土生鳞伞菌丝体多糖对小鼠免疫调节及抗氧化功能的初步探究

陈佳　李作美

【摘 要】磷傘菌是世界分布广泛的一种药食两用菌菇，本文以我国特有土生磷伞菌为样本，通过建立免疫低下动物模型，研究土生鳞伞菌丝体多糖对小鼠免疫调节及抗氧化功能，为该鳞伞菌丝体多糖功能性产品开发提供一定的理论依据。

【关键词】鳞伞菌；多糖；免疫；抗氧化

中图分类号： TQ920.6 文献标识码： A 文章编号： 2095-2457（2018）17-0080-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.17.039

【Abstract】Phomatochoria is a kind of mushroom distributed in the world widely. In this study， immunocompromised animal model was established， to research the effect of polysaccharide from Pholiota dinghuensis Bi on immunologic and anti-oxidation function in rats. The results could provide a theoretical basis for development of functional product.

【Key words】Pholiota dinghuensis Bi；Polysaccharide；Immunologic；Anti-oxidation function

真菌是一种含有丰富的营养成分以及独特药效物质，既能滋补养生，又能防病益寿的日常保健食品。食用菌含有大量的多糖并且种类繁多，在对其功能研究时发现，食用菌多糖具有提高免疫功能、预防心血管疾病、抗衰老、抗氧化、预防肿瘤等多种生理活性，如灵芝、香菇等。磷伞菌为常见菌菇类，本文以我国特有土生磷伞菌为样本，提取纯化磷伞菌丝体多糖，通过动物模型实验，研究土生鳞伞菌丝体多糖对小鼠免疫调节及抗氧化功能，为该菌未来功能性产品开发提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

土生鳞伞菌丝体多糖样品，本实验室通过DEAE分离后，使用SephadexG-100凝胶柱纯化鉴定，经HPLC检测，纯度大于98.9%。MDA、SOD、NO测定试剂盒，IL-2、TNF-αElisa测定试剂盒均购于R & D公司，其中各试剂盒内微孔板内表面已包被大鼠抗特异性单克隆抗体各指标均按试剂盒说明进行规范操作。

1.2 动物饲养及模型的建立

125只Balb/c小鼠，体重100-105克，购自省动物实验中心。按体重相似随机分为5组，空白对照组、模型对照组、低剂量组、中剂量和高剂量组。以宠物小鼠饲料预饲3天，并观察动物生长状况。建立模型：除空白对照组外，其余4组小鼠腹腔注射环磷酰胺（80mg/kg·d）3天，建立免疫抑制模型。建模后，低、中、高剂量组分别以20mg/kg·d、40mg/kg·d、80mg/kg·d 三种浓度的土生鳞伞菌丝体多糖灌胃7天，空白对照组、模型对照组以等体积无菌生理盐水灌胃7天。

1.3 采样

饲养期结束后，采用击昏后断头采血，血液离心后，血清于-20℃保存待测内脏称重。器官指数=脏器重量（g）/体重（g）×100

1.4 指标测定

血清NO 和总NOS 活性测定： 酶法；SOD 总活力测定：黄嘌呤氧化酶法；MDA 含量测定：TBA 法；IL-2、TNF-α采用酶联免疫ELISA法测定。

1.5 数据统计

所有结果采用SAS9.0software进行统计并进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 土生鳞伞菌丝体多糖对小鼠肝脏、脾脏指数的影响

从表1结果看出，模型对照组较空白组、剂量组的肝脏、脾脏指数明显下降，说明环磷酰胺致小鼠免疫低下，免疫抑制模型构建有效。与模型对照组相比，土生鳞伞菌丝体多糖的三个剂量组均能显著提高肝脏、脾脏指数（P<0.05）。

2.2 土生鳞伞菌丝体多糖对小鼠血清NO 和总NOS 活性

表2结果表明，小鼠血清中总NOS活性，土生鳞伞菌丝体多糖剂量组显著高于模型对照组（P<0.05），而剂量组小鼠血清NO含量显著低于模型对照组（P<0.05），说明土生鳞伞菌丝体多糖具有增强机体抗氧化功能，提高NOS活性，抑制NO产生。

2.3 土生鳞伞菌丝体多糖对小鼠IL-2、TNF-α的影响

从表3结果可以看出，较模型对照组，土生鳞伞菌丝体多糖剂量组小鼠血清IL-2和TNF-α水平显著高于模型对照组（P<0.05），并且高剂量组小鼠血清IL-2和TNF-α水平显著高于空白对照组。说明土生鳞伞菌丝体多糖具有调节免疫功能的作用，能够改善和缓解机体免疫低下状态。

2.4 土生鳞伞菌丝体多糖对小鼠SOD、MDA水平的影响

表4结果表明，随着土生鳞伞菌丝体多糖剂量的增加，小鼠血清SOD酶活性升高（P<0.05），机体MDA水平下降。说明土生鳞伞菌丝体多糖可以刺激体内SOD酶活，抑制脂质过氧化的发生，在一定程度上提升了机体的抗氧化能力。

3 讨论

NO作为自由基及传递介质在传递调节信息、参与炎症和组织细胞的损伤和增殖、胃肠运动的调节和粘膜保护等，当机体内NO生成失衡时，则会诱发疾病[1]。机体产生的自由基能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化反应，并因此形成脂质过氧化物，是自由基毒性的具体表现。MDA是不饱和脂肪酸过氧化作用的最终产物，其机体内水平高低反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度及细胞受损程度，而血清中SOD活力的高低则反映机体清除氧自由基的能力。本研究结果表明，小鼠在灌服土生鳞伞菌丝体多糖制剂后，血清中NO、MDA水平下降，SOD、NOS活性增高，并且具有剂量依赖性。说明土生鳞伞菌丝体多糖能够增强机体抗氧化能力，抑制脂质氧化。IL-2是免疫反应和炎性反应中重要的调节剂，可通过激活JAK/STAT信号通路，刺激细胞增殖，其在发挥自分泌作用的同时，还增强CTL的细胞毒活性，增强细胞间的接触和诱导细胞分泌细胞因子，诱导NK细胞增殖，增强NK细胞的活性，诱导LAK细胞和TIL，活化B细胞，促进免疫球蛋白分泌[2]。TNF-α由巨噬细胞分泌的一种小分子蛋白，主要由单核-巨噬细胞分泌；TNF-β主要由活化的T淋巴细胞分泌，两者有相似致热性[3]，在肿瘤的形成、免疫反应和应激反应方面都具有重要的作用[4]，而IL-2可诱导产生促炎因子TNF-а。本研究结果表明，小鼠服用土生鳞伞菌丝体多糖后，免疫器官重量增加，并且IL-2和TNF-α水平升高，说明土生鳞伞菌丝体多糖具有调节免疫的作用，在一定程度上可促进机体免疫功能。

4 结论

本实验结果表明土生鳞伞菌丝体多糖能够增强小鼠机体抗氧化能力，在一定程度上调节机体免疫水平，促进免疫功能。

【参考文献】

[1]SyderSH. Nitric oxide：First in a new class neurotransniters[J] Science.1992，257（5）：494.

[2]Smith K A. Interleukin-2：inception， impact， and implications [J]. Science， 1988， 240（4856）：1169-1176.

[3]Brambilla F， Monti D， Francesch C. Plasma concentrations of interleukin-1-beta， interleukin-6 and tumor necrosis factor-alpha， and of their soluble receptors and receptor antagonist in anorexia nervosa [J]. Psychiatry Research， 2001， 103：107-114.

[4]Balkwill F. Tumour necrosis factor and cancer[J].Nature Reviews Cancer， 2009， 9： 361-371.