桑杜口服液增强猪蓝耳疫苗免疫效果

陈晓兰， 杨海峰， 张 龙

(江苏农牧科技职业学院，江苏泰州 225300)

猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的猪繁殖与呼吸障碍性疾病，又称猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，简称PRRS)，该病以繁殖障碍、呼吸困难、耳朵蓝紫色为主要症状，严重危害养猪业的发展，在发病过程中还会并发其他传染病[1]。该病的发生没有明显的季节性，通常经呼吸道传播，患病猪和带毒猪均可以向空气中排毒，严重污染周围的环境，若消毒措施做得不到位，病毒能在猪场内长期存在。气候骤变或未经检测直接引进猪种，是本病诱因[2]。

目前该病没有特殊的治疗方法，预防被认为是最为有效的手段。而蓝耳疫苗在免疫过程中，经常会出现免疫失败，疫苗免疫效果差是其中最为重要的原因。因此，本研究在药理试验基础上，选择桑杜口服液(MP-EUP oral solution)作为免疫增强剂，观察其对猪蓝耳疫苗免疫效果的影响。

1 材料与方法

1.1 药物和疫苗

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome viru，简称PRRSV)活疫苗(R98株，批号为1201030)，购于江苏南农高科技股份有限公司，根据使用说明在临用前用40 mL灭菌生理盐水进行稀释。

复方桑杜口服液，是由桑叶多糖和杜仲水提物制成的口服液，总多糖含量为24 mg/mL，由江苏农牧科技职业学院提供。取适量体积桑杜口服液，将其稀释为2.4、1.6、0.8 mg/mL，待用。

1.2 试剂与仪器

PRRSV ELISA抗体检测试剂盒，购自武汉科前生物股份有限公司；Porcine IgG ELISA KIT、Porcine IL-2 ELISA KIT、Porcine IFN-γ ELISA KIT均购自生工生物工程(上海)股份有限公司；高速冷冻离心机，购自上海安亭科学仪器厂；酶标仪-ELX800，购自美国伯腾仪器有限公司。

1.3 动物及免疫

100头30日龄健康三元杂交仔猪(海安某养殖场)，饲喂猪全价饲料。随机分为5组，每组20头。分组与处理方法见表1。33日龄时各免疫组颈部肌注射稀释好的PRRSV活疫苗(R98株)，1 mL/头，各给药组分别于免疫前3 d开始给药，桑杜口服液高、中、低剂量组分别灌胃总多糖浓度为2.4、1.6、0.8 mg/mL的桑杜口服液稀释溶液各5 mL。连续给药 7 d，首免后30 d(即63日龄时)进行二免(二免方法同首免)，二免前3 d对3个给药组同法给药。

注：MP-EUPH表示桑杜口服液高剂量；MP-EUPM表示桑杜口服液中剂量；MP-EUPL表示桑杜口服液低剂量。下表同。

1.4 检测指标

1.4.1 临床体征观察 每天观察记录各组猪的精神状态、采食、饮水、粪便等变化情况。

1.4.2 血清抗体及相关细胞因子含量 猪首次免疫后7、14、21、28 d，每组随机抽取4头猪，进行前腔静脉采血，5 mL/头，制备血清。采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA)测定血清中猪蓝耳特异性抗体效价，并测定免疫后7、14、21 d各组血清中白介素2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)、免疫球蛋白G(IgG)等细胞因子的分泌量。

1.4.3 体质量 分别于30日龄和60日龄称取各组猪体质量，并计算平均增质量率：增质量率=[(称量体质量-首免前体质量)/首免前体质量]×100%。

1.5 数据分析

数据以平均值±标准差表示，用SPSS 18.0软件进行Duncan’s多重分析，比较血清抗体、相关细胞因子及体质量变化。

2 结果与分析

2.1 临床体征变化

试验期间，各组猪精神状态良好，采食、饮水正常，粪便正常，未见死亡。

2.2 血清抗体效价的变化

由表2可知，在首免前，各组血清特异性抗体效价无显著差异；在首免后7 d，各给药组的血清抗体效价均显著高于免疫对照组和空白对照组；在首免后14 d，中剂量组抗体效价显著高于其他各组；在首免后21、28 d，高、中剂量组均显著高于免疫对照组和空白对照组。

表2 中药复方多糖对免疫猪蓝耳疫苗猪血清抗体效价的影响

注：同列数据后不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，下表同。

2.3 血清IL-2浓度的变化

由表3可知，猪首次免疫猪蓝耳疫苗后7 d，桑杜口服液中剂量组血清中的IL-2浓度显著高于除高剂量组外的其他各组；在首免后14 d，中剂量组血清中IL-2浓度显著高于其他各组；在首免后21 d，高、中剂量组血清中IL-2浓度显著高于其他各组。

表3 血清中IL-2浓度的变化

2.4 血清IFN-γ浓度的变化

由表4可知，猪首次免疫猪蓝耳疫苗后7、14 d，复方桑杜口服液高、中剂量组血清IFN-γ浓度显著高于其他各组；在首免后21 d，中剂量组血清IFN-γ浓度显著高于除高剂量组外的其他各组。

表4 血清中IFN-γ浓度的变化

2.5 血清IgG浓度的变化

由表5可知，猪首次免疫猪蓝耳疫苗后7 d，各免疫组血清IgG浓度显著高于空白对照组；在首免后14 d，桑杜口服液所有给药组血清IgG浓度显著高于免疫对照组和空白对照组；在首免后21 d，桑杜口服液组中剂量组血清IgG浓度显著高于免疫对照组和空白对照组。

表5 血清中IgG浓度的变化

2.6 各组猪体质量的变化

由表6可知，各组仔猪30日龄时体质量相似，无显著差异；60日龄时复方桑杜口服液中剂量组体质量和增质量率最大，增质量率显著高于其他各组。

表6 各组体质量的变化

3 结论与讨论

机体免疫力低下常常诱发动物疾病的发生[3]。中药多糖有抗肿瘤、增强免疫[4]、降低血糖、抗癌[5]、抗衰老、抗辐射等多种作用[6]。因绿色、环保、低毒、低残留等特点[7]，其增强免疫活性倍受重视[8]。因此，在药理研究基础上，开展桑杜口服液增强免疫的临床效果研究。

PRRSV免疫猪后，在血清中会产生特异性PRRSV抗体，抗体效价越高，则产生的免疫保护力越强[9]。因此，本试验选择猪蓝耳病血清特异性抗体作为疫苗免疫水平的指标。结果表明，在免疫后的所有时间点桑杜口服液中剂量组猪蓝耳病血清特异性抗体效价显著高于低剂量组、免疫对照和空白对照组，与高剂量组效价相似。表明猪在免疫前3 d口服桑杜口服液，连续给药7 d，能显著提高特异性抗体产生水平，增强体液免疫功能。

T细胞在免疫应答中发挥关键作用，其释放的多种细胞因子也参与细胞免疫、体液免疫、炎症反应、损伤修复等多项重要生理过程[10]。IL-2主要由Th1细胞分泌，为T细胞生长因子，是造成T细胞增殖的主要细胞因子，除刺激T细胞外，还能刺激NK细胞的生长，并增强NK细胞的杀伤能力，同时激发B细胞生长，促进抗体的产生[10]。IFN-γ是由Th1细胞分泌的，参与调节细胞免疫[11]，如可激活单核细胞或巨噬细胞，诱导及增加MHCⅠ类分子和MHCⅡ类分子的表达，促进T细胞的分化，增强抗原呈递，从而促进机体特异性免疫[10，12]。因此，血清中IL-2和IFN-γ的浓度的大小可反映机体细胞免疫功能[13]。本试验结果表明，桑杜口服液高、中剂量组在首免后大部分时间点血清中IL-2和IFN-γ含量均显著高于低剂量组、免疫对照组和空白对照组。说明桑杜口服液在高、中剂量时能显著提高猪体细胞免疫功能。

动物在受到抗原刺激后可产生免疫球蛋白，其中IgG作为一种免疫球蛋白有抗菌、抗病毒、中和毒素、调理、凝集和沉淀抗原等作用，在体液免疫中非常重要[14]。本试验中桑杜口服液高、中剂量组在首免后14和21 d血清中IgG含量均显著高于免疫对照组和空白对照组，表明桑杜口服液配合猪蓝耳病疫苗一起使用可显著提高血清IgG水平，增强机体的抗菌、抗病毒和抗毒素水平。

结果显示，60日龄时复方桑杜口服液中剂量组体质量和增质量率最大，表明中剂量组不仅能提高疫苗的免疫水平，还具有显著的增质量效果。可以得出结论：猪在接种猪蓝耳病疫苗的同时以8 mg/头剂量灌胃桑杜口服液，可显著提高猪蓝耳病特异性抗体产生水平，可增强IL-2、IFN-γ介导的细胞免疫功能和IgG介导的体液免疫功能。