温变化。病猪以排乳白色或灰白色带特殊腥臭的粥样稀便。病猪出现畏寒，体表消瘦，皮肤脱水干燥，发育迟缓等症状。日龄较小的仔猪较易夭折，一般病猪可自愈，该病在痊愈后的猪身上还有可能复发。

2.2.2剖检结果 部分肠壁黏膜存在充血现象，肠壁较薄有的呈半透明，肠系膜淋巴结存在轻微肿胀，肠道存在卡他性炎症。

2.3仔猪水肿病 仔猪水肿疾病是由溶血性的大肠杆菌引起的，该病在仔猪断奶后1-2周较为常见，主要特征是仔猪身体部位水肿，发病突然、出现癫痫、麻痹、僵直之类的神经症状，通常发病率在5%～30%左右且营养越好，长得越壮的猪发病率越高，一旦患病病死率高达90%。该病在春、秋两季常发，在缺乏某些维生素(VB和VE)和矿物质(硒)时发病率较高。

2.3.1临床特征 仔猪水肿病发病率低，但具有发病突然的特点，发病初期，病猪会出现伏地抽搐、流涎、呼吸衰竭、癫痫、共济失调、行动不自然(倒退，冲撞舍栏，转圈)等症状。病猪体表颜色与正常猪无明显差别，但在部分体表可观察到有充血现象，体温在正常值左右，有时会超过正常值。患病猪会表现出厌食或绝食行为。如若不及时治疗，随着病程延长，在患病猪的眼睑及颈部，头部发生水肿现象，继而死亡。

2.3.2剖检结果 在患病猪胃壁和肠系膜可见明显成半固体样水肿，水肿部位变厚且在肌层和黏膜间存在半固体样水肿液。心包，胸腹腔存在较多积液，肝脏肿大，肾脏存在淤血和水肿，在小肠部分(十二指肠、空肠)黏膜存在弥漫性出血。大肠处存在卡他性肠炎。

3 诊断

通过仔猪发病后的临床症状和解剖后的病理变化作出初步诊断，然后采集病料，用灭菌棉采集病死猪的直肠粪便或是肠内容物，接种于麦康凯培养基，37℃恒温培养箱培养18-24 h，挑取粉红色菌落接种至伊红美蓝平板，37℃恒温培养箱培养18-24 h，然后挑取扁平、深紫黑色、湿润、光滑，带金属光泽的菌落，接种至营养琼脂平板进行纯培养，37℃恒温培养箱培养18-24 h进行细菌的鉴定。

3.1革兰氏染色 挑取单菌落，经过涂片-干燥-固定-染色等步骤，进行镜检为：红色，两端顿圆中等大小杆菌、单个或是两三个连在一起，无芽孢[7]。

3.2生化实验

3.2.1氢氧化钾拉丝试验(0.4 g/10 mL KOH应新鲜配制) 取1小滴氢氧化钾溶液于洁净玻片上，用接种环刮取1～2个新鲜菌落，于溶液中研磨混匀，并每隔几秒上提接种环，观察能否拉出粘丝。能拉出丝者为革兰氏阴性菌。大多数革兰氏阴性菌于5-10 s内出现阳性反应，有的需要30-60 s，革兰氏阳性菌在60 s以后仍为阴性。

3.2.2氧化酶试验 用棉签蘸取细菌少许，滴加Kovac试剂，呈深紫色为阳性(10～15 s内呈紫色)，不变色为阴性。

3.2.3肠杆菌科微量生化反管 可以购买整套肠杆菌科微量生化反应管，依据说明书进行操作判定。

3.3PCR鉴定 根据GenBank 数据库，设计通用引物，用纯培养的细菌做底物，进行PCR 扩增，然后将扩增的产物纯化后送生物公司进行测序分析，将测序结果进行BLAST 分析，鉴定细菌[8]。

3.4血清型鉴定 利用微量平板凝集试验鉴定分离株的O 抗原血清型，所有细菌分离株严格按照试剂产品使用说明书进行操作检测大肠杆菌血清型。

3.5药敏试验 采用药敏纸片扩散法进行药敏试验[3]，贴药敏纸片,在15 min内将纸片贴于平板表面，各纸片中心距离不小于24 mm，通常90 mm平皿可贴6～7个纸片，孵育16-18 h叠放平板不超过3个。通过上述操作可以确诊本病。

4 综合防治措施

4.1预防 猪大肠杆菌病的防制措施主要是以预防为主，大肠杆菌病发病原因与猪舍环境卫生好坏和季节气候的变化等有关，要做好该病的预防工作首先是要改善猪舍环境及卫生条件，猪舍勤消毒，勤打扫，可用生石灰对猪舍进行消毒，有条件可使用紫外灯照射消毒。及时对仔猪进行免疫接种，可选用肠杆菌k88、K99、987p 三价灭活菌苗或是K88、K99 双价基因工程菌苗对母猪进行免疫接种使新生仔猪对猪大肠杆菌病具有相应抗体以减少患病率，有过大肠杆菌病史的养殖场要特别注意免疫接种这一点[9]。

其次在春季、秋季、冬季这些温度较低的时候为猪舍做好保暖手段，仔猪成长阶段对外界季节气候变化的适应能力较低，若不及时做好保温措施会增加仔猪患病的概率，因此猪舍要做好防风保暖的措施。猪舍温度湿度调控要根据仔猪不同的生长阶段而定1～10日龄左右仔猪：温度控制在28～32℃左右，相对湿度控制在70%左右；11-30日龄左右仔猪：温度控制在25～28℃左右，相对湿度控制在65%～70%左右；31-60日龄左右仔猪：温度控制在22～25℃左右，相对湿度控制在65%左右。

从外面引进的仔猪要尽量保持其在原产地的饲养管理方法一周以上，等待仔猪适应当地情况，再逐渐改用本地猪场饲料配方，且平时增加仔猪的运动量增强抵抗力。对怀孕母猪的管理措施也要加强，保证母猪营养摄取，按照标准配比适用于不同阶段怀孕母猪的饲料方案。加强对母猪的待产护理，生产前用消毒液擦拭母猪乳头、阴部，时时关注母猪健康，留意母猪有无患乳房或子宫疾病，注意保持产房的卫生干净，切勿使产房受粪污污染。

若是发生大肠杆菌病时对猪群中未患病的猪及时进行隔离，对未患病猪投放适量的抗菌药物，对已经病死猪进行无害化处理，对猪舍进行全面消毒，切断病菌传播途径。

4.2治疗

4.2.1仔猪黄痢 仔猪黄痢具有急性且致死性高的特点，一旦发现有猪患上该病应立即与猪群隔离并定期对猪舍进行全面消毒以防止病原性大肠杆菌扩散并对其余仔猪进行药物预防，该病可以用抗生素进行治疗，可选用庆大霉素、新霉素、氨基糖苷类或氟喹诺酮类等抗生素进行治疗，但大肠杆菌极易对抗生素产生耐药性，建议使用两种或多种抗生素交替用药。使用生物制剂“促菌生”调节肠道氧含量来改善肠道内菌群平衡。给妊娠期间母猪注射免疫疫苗为新生仔猪提供相应抗体。适当提高圈内温度，保持圈内相对干燥。除此之外还可以用生态制剂如促菌生与药用酵母合用，用以调节肠道内菌群的平衡但要注意生态制剂不能与抗菌药物同时使用，以免抗菌药物抑制生态制剂的效果降低药效。

4.2.2仔猪白痢 仔猪白痢在养殖过程中较为常见，该病危险性远低于黄痢病，对于该病首选药物有硫酸链霉素、硫酸庆大霉素、盐酸黄霉素等。硫酸庆大霉素控制量应在每头猪2 mL左右，一日注射或是投喂两次，持续一周投喂或是注射。盐酸黄霉素剂量控制在每头猪5 mg左右，肌注，每日两次，连续注射三天。期间也需要注意猪舍内部卫生以及舍内温度，做到勤打扫，勤消毒。做好仔猪及母猪的饲养管理工作，保证仔猪及母猪的营养摄入，增强生猪体质，这样有助于降低白痢发病率。还可选用黄连素，大蒜，甘草切碎与白酒混合的浸泡液同时辅以活性炭、矽炭银、鞣酸蛋白用于收敛止泻。

4.2.3仔猪水肿病 仔猪水肿病的治疗药物有硫酸新霉素、硫酸链霉素、卡那霉素等，治疗时可以先向病患猪的食料中适量添加盐类泻剂，再用硫酸新霉素、硫酸链霉素、卡那霉素注射，每天两次，连续使用2-3 d。对暂时未发病仔猪食料中适当添加抗菌药物或是添加适量的大蒜(每头10 g )、磺胺嘧啶等。引起仔猪水肿病的其中一个原因是由于仔猪缺乏相应的矿物质(硒，铁)和维生素(VB和VE)所以对仔猪适当补充硒和VE、VB有助于治疗。有效补硒措施：一周龄仔猪肌注0.5 mL 0.1%亚硒酸钠。补铁可选用右旋糖酐铁剂。

仔猪水肿病发病突然，一旦发病死亡率极高，所以要做好应对该病的预防措施，保持良好的猪舍环境卫生，勤消毒。加强断奶后仔猪的饲养管理，逐渐减少仔猪的吃奶量，使其有过程的断奶，切不可突然断奶使其不适应，也不能突然改变饲料配方，要注意饲料不能太过单一，对哺乳期仔猪饲料中适当添加维生素及矿物质增强其抗病能力。

5 小结

在动物疫病的防治过程中，防重于治的理念一定要落于实处，同时要改变传统的“用好药，好得快”错误概念，要加强疫病的诊断与检测，最好通过药敏试验选择廉价的效果好的药物，同时要注意联合用药、轮换用药，延缓耐药菌的产生，同时通过血清型的鉴定，在预防时依据本场的细菌流行株进行疫苗的选择，做到有的放矢，起到事半功倍的效果。

仔猪大肠杆菌病难以根治，易传播，随着规模化集约化养殖场的建成，猪群密集程度越来越高，仔猪大肠杆菌病的发病率也在逐渐增加，因此生猪养殖过程中要重点关注大肠杆菌病的发生，并做到早发现，早诊断，早隔离，早治疗，切勿延误最佳治疗时期以免造成无可挽回的经济损失。