聚乙二醇沉淀联合化学发光法检测高泌乳素血症的临床意义

王利健 陈俊 傅真

高泌乳素血症（HP）是指由内外环境因素引起的人体血清泌乳素升高，女性表现为闭经、溢乳或不孕[1]。巨泌乳素是泌乳素和泌乳素抗体结合形成的复杂免疫复合物，分子量较大，不能通过人体的血管壁，所以无法与细胞进行结合，因此无生物学作用，但是巨泌乳素在人体内大量堆积时会导致泌乳素产生假性增高，导致误诊、误治[2-4]。从泌乳素蛋白质的特性可知，巨泌乳素血症（MP）是HP的特殊存在形式。由于聚乙二醇（PEG）可以选择性地沉淀大分子量的泌乳素，从而有效区别泌乳素活性，因此笔者采用PEG沉淀联合化学发光法检测HP，以提高临床对HP的诊断。

1 对象和方法

1.1 对象 选择2016年2至7月义乌市中心医院因不孕、有溢乳、月经不调等症状就诊且血清泌乳素浓度＞29.93ng/ml患者共158例，均为女性，年龄 20～45（30.07±9.23）岁。根据文献报道[1]，PEG沉淀后泌乳素测定回收率=（PEG沉淀后泌乳素×2/PEG沉淀前泌乳素）×100%，按PEG沉淀后泌乳素测定回收率进行分组，其中巨泌乳素组59例（回收率＜40%），标本中含有的泌乳素主要为巨泌乳素，判定为巨泌乳素血症；混合泌乳素组20例（回收率在40%～60%），标本中所含泌乳素既有泌乳素单体，又有巨泌乳素的存在；单体泌乳素组79例（回收率＞60%），标本中主要含有小分子泌乳素，判定为真性高泌乳素血症。

1.2 仪器与试剂 美国雅培i2000化学发光仪，试剂盒由雅培公司提供，其中泌乳素的批号为62039U100。

1.3 方法

1.3.1 检测方法 采用化学发光法，女性泌乳素参考范围为1.20～29.93ng/ml。严格按照仪器全自动SOP程序操作，泌乳素高、中、低水平质控均处于在控范围，仪器运行良好。

1.3.2 25%PEG准备 25%PEG（分子量为6 000）水溶液，用作巨泌乳素的沉淀剂。平时分装贮存于2~8℃冰箱，有效期3个月。用前置室温，达到室温后使用。

1.3.3 操作步骤 所有患者均于清晨空腹抽取静脉血5ml，分离血清并进行检测。在雅培i2000仪器上检测泌乳素，经筛检为HP的标本再行PEG沉淀处理：500μl血清加等量 500μl的25%PEG溶液，充分混匀后室温放置30min，以3 500r/min离心5min，然后取上清液于雅培i2000分析仪上测泌乳素浓度。

1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0统计软件，正态分布的计量资料以表示，3组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 年龄因素对组别的影响 巨泌乳素组平均年龄为（32.86±7.53）岁，混合泌乳素组为（29.15±8.08）岁，单体泌乳素组为（29.18±10.42）岁，3组间比较差异有统计学意义（F=3.120，P=0.047）；巨泌乳素组和混合泌乳素组的年龄比较差异无统计学意义（P=0.267），巨泌乳素组和单体泌乳素组的年龄比较差异有统计学意义（P=0.046），混合泌乳素组和单体泌乳素组的年龄比较差异无统计学意义（P=0.948）。

2.2 3组患者血清PEG沉淀前后泌乳素水平的比较3组间沉淀前泌乳素水平差异无统计学意义（F=1.706，P=0.185），沉淀后，3组间差异有统计学意义（F=9.523，P=0.000）。进一步比较发现，沉淀前3组间两两比较泌乳素水平均无统计学差异（均P＞0.05）；沉淀后混合泌乳素组和巨泌乳素组、单体泌乳素组比较差异均无统计学意义（P=0.792、0.068），但巨泌乳素组和单体泌乳素组比较差异有统计学意义（P=0.000），见表1。

表1 3组患者血清PEG沉淀前后泌乳素水平的比较（ng/ml）

2.3 巨泌乳素的分布特点 以2倍泌乳素高限（59.86ng/ml）为界，分析158例患者巨泌乳素的分布特点发现，＞2倍泌乳素高限者47例，其中巨泌乳素21例，占44.68%。＜2倍泌乳素高限者111例，其中巨泌乳素38例，占34.23%。若按回收率＜40%为限，＞2倍泌乳素高限21例为巨泌乳素，临床诊断符合率达100%；＜2倍泌乳素高限38例为巨泌乳素，临床诊断明确巨泌乳素26例，符合率达68.42%以上，总体符合率达79.66%。

3 讨论

泌乳素在人血清中有3种存在形式：（1）有生物和免疫活性泌乳素单体，分子量为23kD；（2）缺乏生物活性泌乳素二倍体，分子量约50～60kD；（3）无或不发挥任何生物活性，亦即巨泌乳素，分子量150～170kD。巨泌乳素是在血管内形成的，主要是与血液中IgG形成大分子复合物。在体内无活性，这是由于复合物的分子量大，无法通过毛细管内皮与靶受体起作用。再加上它在体内的半衰期较长，易于在血管内中累积，并且被体外免疫分析系统视作泌乳素检出，从而造成泌乳素浓度的假性增高[5]。本实验结果表明，158例HP患者血清中，巨泌乳素59例（37.34%），混合泌乳素 20例（12.66%），单体泌乳素79例（50.00%），这更进一步证实了巨泌乳素是造成HP的基础原因。

目前鉴别巨泌乳素引起的HP的主要方法有：凝胶色谱法、PEG法、蛋白A琼脂糖凝胶吸附法、羊抗人IgG琼脂糖吸附法等。其中凝胶色谱法是检测巨泌乳素的金标准，但因其重复性差，操作复杂，价格昂贵，从而不适合临床大范围开展。其中，以PEG法操作简单、价格低廉、无需昂贵的辅助仪器、可作为临床常规筛查方法在医院内推广使用。

泌乳素的正确检测关系到临床正确诊断、合理用药及预后的评价。近几年来，泌乳素免疫检测技术及颅脑CT和MRI诊断技术的进步，对HP的诊断水平有了大幅度的提高了。如今，如何排除巨泌乳素的干扰，提高泌乳素检测的准确性已成为临床和检验今后关注的一个要点。MP血液中泌乳素分子以分子量150～170kD的巨泌乳素为主，PEG可以选择性地沉淀大分子量的泌乳素，从而可以有效区别巨泌乳素、单体泌乳素和混合泌乳素。目前，临床和检验仍过分信赖泌乳素商品化试剂而未开展巨泌乳素的筛查，致使巨泌乳素引起的HP误诊时有发生。总之，对于泌乳素增高的标本应用PEG沉淀法筛查巨泌乳素，这样可提高诊断水平和检验质量，对于避免误诊和误治，并对由此引起的医疗纠纷有一定意义。本项研究中，巨泌乳素组和单体泌乳素组的年龄有统计学差异（P＜0.05），患巨泌乳素女性平均年龄偏大。＞2倍泌乳素高限者47例，其中巨泌乳素21例，占44.68%。＜2倍泌乳素高限者111例，其中巨泌乳素38例，占34.23%。若按回收率＜40%为限，＞2倍泌乳素高限21例为巨泌乳素，临床诊断符合率达100%；＜2倍泌乳素高限38例为巨泌乳素，临床诊断明确巨泌乳素26例，符合率达68.42%以上，总体符合率达79.66%。对＜2倍泌乳素高限为巨泌乳素的病例，如果和临床诊断不符合，建议用凝胶色谱金标准方法进一步验证。

总之，采用25%PEG沉淀分离法检测泌乳素升高，对可疑患者进行必要的排查，对指导临床很有必要，特别对有些患者查出有高泌乳素血症，但临床用药效果不佳，而又经过颅脑CT及MRI查体无明显异常的人群。