高效液相色谱法测定洗浴产品中6—姜醇和6—姜酚含量

谭焯针　余丹瑶　魏海峰　张沛林　李慧怡　郭长虹

【摘 要】建立测定洗浴产品中6-姜醇、6-姜酚2种生姜活性成分的高效液相色谱分析方法。洗发水和沐浴露样品经甲醇涡旋混匀及超声提取后，用AQ-C18反相色谱柱进行分离，以乙腈-水作为流动相，梯度洗脱，采用二极管阵列检测器（PDA）进行检测，检测波长为280nm。在优化的实验条件下，6-姜醇和6-姜酚在2.5～50.0mg/L范围内线性关系良好，相关系数均为0.9997。在12.5、50.0、250.0mg/kg 3个添加浓度水平下，加标回收率为87.5%～102.8%，相对标准偏差为0.8%～4.2%。6-姜醇和6-姜酚的方法检出限（S/N=3）为4.0 mg/kg，定量限（S/N=10）为12.5mg/kg。该方法简单、准确、稳定性高，适用于洗浴产品中6-姜醇、6-姜酚的测定。

【关键词】6-姜醇、6-姜酚；洗浴产品；高效液相色谱法

中图分类号： R284；O657.72 文献标识码： A 文章编号： 2095-2457（2018）23-0287-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.23.130

【Abstract】A method of high performance liquid chromatography was developed for the simultaneous determination of 6-gingerol and 6-zingiberol in bath products.The samples of shampoo and body wash were extracted with methanol by ultrasound extraction technology.Chromatographic separation was performed on reversed phase column of AQ-C18，with gradient elution using acetonitrile and water as the mobile phases.The detection was performed with a Photo-Diode Array（PDA）detector.The ultraviolet detection wavelength was set at 280nm.With this method，6-gingerol and 6-zingiberol had good linear crossing range from 2.5 to 50.0mg/L with the same correlation coefficient 0.9997.The average recoveries of 6-gingerol and 6-zingiberol were 87.5%～102.8% with the relative standard deviation in the range of 0.8%～4.2%.The method limits of detection（S/N=3） were 4.0mg/kg，and the method limits of quantification（S/N=10） were 12.5mg/kg.With the advantages of simple，rapid and accuracy，this method was suitable for the determination of 6-gingerol and 6-zingiberol in bath products.

【Key words】6-gingerol and 6-zingiberol；Bath products；High performance liquid chromatography （HPLC）

生姜是一種世界范围内广泛使用的香辛调味料，生姜在中医药有止呕止咳的功效，我国具有悠久的生姜入药和食用生姜传统。姜辣素是构成生姜中辛辣口感的主要生物活性成分。研究表明：姜酚类和姜醇类物质是姜辣素的主要构成成分之一[1]，姜酚实验证明具有强心、保肝利肝、抗血小板凝胶等多种保健作用[2-3]，姜醇也同样具有抗氧化、抗炎等生理功效[4]。6-姜酚是生姜中姜酚类物质的主要成分，约占75%[5]。生姜以及姜油提取物广泛应用于食品、保健品、化妆品，姜根提取物常添加于洗发水和沐浴露产品中，增强其香气及功效作用。

高效液相色谱法是最常用于测定姜醇和姜酚的方法，目前文献报道的检测对象主要是生姜及姜根提取物，并没有检验方法可用于洗浴产品中姜醇和姜酚含量的检测。生姜及生姜提取物中姜醇和姜酚的含量较高（0.59～7.91mg/g）[6]，故文献报道的方法检出限均较高。刘雯等建立了生姜提取物中6-姜酚含量HPLC检测方法[7]，线性范围为25～350mg/L，6-姜酚的仪器检出限为0.8mg/L。张科卫等建立高效液相色谱法测定小半夏汤中6-姜酚和6-姜醇的检测方法[8]，6-姜酚的线性范围127.3～1445.7mg/L，6-姜酚的线性范围44.4～399.6mg/L。本研究采用高效液相色谱法检测洗浴产品中的6-姜醇和6-姜酚，6-姜醇和6-姜酚方法检出限均达到4.0mg/kg，该方法操作简单、准确、稳定性高，对洗浴产品中姜辣素的检测有重要意义。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：Waters 2988（配有PDA检测器）；超纯水系统：Milli-Q型；

6-姜醇（纯度98.7%），6-姜酚（纯度95.5%）标准品来源于ChromaDEX；

甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯）；超纯水（18.2MΩ），实验室自制。

1.2 标准溶液制备

标准储备溶液：分别准确称取6-姜醇，6-姜酚标准品10mg（精确至0.1mg），用甲醇定容到刻度，摇匀，配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液，-20℃存放。

标准工作液：分别移取一定量的标准储备液于10 mL比色管中，用甲醇定容到刻度，摇匀，配制成浓度分别为2.5，5.0，10.0，25.0，50.0mg/L的标准工作液。

1.3 样品前处理

准确称取2.0g（精确至0.001g）样品，置于10mL比色管中，用甲醇定容至刻度线，涡旋混匀，超声提取15min，以10000r/min高速离心8min，取部分样品溶液，过0.22μm滤膜，待测。

1.4 色谱条件

色谱柱：AQ-C18（月旭科技（上海））4.6mm×250mm，5μm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样体积：20L。流动相：水+乙腈，梯度洗脱；梯度洗脱程序：0～8min，20%乙腈，8～9min，70%乙腈，9～18min，70%乙腈，19～25min，20%乙腈；检测波长为：280nm。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

6-姜醇和6-姜酚在220nm和280nm处有均有较强紫外吸收。280nm处波长吸收溶剂、基质的干扰较小，满足灵敏度要求，综合考虑，选择280nm作为检测波长。

2.2 液相色谱分离条件的优化

洗发水和沐浴露中添加抗菌抑菌的功效成分和多种天然成分提取物，未知物对6-姜醇和6-姜酚的液相分离干扰较大，采用梯度洗脱能提高分离度，降低未知物对目标化合物的干扰；乙腈有较强的洗脱能力，能使色谱峰有更好的对称峰形同时能节省色谱分析时间，所以采用乙腈-水作为流动相，梯度洗脱分离。经试验优化，有效的实现目标化合物在洗浴产品中的色谱分离，且峰形对称（见图1）。

2.3 提取溶剂的选择

本方法优化阶段选用化妆品中有机小分子常用的提取溶剂甲醇作为目标物的提取溶剂，甲醇可以完全溶解水基化妆品和香波，6-姜醇和6-姜酚在甲醇均有较高溶解度，方法的提取回收率高，所以确定甲醇作为提取溶剂。

2.4 方法的线性关系与检出限

在优化实验条件下，对1.2中的系列标准工作溶液进行测定，以横坐标为洗浴产品中-姜醇和6-姜酚的质量浓度（X，mg/L），纵坐标为6-姜醇和6-姜酚的色谱响应峰面积（Y）绘制标准曲线，得线性回归方程及相关系数。实验结果：在2.5～50.0mg/L范围内，6-姜醇和6-姜酚的线性关系良好，线性方程分别为y=13809x-11675和y=13695x-10001，相关系数（R2）均为0.9997。

采用空白基质样品加标，通过计算得到6-姜醇和6-姜酚的方法检出限（MLOD，S/N=3）为4.0mg/kg，方法定量限（MLOQ，S/N=10）为12.5mg/kg，其灵敏度满足分析要求。

2.5 方法的回收率与精密度

分别选用洗发水空白样品为加标基质，按本试验条件进行低、中、高（12.5、50.0、125.0mg/kg）3个添加水平的添加回收率试验，每一水平设6个平行，测定结果见表1。结果显示，沐浴露产品的平均回收率为87.5%～102.8%，相对标准偏差为0.8%～4.2%，表明方法具有较高的回收率，准确度和精密度。

3 结语

本研究建立了高效液相色谱法测定洗浴洗涤产品中6-姜醇和6-姜酚的分析方法，对色谱分离条件进行了优化，样品采用甲醇溶液进行提取，采用AQ- C18柱进行分离，分离度良好。本方法灵敏度高、重现性好、操作简单、准确可靠，为洗浴产品中6-姜醇和6-姜酚的定性定量检测提供可靠的分析方法。

【参考文献】

[1]余珍，巫华美，丁定垲.生姜的挥发性化学成分[J].云南植物研究，1998，20（1）：113-118.

[2]赵文竹，于志鹏，励建荣等.生姜的化学成分及生物活性研究进展[J].食品工业科技，2016，36（11）：383-389.

[3]姜程曦，宋娇，程锦国等.姜中姜酚和姜醇的研究进展[J].中草药，2015，46（16）：2499-2504.

[4]Mo K，Liu S，Cheng C.Study on Antioxidant Activity of the Ginger Flavonoid[J].Food Science.2006，27（9）：110-115.

[5]楊健，王兆进，李海伟等.不同干燥方法对生姜6-姜酚含量的影响[J].中国食品添加剂，2012，11：111-114.

[6]张永鑫，李俊松，蔡宝昌等.高效液相色谱法同时测定姜及其不同炮制品中5种姜辣素的含量[J].中国药学杂志，2012，47（6）：471-474.

[7]刘雯，刘佳乐，张利萍等.HPLC法测定生姜提取物中6-姜酚含量的研究.广东化工[J].2014，41（17）：169-170.

[8]张科卫，吴皓，崔小兵.HPLC法测定小半夏汤中6-姜酚和6-姜醇.中草药[J]，2009，40（10）：1579-1581.