当归-川芎对原发性痛经小鼠E2及OT表达的影响研究

蔡卉

电子科技大学医院中医科，四川成都 610000

原发性痛经是一种常见的妇科疾病，给妇女带来很大痛苦，严重影响了妇女的日常生活质量[1]。目前已知中医药能够对原发性痛经进行治疗，其中当归-川芎是一种已经在临床上广泛应用的方剂，当归为伞形科多年生草本植物当归的根，性甘、辛、温，归肝、心、脾经。功效为补血，活血，调经，止痛，润肠[2]；川芎为伞形科多年生草本植物川芎的根茎，性辛、温，归肝、胆、心包经。功效为活血行气，祛风止痛[3]，两种药物配伍组成妇科方剂，或与其他药物搭配形成其他妇科良方，配合应用以达到养血调经、促进子宫微循环和散瘀止痛的效果[4]，能够消除炎症，可以抑制子宫平滑肌收缩，但不同的配伍比例和用法产生的功效有很大差异。应用当归-川芎对小鼠进行治疗，对原发性痛经小鼠疼痛的扭体次数有缓解作用[5]，其作用机制与PGF2的生成和p的含量相关，而E2和OT都是重要的内分泌因子，当前对当归-川芎的用量和搭配尚不明确，该研究将进一步探究如何应用当归-川芎对原发性痛经进行治疗。该研究于2018年1—3月期间应用雌二醇联合缩宫素诱发原发性痛经小鼠模型，探究当归-川芎对原发性痛经小鼠E2、及OT表达的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

酶联免疫试剂盒选用的是由瑞士Enzolife Sciences公司生产（120901108A），E2、OT 选用的是武汉伊瑞莱特生物科技有限公司生产）E-EL-0065c、EEL-E0029C），OTR兔抗鼠克隆抗体由美国Aabcam公司生产的货号为ab181077。实验动物选择昆明种雌性未孕小鼠60只，平均质量（20±4）g，将动物室温度保持在室温 （23±3）℃，保环的相对湿度在45%～60%之间，小鼠在光照和黑暗轮流交替，给小鼠提供粮食和水。研究时将所有小鼠都随机分为6组，每组10只，6组分别是当归川芎1∶1组、当归川芎3∶2组、当归川芎2∶1组、当归川芎3∶1组，正常对照组和模型组。造模时采用的离心机是由美国Labnet公司提供（C2500-R-230），电热恒温培养箱是由日本ASONE公司提供（ICV-450型），由美国ABI stepone plus公司提供的RT-PCR仪。

1.2 方法

1.2.1 建立小鼠原发性痛经模型 根据王欢[6]研究的建模方法为依据，复制痛经模型是通过雌激素和缩宫素联合形成的，具体操作为：给予小鼠 0.01 mg/（g·d）苯甲酸雌二醇，连续给药8 d，使小鼠子宫同化，于第8天，给予小鼠0.01 mL/g缩宫素。

1.2.2 给药方法 当归川芎组于第1天开始给药，分别按照 3.03、2.28、2.02、2.58 g/（kg·d）灌胃对应药物，共计12 d，正常组及模型组小鼠给予其等量的生理盐水。给药完成后处死小鼠，取出小鼠的子宫，用锡纸包裹子宫然后放置在-80℃的冰箱中。测定小鼠的E2和OT水平是用ELSA的方法进行，测定小鼠子宫组织的含量，通过RT-PCR法测定子宫组织OTRmRNA表达水平，通过Westenm-bloting法测定子宫组织OTR蛋白的表达。

1.3 观察指标

分别统计6组小鼠E2和OT水平，以及6组小鼠子宫组织的OTRmRNA和OTR蛋白表达水平。

1.4 统计方法

此次研究采用SPSS 20.5统计学软件对，研究中出现的数据资料进行统计和分析，其中计量资料用（±s）表示，进行 t检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组小鼠子宫组织E2和OT含量对比

经过统计，模型组中小鼠的E2和OT水平比对照组小鼠明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；经过治疗后，各给药组小鼠子宫组织内的E2和OT水平和模型组的小鼠相比都明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），因此可以证实当归-川芎对原发性痛经小鼠子宫组织中E2和OT含量有抑制作用。见表1。

表1 各组小鼠子宫组织E2和OT含量对比[（±s），pg/mL]

表1 各组小鼠子宫组织E2和OT含量对比[（±s），pg/mL]

组别E2 OT当归-川芎 1∶1 组（n=10）当归-川芎 3∶2 组（n=10）当归-川芎 2∶1 组（n=10）当归-川芎 3∶1 组（n=10）模型组（n=10）正常对照组（n=10）26.49±2.18 28.05±4.81 27.03±3.11 28.04±4.83 32.08±3.56 23.08±3.47 80.46±9.13 82.59±7.82 81.76±5.33 82.06±9.16 93.92±8.61 71.88±12.84

2.2 当归-川芎对原发性痛经小鼠子宫组织OTR蛋白和OTRmRNA水平的影响

小鼠经过治疗后，模型组小鼠子宫组织中OTR蛋白和OTRmRNA水平比正常组小鼠明显上升，数据差异有统计学意义（P＜0.05）。各给药组小鼠子宫组织内OTR蛋白和OTRmRNA水平和模型组相比较都明显降低，而OTR蛋白水平和模型组相比明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），因此可以证实当归-川芎不同配比能够抑制OTR的表达。见表2。

表2 当归-川芎对原发性痛经小鼠子宫组织OTR蛋白和OTRmRNA 的影响[（±s）]

表2 当归-川芎对原发性痛经小鼠子宫组织OTR蛋白和OTRmRNA 的影响[（±s）]

组别OTRmRNA相对表达量RQ值 OTR/β-actin当归-川芎 1∶1 组（n=10）当归-川芎 3∶2 组（n=10）当归-川芎 2∶1 组（n=10）当归-川芎 3∶1 组（n=10）模型组（n=10）正常对照组（n=10）1.92±0.60 1.91±0.34 1.89±0.52 1.93±0.45 3.26±0.27 1.18±0.62 0.79±0.08 0.66±0.05 0.82±0.03 0.85±0.04 1.48±0.43 0.85±0.06

3 讨论

原发性痛经指女性经期前后出现腹部痉挛性疼痛和头晕、恶心、呕吐等不适症状，在女性中发病率较高，严重的痛经给女性生活造成非常大的困扰。痛经的发生机制复杂多变，目前医学界尚不能准确判断，内分泌系统、神经系统和心理因素等变化都可能引起痛经，一般认为，子宫组织中的PGF2变化是重要原因[7]，而原发性痛经小鼠模型中OTR表达和E2含量的升高会引起痛经[8]。目前已有多种方式对原发性痛经进行治疗，其中应用中医药进行治疗在临床上已经得到了医护人员和患者的认可。当归-川芎是常见的治疗原发性痛经药物，当归中含有挥发油和当归多糖等人体所需的物质[9]，研究显示当归多糖能够减少缩宫素引起的痛经模型中诱发的小鼠扭体反应次数，川芎含有内酯类和含氮化合物，而E2、OT表达可能通过提高PGF2水平来引起痛经，会使原发性痛经的病情进一步加重。

经过统计，模型组中小鼠的E2和OT水平分别为：（32.08±3.56）pg/mL、（93.92±8.61）pg/mL 均显著高于对照组小鼠（23.08±3.47）pg/mL 和（71.88±12.84）pg/mL，差异具有统计学意义（P＜0.05）。这与孙玉阳[10]研究结果一致，其研究显示模型组E2和OT水平分别为：（33.71±3.99）pg/mL、（93.41±5.01）pg/mL， 均与该文研究结果相似。

这与经过治疗后，各给药组小鼠子宫组织内的E2和OT水平和模型组的小鼠相比都明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。正常的小鼠和经过造模的小鼠相比较可以知道，经过造模的小鼠子宫组织中的OTR蛋白和OTRmRNA表达水平都明显上升，这两种指标水平差异有统计学意义（P＜0.05）；另外各给药组小鼠的子宫组织内的以上两种指标水平都明显降低，和模型组的小鼠相比较差异有统计学意义 （P＜0.05）。

经过治疗，与模型组相比，各给药组小鼠子宫组织内OTR蛋白和OTRmRNA降低，OTR蛋白水平和模型组相比明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），因此可以进一步证实OTR表达对原发性痛经的发病有促进作用。而且当归-川芎不同配比能够抑制子宫组织中E2、OT和OTR的表达，并进而降低对子宫收缩的刺激，降低原发性痛经的程度。

综上所述，OTR表达对原发性痛经的发病有促进作用，当归-川芎对原发性痛经小鼠子宫组织中E2和OT含量有抑制作用，当归-川芎不同配比能够抑制子宫组织中E2、OT和OTR的表达。