青叶胆乙醇提取物的化学成分研究

王龙　郝长敏　武延生

[摘要][目的]对青叶胆乙醇提取物化学成分进行研究。[方法]利用溶剂萃取、柱层析、薄层层析、重结晶等手段，对青叶胆乙醇提取物进行化学成分分离，并通过波谱解析、颜色反应等方法对化合物进行鉴定。[结果]从青叶胆提取物中分里得到獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、芒果苷、1-羟基-2，3，5-三甲氧基（口山）酮、1，5，8-三羟基-3-甲氧基（口山）酮、齐墩果酸6个化合物。

[关键词]青叶胆 化学成分 乙醇 提取物

近年来病毒性肝炎、肝纤维化、脂肪肝、酒精肝、药物性肝损害及肝癌等肝类疾病已成为当今威胁人类健康的主要病因之一。分布在云南、青海、湖南等地的青叶胆可用于此类疾病的治疗，青叶胆用药以传统中医理论为基础，用药机理区别于目前临床常用的西药品种，并且具有我国传统中医药毒副作用小的优势。

现已有以齐墩果酸和环烯醚萜等类成分为主要活性成分的药物投放市场，例如齐墩果酸片、獐芽菜苦苷片、肝复康片（青叶胆总苷）等。而近年来，有研究认为（口山）酮类成分具有重要的抗肝炎活性作用，因此，此类成分的研究工作为扩大青叶胆的临床应用，以及从传统中药中发现作用机制新颖的保肝利胆药物提供了重要的化学和药理学基础。青叶胆（口山）酮类成分的提取多以不同浓度的乙醇为溶剂，所以本文以青叶胆乙醇提取物作为研究对象，进行了一些研究工作。

一、试剂及仪器

（一）试剂

青叶胆的干燥全草购于河北安国中药材市场，经邢台学院化学工程与生物技术学院副教授张雪辉、武延生鉴定为龙胆科植物青叶胆（s.mileensisT.N.HoetW.I.Shi）。

100-200目层析用硅胶柱（青岛海洋化工厂分厂），200-300目层析用硅胶柱（青岛海洋化工厂分厂），200-300目C18反向硅胶（上海和杰科技有限公司），60-90目柱层析用聚酰胺（江苏临江试剂化工厂），聚酰胺薄膜（青岛海洋化工厂分厂），硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂），三氯化铁（天津化学试剂三厂），铁氰化钾（天津化学试剂三厂），α-萘酚（天津化学试剂二厂），实验所用甲醇、氯仿等试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

（二）仪器

UV 1601型紫外分光光度计（日本岛津公司），JOEL 300型超导核磁共振仪（日本电子公司），BruckAC 300P型超导核磁共振仪（瑞士Bruck公司），710型红外波谱仪（美国尼高力公司），WRR型熔点仪（上海物理光学仪器）

二、实验方法与结果

（一）提取物的制备

取青叶胆干燥全草5.0kg，粉碎成小段，分别加80%7.醇10倍、8倍、6倍回流提取3次，每次1小时，合并滤液，减压回收乙醇，得乙醇提取物浸膏，备用。

（二）溶剂萃取

取青叶胆乙醇提取物浸膏，加水调整体积至5L，用石油醚萃取3次，每次石油醚用量为2.5L，取石油醚层，减压浓缩，得石油醚萃取物浸膏，备用；水层继续用氯仿萃取5次，每次氯仿用量为2.5L，取氯仿层，减压浓缩，得到氯仿萃取物浸膏，备用；水层继续用乙酸乙酯萃取5次，每次乙酸乙酯用量为2.5L，取乙酸乙酯层，减压浓缩，得乙酸乙酯萃取物浸膏，备用；水层继续用水饱和正丁醇萃取3次，每次用量2.5L，取正丁醇层，减压浓缩，得正丁醇萃取物浸膏，备用。取各部分萃取物浸膏真空干燥，粉碎，得石油醚萃取物干粉82g、氯仿萃取物干粉115g、乙酸乙酯萃取物干粉156g、正丁醇萃取物干粉128g。

（三）化学成分的分离

取石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物干粉小量，分别甲醇溶解，点于聚酰胺薄膜，以乙醇水（5：3）为展开剂，展开，喷以三氯化铁1%：铁氰化钾1%（1：1）的显色剂，检视。结果显示，乙酸乙酯萃取物中集中了更多种类的成分，同时其基本包含了石油醚萃取物、氯仿萃取物及正丁醇萃取物的成分，本实验选用乙酸乙酯部分的萃取物为研究对象进行进一步分离。

取乙酸乙酯萃取物30g，加乙酸乙酯溶解拌入聚酰胺30g，真空干燥，备用。称取聚酰胺（60-90目）500g，用95%7.醇浸泡24小时后湿法装柱，进行柱层析，以95%7，醇洗至无色。以4%NaOH溶液2000ml洗脫，用水洗至中性后，再以3.8%HCl溶液2000ml洗脱，水洗至中性。加入拌有乙酸乙酯部分萃取物的聚酰胺，以乙醇水系统梯度洗脱，收集洗脱液，每瓶100ml。用30%7.醇2500ml洗脱，得流份120，经薄层检视，合并相同流份得Fr1；继续用40%7.醇5000ml洗脱，得流份21-74，经薄层检视，合并相同流份61-70得Fr2；继续用50%7.醇5000ml洗脱，得流份75-126，经薄层检视，合并相同流份100-110得Fr3，继续用60%7.醇8000ml洗脱，得流份127-220，经薄层检视，合并流份145-158得Fr4。继续用70%7.醇8000ml洗脱，得流份221-302，经薄层检视，合并相同流份220-239得Fr5，合并流份250-280得Fr6。

取Fr2部分样品，浓缩后加甲醇溶解，拌入5g硅胶，真空干燥，称取硅胶50g，乙酸乙酯湿法装柱，以乙酸乙酯-甲醇水（20：2：1）洗脱。收集洗脱液，经薄层检视，得流份10-25合并为Fr2-a，流份30-40合并为Fr-b。

取Fr2-a部分样品，减压浓缩，残渣以无水乙醇加热溶解，放置，析出白色无定形粉末，得化合物1；取Fr2-b部分样品，减压浓缩，残渣以无水乙醇加热溶解，放置，析出淡黄色针状结晶，得化合物2。

取Fr3部分样品，浓缩后加甲醇溶解，拌入5g反向硅胶，真空干燥，称取反向硅胶（200-300目）50g，用水湿法装柱，分别以水、lO%7.醇、20%7.醇的顺序洗脱。收集洗脱液，经薄层检视，合并相同流份得Fr3-a，浓缩后残渣加甲醇加热溶解，放置，析出淡黄色柱状结晶，滤过，重结晶，得化合物3。

取Fr4部分样品，减压浓缩，残渣以无水乙醇加热溶解，放置，得到少量黄色针状结晶，重结晶，得化合物4。

取Fr5部分样品，浓缩，放置，得大量黄色沉淀，滤过，用60%乙醇冲洗，得冲洗后的沉淀，经干燥后，将沉淀溶于热甲醇，放置，析出大量黄色结晶，重结晶，得黄色片状结晶，得到化合物5；取Fr6部分样品，浓缩，放置，得大量白色沉淀，滤过，用60%7.醇冲洗，得冲洗后的沉淀，经干燥后，将沉淀溶于（MEOH：CHCl₂=10：3）的溶剂中，放置，析出大量白色结晶，重结晶，得白色针状结晶，得化合物6。

（四）结构鉴定