河南省家畜家禽中弓形虫感染状况

赵林静 张振超 刘世国

【摘要】目的：分析河南省家畜、家禽和寵物中弓形虫感染状况。方法：随机提取河南省各地动物样品，酚氯仿法提取总DNA，弓形虫529 重复序列为靶基因，巢式PCR检测样品目的基因。结果：各种动物弓形虫阳性率不同，总阳性率是14.31%。结论：猫感染率最高，猪和鸽感染率最低。

【关键词】弓形虫；家畜；家禽；宠物；巢式PCR

【中图分类号】R249 【文献标识码】B 【文章编号】2095-6851（2018）10-168-01

了解食用肉类中弓形虫感染情况对弓形虫预防很有意义。弓形虫检测包括血清学、形态学、动物接种和核酸检测等，其中巢式PCR灵敏度高，适用于流行病学调查[1]，目前基于529片段的巢式PCR被应用于弓形虫检测。

1 材料和方法

1.1 试剂 蛋白酶K购自Merck公司，Tris饱和酚和PCR扩增试剂购自康为公司，弓形虫RH株保存在本实验室，其余试剂均购自国内。

1.2 样品采集和处理 共计1909例组织和血样，随机采自省内的8个市场、12个家禽场和434位农户。采样后均置于-80℃超低温保存。

1.3 提取样品DNA 组织样入液氮研粉，血样去红细胞离心获取沉淀后于56°C蛋白酶K消化后次离心，留上清液提取样品DNA和弓形虫RH株。

1.4 巢式PCR扩增 样品基因组DNA为模板，引物序列如下，外套引物F： 5'-CGC TGC AGG GAG GAA GAC GAA AGTTG-3' 和R：5'-CGC TGC AGA CAC AGT GCA TCT GGA TT-3'；内套引物F： 5'-AGA AGG GAC AGA AGT CGA AG–3' 和 R： 5'–CTC CAC TCT TCA ATT CTC TCC–3'。引物由生工公司合成，PCR条件：95℃2min； 95℃30s，68℃30s，72℃50s，共35个循环；95℃30s，58℃30，72℃50s，72℃5min，共15个循环。弓形虫RH株DNA为阳性对照，正常血样DNA为阴性对照，ddH2O为空白对照。

1.5 统计分析 SPSS19.0软件，x2检验比较阳性率，P<0.05为差异有意义。

2 结果

2.1 扩增结果 目标条带是260 bp，即弓形虫529片段。RH株在260bp有明显条带，阴性对照和空白对照均无目标条带。

2.2 河南省家畜家禽中弓形虫阳性率

2.3 河南省家畜肉类中弓形虫阳性率

2.4 河南省家禽肉类中弓形虫阳性率 鸡肉和鸭肉x2=38.594；鸡肉和鹅肉x2=7.137；鸡肉和鸽肉x2=82.972；鸭肉和鹅肉x2=11.512；鸭肉和鸽肉x2=6.015；鹅肉和鸽肉x2=36.684，差异均P<0.05。

3 讨论

猫是弓形虫的终宿主，猫粪便中的卵囊容易污染环境，狗的皮毛中卵囊也容易传染给人类[2]，宠物是人类弓形虫感染的重要来源，另一个感染的途径是食用被弓形虫感染的肉类。虫体在动物组织中形成包囊，烹饪不当会导致人类弓形虫感染。家畜和家禽的弓形虫感染率在不同的国家和地区是不同的[3-5]。

河南省位于中国中部，淡水湖泊等水域面积小，猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉是当地居民的主要肉食来源，而鸭和鹅的食用量比南方少。在河南省家畜中，猪弓形虫感染率最低，而牛和羊的感染率最高，因为猪是人工饲养，但牛和羊多是半放牧式饲养，牛和羊更多接触到草和土壤中的弓形虫卵囊。

在家禽中鹅的弓形虫感染率最高。Maksimov 于2010年报道[6]在德国鸭和鹅的弓形虫感染率相似。鹅的生长周期比鸭的长，因此鹅的弓形虫感染率高于鸭。河南省鸡的饲料是菜叶青草，也增加了鸡的弓形虫感染率。鸽子通常被笼养，饲料是谷物，所以鸽的弓形虫感染率最低。

宠物最容易被弓形虫感染，其次是家禽和家畜。猫和狗的特别健康妇幼天地弓形虫感染率差别很明显。猫是弓形虫的终宿主并且接触鼠类多，所以猫弓形虫感染率高；而狗弓形虫感染率比猫低。

参考文献：

[1] Aroussi A， Vignoles P， Dalmay F， Wimel L， Darde ML， Mercier A.Detection of Toxoplasma gondii DNA in horse meat from supermarkets in France and performance evaluation of two serological tests.Parasite.2015；22：14

[2] Liu Y， He G， Cheng Z， Qi Y， Liu J， Zhang H， Liu G， Shi D， Yang D， Wang S， Wang Z.Seroprevalence of Toxoplasma gondii in dogs in Shandong， Henan， and Heilongjiang Provinces， and in the Xinjiang Uygur Autonomous Region， People's Republic of China.J Parasitol.2012；98：211-2

[3] Cong W， Huang SY， Zhou DH， Xu MJ， Wu SM， Yan C， Zhao Q， Song HQ， Zhu XQ.First report of Toxoplasma gondii infection in market-sold adult chickens， ducks and pigeons in northwest China.Parasit Vectors.2012；5：110

[4] Holec-Gasior L， Kur J， Hiszczynska-Sawicka E， Drapala D， Dominiak-Gorski B， Pejsak Z.Application of recombinant antigens in serodiagnosis of swine toxoplasmosis and prevalence of Toxoplasma gondii infection among pigs in Poland.Pol J Vet Sci.2010；13：457-64

[5] Reiterova K， Spilovska S， Antolova D， Dubinsky P.Neospora caninum， potential cause of abortions in dairy cows： the current serological follow-up in Slovakia.Vet Parasitol.2009；159：1-6

[6] Maksimov P， Buschtons S， Herrmann DC， Conraths FJ， Gorlich K， Tenter AM， Dubey JP， Nagel-Kohl U， Thoms B.Serological survey and risk factors for Toxoplasma gondii in domestic ducks and geese in Lower Saxony， Germany.Vet Parasitol.2011；182：140-9