术前血清PTX-3水平与结直肠癌根治术后复发的关系

高灵灵，管金磊，刘占辉，颜伟，李瑞池，李会允，耿玉兰

(1 河北医科大学第一医院，石家庄050031；2 河北医科大学第四医院)

结直肠癌(CRC)是癌症患者死亡的主要原因之一[1]。尽管早期诊断方法和外科根治手术应用大大减少了病死率，但是仍有半数以上患者根治术后发生转移和继发性死亡[2]。病理TNM分期是CRC患者疾病进展的金标准，但仍有局限性，无法识别复发高危患者[2～4]。临床急需对CRC复发敏感的生物标志物，以便发现肿瘤逃逸的高危人群，并对其监测和早期干预。很多肿瘤的发生、发展都伴有慢性炎症的发展过程，炎症微环境中细胞因子等炎性应答介质能诱导DNA甲基化、抑癌基因突变等变化，最终导致癌症的发生和发展。研究显示，有高循环水平炎症介质的个体发生CRC的风险高[5，6]。穿透素3(PTX-3)属于炎症急性期反应蛋白，通过与胶原和纤维蛋白原相互作用，促使胶原和纤维蛋白原包裹肿瘤细胞，扩大固有免疫的效应功能，使肿瘤细胞不为机体免疫系统识别，从而造成CRC转移复发[7]。本研究对CRC患者根治术后行为期5年的随访，探讨了术前血清PTX-3水平与术后CRC复发的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2010年1月～2011年12月河北医科大学第一医院收治的CRC患者。纳入标准：参照2012年卫计委公布的《结直肠癌诊断》标准(WS/T386-2012)，经结肠镜组织病理学检查证实；行CRC根治手术后随访5年；获得医院医学伦理委员会批准，签署知情同意书；排除胰腺疾病和其他系统原发恶性肿瘤；排除有其他肠道疾病；排除采血前放化疗以及中成药等抗肿瘤治疗。共收集患者542例，男303例、女239例，年龄38～82(51.3±16.3)岁。随访期结束，复发68例(观察组)、未复发474例(对照组)。观察组男38例、女30例；年龄(49.3±17.2)岁；体质量指数(20.3±6.3)kg/m2；结肠肿瘤41例、直肠肿瘤27例；肿瘤直径<4 cm 19例、≥4 cm 49例。对照组男265例、女209例；年龄(53.2±23.1)岁；体质量指数(23.1±5.2)kg/m2；结肠肿瘤305例、直肠肿瘤169例；肿瘤直径<4 cm 162例、≥4 cm 312例。两组性别、年龄、体质量指数、肿瘤部位、肿瘤直径差异均无统计学意义(P均>0.05)。观察组外周血白细胞(WBC)、中性粒细胞(N)、淋巴细胞(L)、血小板(PLT)、癌胚抗原(CEA)、血管内皮生长因子(VEGF)均高于对照组(P均<0.05)。见表1。

1.2 术前血清PTX-3检测方法 所有CRC患者于根治术前隔夜空腹采集静脉血3 mL，置于促凝真空采血管室温凝集，并在1 h内3 000 r/min离心10 min，取上清于-70 ℃冰箱贮存待检。将血清样本室温融解，使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清PTX-3。所用试剂购自美国R&D Systems公司，检测仪器为奥地利Tecan Sunrise酶标仪。操作严格按试剂盒说明书进行，平行测定2次，求均值。

表1 两组血常规、CEA、VEGF比较

2 结果

2.1 两组术前血清PTX-3水平比较 观察组、对照组的术前血清PTX-3分别为(8.68±2.64)、(5.23±2.09)ng/mL，观察组高于对照组(P<0.05)。

2.2 术前血清PTX-3与术后CRC复发的关系 将两组差异有统计学意义的临床病理参数通过多因素Logistic回归法分析，发现CEA(OR=3.995，95%CI为1.326～13.882，P<0.01)、VEGF(OR=4.127，95%CI为2.034～13.633，P<0.01)、PTX-3(OR=6.238，95%CI为4.019～19.235，P<0.01)均为CRC患者根治术后复发的独立危险因素。使用CEA、VEGF校正后，发现术前血清PTX-3升高患者，术后CRC复发的危险升高1.3倍(OR=1.309，95%CI为0.931～3.017，P<0.01)。

3 讨论

CRC是常见的消化道恶性肿瘤之一，世界范围内其发病率和病死率常年居高不下，目前惟一可根治的方法就是手术切除。TNM分期Ⅰ期、Ⅱ期CRC患者外科根治术后5年生存率为95%、60%～80%，但是Ⅲ期、Ⅳ期患者5年生存率仅为35%和10%[8,9]，约30%的Ⅰ～Ⅲ期CRC患者最终死于术后复发及转移[10]。一旦出现复发及转移，其5年生存率﹤5%，平均生存期仅为7个月[11]。复发是造成生存期缩短的主要原因之一，本研究发现，行根治术后CRC患者5年复发率为12.5%；Willam等[12]研究显示，行根治术后CEA升高的CRC患者，随访2年7个月复发率为59.6%。也有资料显示，CRC根治术后5年复发率超过90%[13]。导致差异存在的原因，可能是入组人群不同、术后生活方式和随访时间不同造成的。

肿瘤微环境中的炎性细胞释放的化学因子(即炎症介质)等，能够激活局部免疫网络，促进肿瘤细胞增殖、逃逸和血管生成，从而实现促进恶性细胞的发生和成长[14～16]。炎症介质与血管生成因子协同增强肿瘤细胞的侵袭能力，促使肿瘤细胞运动和迁移，并最终导致复发及转移的发生。在机体受到感染的情况下，肿瘤血管生成，VEGF和炎症介质CCL2、CXCL8等使得白细胞在肿瘤位置聚集，反过来又生成VEGF和炎症介质，通过自分泌和旁分泌，最终加强了肿瘤生成信号途径[17]。炎症介质和细胞因子都广泛地存在于肿瘤微环境中，研究显示白细胞介素1b(IL-1b)、肿瘤坏死因子α和IL-6炎症介质体外可直接促进CRC肿瘤进展[18]。血清中炎症介质可以反映肿瘤部位感染反应的发展，故可成为监测CRC患者有无浸润的标志物[19]。但是，目前少有研究这些炎症介质在CRC患者根治术后复发和转移中的作用[20]。PTX-3是一种免疫调节子，类似于抗体的功能祖先，为人体所必需。其与C反应蛋白同属于穿透素家族，作为炎症介质在组织重建、血管生成和急性炎症、免疫应答等维持机体稳态方面起重要作用，并涉及肿瘤相关的感染。有研究发现，动物和人肿瘤内血管上的内皮细胞高水平表达PTX-3[21]。在患脂肪肉瘤[22]、神经胶质瘤[23]、肺癌[24]、前列腺癌[25]时，血清PTX-3的水平明显升高。另有研究显示，PTX-3包含在脂肪酶/Toll样受体信号途径中，而这一途径可诱导CXCL-8的表达，而CXCL8升高与CRC患者根治术后复发有关[26]。以上研究提示，PTX-3可能是CRC复发的独立变量，与其他变量没有相关性。

本研究根据REMARK指南来评估肿瘤预后标志物[27]，选择术前血清PTX-3水平作为评价指标，主要考虑到以下几点：首先，用术前的血清水平来研究，以避免手术方式变化带来的影响；其次，选择术后未复发者为对照组，而不是健康人群，可更多地避免除根治手术本身外其他因素对PTX-3的影响；最后，生物标志物的选择也依赖于预后情况对标志物影响的程度[28]。同时，患者数量和个体差异的限制可能会导致研究结果产生偏倚，还需要增大样本量以达到一致性[29]。本研究发现，术前血清PTX-3与CRC复发有关，复发患者术前血清PTX-3水平较高，且其复发的风险是低水平的1.3倍，提示PTX-3是较好的预后因子，可根据其术前血清水平的高低，对患者进行分级管理。