男性不育症患者解脲脲原体感染情况与精液检查结果分析

柴蓓蓓 何培 王惠莹 刘浏 张若鹏

[摘要] 目的 探讨解脲脲原体感染与男性不育症的关系以及其对不育症患者精液检查结果的影响。 方法 对2017年5～10月于大理大学第一附属医院就诊的362例男性不育症患者和同期于我院进行健康体检的100例已生育男性精液的解脲脲原体感染情况、精液常规情况、血清抗精子抗体情况以及精子DNA碎片化指數进行检测和分析。 结果 不育组解脲脲原体阳性率为39.0%，显著高于对照组（P<0.05）；对照组解脲脲原体阴性者的精液常规检查结果明显优于不育组解脲脲原体阳性者（P<0.05）；不育组UU阳性者血清抗精子抗体检出率（38.3%）和DNA碎片化指数（14.9%）显著高于对照组UU阴性者（P<0.05）。 结论 解脲脲原体感染可通过降低男性精液质量、诱导抗精子抗体产生和损伤精子DNA完整性而影响男性的生育功能。

[关键词] 不育症；解脲脲原体；抗精子抗体；精子DNA碎片化指数

[中图分类号] R256.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）18-0023-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between ureaplasma urealyticum infection and male infertility and its effect on semen test results of infertility patients. Methods The ureaplasma urealyticum infection， semen routine condition， serum anti-sperm antibody， and sperm DNA fragmentation index were detected and analyzed in the semen from a total of 362 male infertility patients who were diagnosed in the First Affiliated Hospital of Dali University from May to October 2017 and 100 males who had children and had undergone physical examination in our hospital during the same period. Results The positive rate of ureaplasma urealyticum in the infertility group was 39.0%， which was significantly higher than that in the control group（P<0.05）. The results of routine examination of semen in the patients with negative ureaplasma urealyticum in the control group were significantly better than those with positive ureaplasma urealyticum in the infertility group（P<0.05）. The detection rate of serum anti-sperm antibody（38.3%） and DNA fragmentation index （14.9%） were significantly higher in the patients with positive UU in the infertility group than in the negative UU in the control group（P<0.05）. Conclusion Ureaplasma urealyticum infection affects male reproductive function by reducing the quality of semen， inducing anti-sperm antibody production and impairing sperm DNA integrity.

[Key words] Infertility； Ureaplasma urealyticum； Anti-sperm antibody； Sperm DNA fragmentation index

随着生活节奏的加快和生活压力的增大，越来越多的人身体处于亚健康状态，机体免疫力降低，使条件性致病微生物得以大量繁殖，继而引发疾病。解脲脲原体（ureaplasma urealyticum，UU）是目前发现的最小的、最简单的、具有自我繁殖能力的泌尿生殖系定植微生物，有研究表明[1-2]，其已超过衣原体成为非淋菌性尿道炎的最主要致病病原体。而非淋菌性尿道炎与男性精液质量和男性不育有着紧密的联系，故我们对不育症患者的解脲脲原体感染情况和精液检查结果进行分析，以期为不育症的诊断和治疗提供帮助。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2017年5～10月于大理大学第一附属医院生殖医学科的362例男性不育症患者和同期于我院进行健康体检的100名已生育的男性。（1）纳入标准：①不育组：年龄在22～45岁之间的男性；排除女方不孕的因素，夫妇未采取避孕措施，正常性生活1年及以上未能使女方怀孕者。②对照组：年龄在23～50岁之间，于我院体检，已婚已育的健康男性。（2）排除标准：①存在生殖系统发育异常、梗阻性无精症、性功能障碍等不能常规取精者。②近一个月有感染症状或接受过抗生素治疗者。③泌尿生殖系存在支原体、沙眼衣原体、淋病奈瑟菌等感染者。（3）一般资料比较：不育组男性平均年龄（33.2±6.4）岁，平均体重指数（22.8±1.4）kg/m2；对照组男性平均年龄（34.0±7.6）岁，平均体重指数（23.1±1.7）kg/m2。两组间年龄和体重指数比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 标本的采集与处理

（1）血标本：用无抗凝剂采血管抽取血标本，并于30 min内待其凝固后，3500 r/min离心5 min分离血清备用。（2）精液标本：受试者禁欲72 h以上，于我科门诊取精室通过手淫法用无菌取精杯完整收集精液标记姓名并立即送检，镜檢前精液存放于37℃保温。

1.3 标本的检测

（1）精液标本的常规检测：使用伟力WLJY-9000彩色精子质量检测系统，按WHO标准对精液标本进行精子密度、精子活力、精子畸形率的检测，并人工记录精液的液化时间。同时将伊红Y染液和精液各一滴滴于载玻片上并混匀，盖上盖玻片，在30 s后于高倍镜下计数精子着色情况并计算精子存活率。（2）解脲脲原体的检测：采用郑州安图绿科生物工程有限公司的解脲脲原体液体培养基和质控菌株（UU ATCC27813）进行解脲脲原体的检测。严格按照说明操作，将液化后的无菌精液接种在液体培养基上，于37℃条件下培养48 h，培养基内液体颜色由黄变为红色或橙红色，则表明该标本解脲脲原体阳性，仍为黄色则提示该标本解脲脲原体阴性。（3）精子DNA碎片化指数（DNA fragmentation index，DFI）的检测：待新鲜精液液化，用0.1 mol/L 的PBS洗涤3遍后离心，沉淀再次悬浊后，重新调整精子浓度至5×107/mL，制片自然干燥。将精子涂片浸入固定液固定2 h（甲醇和冰醋酸按3∶1比例配制），再用新鲜配制的吖啶橙工作液染色5 min，并用流水清洗，蒸馏水封片。最后用荧光显微镜观察计数（日本Olympus BX51，×400），每视野观察时间小于40 s，共计数300条精子中红色和黄色精子的总百分比值。（4）血清抗精子抗体的检测：采用福建省三明博峰生物科技有限公司生产的抗精子抗体（anti-sperm antibody，AsAb）试剂盒，按说明书操作要求进行血清中抗精子抗体的胶体金法检测。质控线和检测线均呈阳性则表明被检样本血清中抗精子抗体阳性；仅质控线阳性说明检测结果有效，被检样本血清中抗精子抗体阴性。

1.4 统计学分析

采用SPSS19.0软件对实验结果进行统计学分析，服从正态分布的数据，计量资料以（x±s）表示，行方差分析，计数资料以[n（%）]表示，行χ2检验；不服从正态分布数据以中位数（P25～P75）表示，组间比较采用独立样本秩和检验（Mann-Whitney U），P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组解脲脲原体检出情况比较

不育组解脲脲原体阳性率为39.0%，显著高于对照组的5.0%，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 不育组UU阳性者和对照组精液检查结果比较

不育组UU阳性者在精子密度，精子存活率，精子活力方面均明显低于对照组UU阴性者（P<0.05）；在精子畸形率和精液液化时间方面显著高于对照组UU阴性者（P<0.05）。对照组UU阳性者精子活力低于对照组UU阴性者，但高于不育组UU阳性者，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 不育组UU阳性者和对照组血清抗精子抗体检查结果比较

不育组UU阳性者血清抗精子抗体检出率为38.3%，显著高于对照组UU阴性者的3.2%和对照组UU阳性者的0，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

2.4 不育组UU阳性者和对照组精子DNA碎片化指数结果比较

不育组和对照组精子DNA碎片化指数[DFI（%）]检查结果不服从正态分布，故以中位数形式表示[M（P25～P75）]，不育组UU阳性者DFI（%）： 14.9（5.7～24.3）；对照组UU阳性者DFI（%）：10.2（4.8～17.4）；对照组UU阴性者DFI（%）：5.2（2.3～8.5）。与对照组UU阴性者相比，对照组UU阳性和不育组UU阳性精子DNA碎片化指数显著增高（P<0.05）。

3 讨论

3.1 解脲脲原体与男性精液质量

解脲脲原体可分为T960生物群和parvo生物群两个大群，近年来的研究结果提示[3-4]，T960生物群与男性泌尿生殖系感染的相关性更为密切，而parvo生物群更可能是定植菌群。本研究结果表明不育组男性解脲脲原体感染率为39.0%，与近年的研究数据相持平[5]，解脲脲原体感染多隐匿，极少出现临床症状，故患者多未察觉或未行治疗。解脲脲原体是一类无细胞膜的原核生物[6]，其原生质膜可先与精子细胞膜融合继而使其整体融入精子细胞，但解脲脲原体的原生质膜中含有脂类和蛋白类毒性物质，其可导致精子细胞膜的损伤继而降低精子存活率和精子密度。同时解脲脲原体本身又常附着在精子的头部和尾部[7-9]，导致精子颈部或尾部畸形影响精子活力，其还会损伤精子顶体、释放磷脂酶A、磷脂酶C、神经氨酸酶样物质等多种生物酶、造成生殖道中激肽释放减少，减弱精子活力，影响精子运动，造成精子畸形，影响精液液化。

3.2 解脲脲原体与抗精子抗体

人类精子抗原可分为精子固有性抗原和精子附着性抗原两大类[10-11]，诱导抗精子抗体的产生、引起不孕不育的主要是精子附着性抗原，其是由精浆内的某些蛋白附着于精子膜上形成的。正常情况下，男性生殖道存在血-生精小管免疫隔离系统，可以防止抗精子自身免疫反应的发生。当发生解脲脲原体感染时[12-13]，炎性反应可导致血-生精小管屏障的破坏，病原体继而入侵损害生精细胞和曲细精管基膜，从而使精子抗原外溢导致抗精子抗体的产生。同时解脲脲原体感染还可以使泌尿生殖系的T淋巴细胞数目增加、巨噬细胞吞噬功能增强[14]，进一步刺激了机体对附着解脲脲原体精子的免疫反应，从而诱导更多抗精子抗体的产生，导致免疫性不育。但本次研究中对照组解脲脲原体感染者并未检出抗精子抗体，可见解脲脲原体感染并不是导致抗精子抗体产生的唯一原因，应该还存在其他免疫性因素可诱导抗精子抗体的产生[15]。

3.3 解脲脲原体与精子DNA完整性

精子DNA完整性对生育有着非常重要的意义[16]，其影响着从受精到最终胚胎着床发育这一系列环节，在临床上精子DNA损伤（精子DNA不完整）会导致不孕不育、流产、胎儿异常等不良临床结局。目前公认的会导致精子DNA损伤的因素包括[17]精子染色质的组装异常、鱼精蛋白的缺乏、活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）的增多和精子的異常凋亡等，同时炎症、高温和某些药物亦会导致精子DNA的损伤。Zhang Q等[18]的研究表明，解脲脲原体感染者的精液中ROS水平、丙二醛水平、DNA断裂指数均显著增高而超氧化物歧化酶水平却有所降低。这些改变可以直接作用于精子膜和精子细胞或通过凋亡导致精子DNA损伤和碎片化，同时ROS还会影响精子染色质的组装、改变精子中蛋白的表达、导致精子膜表面离子通道的改变。Ma XP等的研究还发现[19]解脲脲原体感染者精液的Western Blot结果提示其附睾精子蛋白P34H表达水平同精液中透明质酸酶的水平呈正相关，但同精子DNA碎片化率呈负相关。附睾精子蛋白P34H作为介导精子-卵透明带结合所必需的精子表面蛋白，亦是附睾精子成熟的标志物，可见解脲脲原体还可作用于精原细胞阻碍精子成熟从而损伤精子DNA。

综上所述，男性泌尿生殖系解脲脲原体感染同不育症有着密切的联系，可通过降低男性精液质量、诱导抗精子抗体产生和损伤精子DNA完整性来影响男性的生育功能。但本次研究并未对解脲脲原体（T960群和parvo群）和抗精子抗体（IgA、IgM、IgG）进行分型，今后对其进行分型研究[20-21]可能有助于解脲脲原体导致的男性不育的防治和进一步完善抗精子抗体产生机制的理论。

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（收稿日期：2018-02-09）