关于血细胞计数板的解读

宋正海

(江苏省盱眙中学 淮安 211700)

血细胞计数板又称血球计数器，是高中生物学实验中重要的细胞计数工具。本文对血细胞计数板的结构、计数原理等问题进行详细的解读。

1 解读血细胞计数板的相关信息

1.1 目视信息及分析 血细胞计数板是一块特制的厚型载玻片，有4个凹槽[1]，中间部分被一“H”型凹槽分成上、下两个相同的计数平台，每个平台中有长、宽各3mm的计数区域，平均分为9个大方格。计数室(指中央的一个大方格，下同)的长和宽各是1mm，计数板上标识的“0.1mm”是指计数室的高度(图1)。所以，计数室体积为1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3=10-4mL。

血细胞计数板有两种规格，一种是25×16型(汤麦式，标识为XB-K-25)，另一种是16×25(希利格式)。汤麦式血细胞计数板的每个计数室有25个中方格，每个中方格又分为16个小方格；而希利格式血细胞计数板每个计数室中有16个中方格，每个中方格又分25个小方格。

所以，上述两种规格的血细胞计数板的计数室都有400个小方格，即体积为0.1mm3的计数室被平分为400个小格。

图1 血细胞计数板的结构示意图

1.2 显微观察信息及分析 在显微镜下，可以观察到计数室及其周围被许多线条规则地分隔成许多小室(图2)。计数板上的线条分为单线和双线两种，双线区分不同中方格，每一中方格四周的线都是双线，计数室与周围区域的区分线也是双线；单线用于区分小方格[2]。计数室内的单线和双线向外延伸，因此计数室外的线也可分为单线和双线两种。计数室周围的线并非只是起引导作用，与计数室四个顶点相邻的四个大方格，其内只有中方格而无小方格，这四个区域可用于体积较大的单细胞计数(如白细胞等)。

图2 计数室示意图

2 细胞计数原理

由于计数室内有400个小方格，如果对所有小方格进行细胞计数，因视野所限，不易操作，容易造成较大误差，所以一般采用定点取样计数。不同规格的血细胞计数板取样点不同，汤麦式血细胞计数板计数室中有25个中方格，则取计数室4个角和中央的共5个中方格进行观察计数；而希利格式血细胞计数板的计数室中有16个中方格，则取计数室4个角的中方格进行观察计数。对于压在方格界限上的细胞应当计数相邻两边及其夹角上的细胞数，再加上中方格内的细胞数，作为该中方格的细胞总数。如果一个方格内细胞数过多，难以数清，应当再对样液进行适当稀释，一般以每个小方格内分布4～5个细胞为宜。如果统计的每个中方格内的细胞数目相互之间相差20个以上，表示细胞分布不均，必须对样液摇匀后重新计数。

3 计算细胞密度的方法

对5(或4)个中方格计数完毕后，可通过下列两种方法计算样液中细胞密度： ①细胞个数/mL=5(或4)个中方格中细胞总数÷5(或4)×25(或16)×稀释倍数×104；②细胞个数/mL=(80个小格中细胞数)÷80×400×稀释倍数×104。其中“×104”表示将0.1mm3(计数室体积)转换成1mL溶液中细胞密度。

4 细胞计数注意事项及思考

如果计数室中细胞充分分散(图3a)，则逐个计数；如果出现细胞成簇分布，能够清晰分辨细胞核和细胞质的分别计数为单个细胞(图3b)；如果不能清晰分辨细胞核，则计为1个细胞(图3c)。如果在实验中多处出现图3c的现象，最可能的原因为样液未充分摇匀或稀释倍数不够所致，需重新实验；如果只是一处或几处出现此现象，可按以上计数方法进行计数。

图3 细胞分散情况

在细胞计数中，为较快而准确的计数，一般选择“S”型计数路径进行计数： 第一排，从左向右；第二排，从右向左；第三排，从左向右；第四排，从右向左(图4)[3]。在2018年江苏省生物学科学业水平测试卷中，第40题第(2)小题即考查了对一个视野中酵母细胞最佳计数路径的选择。虽然此问题在教材中并未直接涉及，但却是学生实验操作中不可回避的问题，该试题通过对学生科学思维的考查，充分体现了生物学学科核心素养的要求，也再次提醒教学中要用教材教，而非教教材。

图4 细胞计数路径示意图