豫南杨树黑斑病病原菌鉴定、影响发病因子调查及田间防治试验方案

李娟

摘要：介绍了驻马店市杨树黑斑病的危害现状，提出病原菌鉴定、影响发病因子调查及田間防治试验以期控制该病的发生，为杨树黑斑病的防治提供参考。

关键词：杨树黑斑病；发病规律；分离鉴定；田间防治

一、驻马店概况

驻马店市位于河南省中南部，北亚热带向暖温带过渡区，属亚热带季风性气候类型，四季分明，夏热冬冷，雨热同季，光、热、降水资源丰富，年均气温15℃左右，年均降水800-1000mm，年均日照数2000-2200h，无霜期217-230d，气候温和，雨量充沛，光照充足，植物种类繁多，生物资源丰富。

近年来，驻马店市杨树纯林面积迅速扩大，随着中龄林的不断增加，杨树有害生物加大危害，尤其是杨树黑斑病肆意蔓延，造成巨大经济损失。杨树黑斑病又称杨树褐斑病，是杨树上危害最严重的病害之一，危害多种杨树，苗木、幼树、大树都可受感染。该病可危害叶片、叶柄、幼茎，以危害叶片为主，自下而上蔓延，使病叶提早1-2个月脱落，仅留梢部少许叶片，严重影响树木生长，是影响驻马店市杨树生长的最主要病虫害之一。为此我们针对杨树黑斑病做出了鉴定和防治方案，以期为杨树黑斑病的鉴定和防治提供参考。

二、杨树黑斑病菌的分离和鉴定

（一）样本的采集和分离

野外采集杨树黑斑病标样，记录发病症状、采集时间、地点、树种、树龄、胸径、危害程度，在标本上系上标签装进塑料袋，带回实验室4℃冰箱保存。室内PDA培养皿培养并纯化，将纯化后菌株转入试管置于4 ℃的冰箱中保存，以便于下一步的研究。

（二）菌株的致病性测定

根据柯赫氏法则，以中林46作为接种对象，检测分离出病原菌的致病性。方法如下：选取直径约2cm的两年生枝条，截成30cm段，表面75%酒精消毒处理后晾干，用一端已经烧热的直径6mm的打孔器刺入叶片，造成一个烫伤伤口，再用打孔器在已培养好的菌落上切取菌饼，每个孔中放一个菌饼，然后用保鲜膜密封，对照用PDA饼处理。将枝条上端用保鲜膜密封后插入盛有水的烧杯，放入培养箱中25℃培养，每天进行观察，记录是否发病和发病特征。

（三）基因组DNA提取和ITS测序

将供试菌株转接至PDA培养基上培养后，提取基因组DNA，经PCR扩增后进行ITS测序，对测得的杨树黑斑病菌株ITS序列进行拼接整理，并把拼接后序列在GenBank上利用BLAST比对，确定杨树黑斑病病原菌种类。

三、影响发病因子调查

选取不同杨树品种、造林密度、立地条件和胸径调查与杨树黑斑病的相关性，统计并计算杨树黑斑病感病指数。（见表1）

（一）病害发生与品种关系调查

选取本地栽植量大的107、中林46、I-69、2025四个杨树品种，每个品种选取2个小班，每个小班设置2块标准地，每块标准地面积为3亩，每块标准地随机选取30棵杨树，7月中旬和8月中旬分别调查、统计并计算每块标准地的杨树黑斑病感病指数。

（二）病害发生与林分密度调查

选择立地条件相同的6m×6m、3m× 4m、2m×3m三种不同栽植密度林地，每个密度选取2个小班，每个小班设置2块标准地，每块标准地面积为3亩，每块标准地随机选取30棵杨树，调查、统计并计算每块标准地的杨树黑斑病感病指数。

（三）病害发生与立地条件的调查

分别选取片林、路林、沟河渠旁、围村林，每个选取2个小班，每个小班设置2块标准地，每块标准地面积为3亩，每块标准地随机选取30棵杨树，调查、统计并计算每块标准地的杨树黑斑病感病指数。

（四）病害发生与林分胸径关系调查

分别选取胸径0-10cm、11-20cm、21-30cm、31-40cm、41cm以上林分进行调查，每个小班设置2块标准地，每块标准地面积为3亩，每块标准地随机选取30棵杨树，调查、统计并计算每块标准地的杨树黑斑病感病指数。

（五）不同防治药剂田间防治效果试验

选取易感病的中林46片林进行田间药效试验，试验设6个处理：①清水对照（CK）；②多菌灵；③嘧菌酯；④戊唑醇；⑤氟硅唑；⑥波尔多液；⑦石硫合剂，每个处理3次重复，每个重复10棵树，在发病初期5月下旬开始喷雾防治，每隔15天喷施1次，连喷5次，每次施药10天后调查记录发病情况，计算感病指数和防治效果，并进行方差分析。

四、试验目的

通过本试验，首先分离鉴定出本地杨树黑斑病病原菌，其次通过调查当地常栽杨树品种对杨树黑斑病的抗性，筛选出适合本地栽植的杨树品种，最后通过田间防治试验，优选出对杨树黑斑病防治效果较好的药剂，为驻马店市杨树黑斑病防治提供理论依据。

参考文献：

[1]刘艳祥.新疆红枣果实两种真菌病害病原鉴定及关键防治技术研究[D].新疆农业大学，2016.

[2]赵增仁.北京市杨树黑斑病病原菌的初步研究[J].中国森林病虫，1990 （1）：28-30.

[3]方应妍.杨树黑斑病的发生规律及综合防治措施[J].现代农业科技，2016 （18）.