良附丸对4种实验性胃溃疡模型 大鼠的防治效果

马平平，毕珺辉，徐丹，陈燕，赵雪莹

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

胃溃疡，中医学称为胃脘痛，并认为胃脘痛病位在胃，与肝脾相关，常因风、寒、湿、热诸邪单独或相兼犯胃致使胃脘气机郁滞，胃气失于和降，不通则痛而发生胃脘痛[1-4]。良附丸出自《良方集腋》，由高良姜和香附二味组成，具有行气疏肝、祛寒止痛之功，为临床上治疗肝胃气滞冷痛的基本方[5]。

本实验分别采用束缚-水浸应激法、幽门结扎法、醋酸涂抹法及消炎痛法复制大鼠胃溃疡模型，通过观察良附丸对4种模型大鼠胃组织病理变化、溃疡指数及溃疡愈合率的影响，明确良附丸对4种实验性胃溃疡模型动物的防治效果。

1 实验材料

1.1 实验动物

清洁级雄性Wistar大鼠130只，体质量180～220 g，由黑龙江中医药大学动物实验中心(GLP)提供，许可证号：SCXK(黑)2014-001。

1.2 实验药物

高良姜、香附各50 g，由黑龙江中医药大学附属一院中药房提供。将以上两种药物按1∶1比例称取，粉碎，混匀，煎煮，旋转蒸发制备成所需不同浓度水煎液。

良附丸：将高良姜、香附二药混匀，加水浸泡后，常规加热煎煮2次，每次煎煮40 min，滤出药渣，合并药液，旋转蒸发浓缩成含生药0.216 g/ml的良附丸水煎剂，置于冰箱备用，取用时置于恒温水浴锅加热至37℃。

消炎痛配置：溶于5%碳酸氢钠溶液中，配置成每毫升10 mg浓度的混悬液，以每公斤体质量20 mg的剂量腹腔注射。

奥美拉唑肠溶胶囊，按体表面积折算法计算大鼠的用量，以成人用量每天40 mg计算出大鼠每天用量为3.6 mg/kg。以10 ml/kg灌胃给药，制备奥美拉唑水悬液的浓度为0.36 mg/ml。

青霉素钠溶液配置：80万单位青霉素钠溶于4 ml生理盐水。

口服生理补液盐(ORS)配置：1 000 ml纯水,氯化钠3.5 g，碳酸氢钠2.5 g，氯化钾1.5 g，蔗糖20 g混匀，充分溶解。

戊巴比妥钠溶液的配置：3 g戊巴比妥钠溶于100 ml生理盐水中，配置成浓度为3%，用时以30 mg/kg腹腔注射麻醉。

1.3 实验仪器及试剂

PL202-S/00型电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；HH-S恒温水浴锅(江苏医疗仪器厂)；游标卡尺(上海量具刃具厂)；青霉素钠(哈药集团制药总厂，批号15010105-2)；奥美拉唑肠溶胶囊(哈药集团三精制药诺捷有限责任公司，批号1504634)；碘伏(德州名德消毒科技有限公司,批号20151003)；消炎痛(临汾厅林药业有限公司，批号1303201)；40%甲醛(丹东市龙海试剂厂，批号20141007)；戊巴比妥钠(上海桥星贸易有限公司，批号1063180)；氯化钠注射液(哈尔滨三联药业股份有限公司，批号150512F5)；吲哚美辛片(临汾厅林药业有限公司，批号1303201)；蔗糖(天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20140111)；75%乙醇(山东利尔康医疗科技股份有限公司，批号20151007)；冰醋酸(天津市耀华化学试剂有限责任公司，批号XK13-011-00010)。

2 实验方法

2.1 分组及给药

清洁级雄性Wistar大鼠130只，体质量180～220 g，按体质量随机分为12组：幽门结扎良附丸组10只(幽良组)；幽门结扎模型组10只(幽模组)；幽门结扎阳性对照组10只(幽阳组)；束缚-水浸应激良附丸组10只(水良组)；束缚-水浸应激模型组10只(水模组)；束缚-水浸应激阳性对照组10只(水阳组)；消炎痛良附丸组10只(消良组)；消炎痛模型组10只(消模组)；消炎痛阳性对照组10只(消阳组)；醋酸涂抹良附丸组10只(醋良组)；醋酸涂抹模型组10只(醋模组)；醋酸涂抹阳性对照组10只(醋阳组)；空白对照组10只。各模型良附丸组给予良附丸2.16 g/(kg·d)灌胃，阳性对照组给予3.6 mg/(kg·d)奥美拉唑肠溶胶囊水溶液灌胃，模型组给予等体积生理盐水灌胃。幽门结扎型、束缚-水浸应激型和消炎痛型3种胃溃疡模型大鼠分别预防性给药4天后造模，醋酸涂抹型胃溃疡大鼠造模后治疗性给药10天。

2.2 模型制备[6]

幽门结扎型胃溃疡模型制备：造模前需连续给药4天，造模开始前36 h需禁食不禁水，禁食期间勿使大鼠将垫料等物食入。末次给药2 h后开始造模，将大鼠以3%戊巴比妥钠麻醉，固定、备皮、消毒、开腹、结扎幽门，逐层将切口缝合，消毒、包扎后，放回饲养笼并禁食水。

束缚-水浸应激型胃溃疡模型制备：造模前需连续给药4天，造模开始前24 h需禁食不禁水，于末次给药1 h后开始造模，以3%戊巴比妥钠麻醉后将大鼠固定于鼠板上，待大鼠苏醒后将其浸入(20±1)℃的恒温水槽中，液面与胸骨剑突齐平。

消炎痛型胃溃疡模型制备：造模前需连续给药4天，造模开始前24 h需禁食不禁水，末次给药30 min后开始造模，按体质量腹腔注射消炎痛,每公斤体质量20 mg。

醋酸涂抹型大鼠胃溃疡模型制备：造模前大鼠禁食不禁水24 h(严格控制动物将垫料和粪便等杂物食入)，3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，常规固定、备皮、消毒后，自剑突下沿腹中线切开腹壁约2 cm打开腹腔，轻轻将胃拉出，暴露胃前壁窦体部，将胃浆膜面液体拭干后用直径5 mm,长30 mm的自制塑料管垂直按压于胃前壁窦体黏膜面上，尽量避开血管，用1 ml注射器向管内注入100%醋酸0.2 ml，注意保持按压力度，以防液体从接触面周围流出，60 s后将玻璃管中的醋酸用注射器吸除，以无菌生理盐水冲洗、擦干涂抹处后将胃轻轻送回，并用大网膜将涂沫处覆盖，腹壁缝合前向腹腔内滴入青霉素钠注射液0.1 ml，逐层缝合后再次消毒。术后禁食1天，饮用生理补液盐。

2.3 实验取材

幽门结扎术后18 h，水应激7 h后，消炎痛腹腔注射7 h后，醋酸涂抹末次给药禁食24 h后将大鼠处死并立即开腹，除幽门结扎型外其余3种模型大鼠结扎幽门、贲门，取出胃置于1%甲醛中固定10 min，沿胃大弯把胃剪开，再用无菌生理盐水将胃内容物冲洗干净，用脱脂棉球拭干，观察胃组织的损伤情况。

2.4 溃疡指数测定

取胃后观察胃组织损伤情况发现，除醋酸涂抹型外，其余3组胃溃疡模型大鼠胃组织损伤形态相似，均呈条形点或线状出血带，用游标卡尺精确测量胃黏膜上每一个损伤的长度(mm)，并计算每只大鼠所有损伤长度的总和，作为该大鼠的溃疡指数；也可按“分”表示溃疡指数，将每个损伤评分，总分为该大鼠的溃疡指数。

表1 评定溃疡损伤程度的评分标准

注：若损伤宽度>2 mm者，将其计分加倍

醋酸涂抹型胃溃疡大鼠胃黏膜损伤大致成椭圆形，其溃疡面积计算方法为：以游标卡尺通过溃疡中心测量最大横径d1和最短横径d2，溃疡指数(UI)=π×d1/2×d2/2。根据溃疡指数计算溃疡抑制率。

溃疡抑制率(%)=(1-给药组溃疡指数/模型组溃疡指数)×100%

2.5 统计学处理

3 结果

3.1 各组大鼠的一般情况比较

4种实验性胃溃疡模型大鼠均有精神萎靡、大小便失禁、呼吸微弱、行动缓慢、食欲差及毛发无光泽、对外界刺激反应较差等表现。幽门结扎型各组大鼠还出现了腹大体征；束缚-水浸应激型大鼠除上述表现外还伴有瑟瑟发抖，水浸应激型良附丸组及阳性药组大鼠状态明显优于水浸应激型模型组。

3.2 各组大鼠胃黏膜损伤情况比较

幽门结扎型、束缚-水浸应激型和消炎痛型各组大鼠胃黏膜表面损伤形态相似，呈条形点或线状出血带或糜烂。醋酸涂抹型各组大鼠胃黏膜溃疡面形态为中央凹陷，溃疡面上白色炎性坏死渗出物覆盖，溃疡周围隆起类圆形溃疡面，溃疡累及胃组织全层，造成胃溃疡区域与腹腔内脏器出现黏连现象。

表2 良附丸对幽门结扎型大鼠溃疡指数 及溃疡抑制率的影响

注：与幽模组比较，▲▲P<0.01；与幽阳组比较，*P<0.05

由表2可知，幽模组出现溃疡说明幽门结扎型大鼠胃溃疡造模成功。幽良组溃疡指数明显降低，差异显著(P<0.01)；幽阳组与幽模组比较，溃疡指数亦明显降低，差异显著(P<0.01)。幽阳组溃疡指数较幽良组明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05)。

由表3可知，水模组出现溃疡说明束缚-水浸应激型大鼠胃溃疡造模成功。水良组与水模组比较，溃疡指数明显降低，差异显著(P<0.01)；水阳组与水模组比较，溃疡指数亦明显降低，差异显著(P<0.01)。水良组与水阳组比较溃疡指数无明显差异(P>0.05)。

表3 良附丸对束缚-水浸应激型大鼠溃疡指数 及溃疡抑制率的影响

注：与水模组比较，▲▲P<0.01；与水阳组比较，*P>0.05

由表4可知，消模组出现溃疡说明消炎痛型大鼠胃溃疡造模成功。消良组与消模组比较，溃疡指数明显升高，差异显著(P<0.05)；消阳组与消模组比较，溃疡指数差异不显著(P>0.05)。消良组与消阳组比较溃疡指数差异显著，差异极具统计学意义(P<0.01)。

表4 良附丸对消炎痛型大鼠溃疡指数及 溃疡抑制率的影响

注：与消模组比较，▲P<0.05；与消阳组比较，*P<0.01

由表5可知，醋模组出现溃疡说明醋酸涂抹型大鼠胃溃疡造模成功。醋良组与醋模组比较，溃疡指数无明显差异，差异不显著(P>0.05)；醋阳组与醋模组比较，溃疡指数明显降低，差异极显著(P<0.01)。醋良组与醋阳组比较溃疡指数差异显著，差异有统计学意义(P<0.05)。

表5 良附丸对醋酸涂抹型大鼠溃疡指数 及溃疡抑制率的影响

注：与醋模组比较，▲P>0.05，▲▲P<0.01；与醋阳组比较，*P<0.05

3.3 良附丸对4种模型大鼠溃病抑制率的影响

结果见表6及图1。

表6 良附丸对4种模型大鼠溃疡抑制率的影响

图1 良附丸对4种模型大鼠溃疡抑制率的影响

4 讨论

幽门结扎型胃溃疡模型大鼠因幽门被结扎而出现胃腔内胃液增加，胃内pH值下降，致使胃黏膜攻击因子增强，防御作用减弱，从而导致胃溃疡的产生。本实验研究证实，良附丸对幽门结扎型大鼠胃溃疡有防治作用，因此该模型所致胃溃疡可能类似于中医学中“气滞型胃脘痛”范畴，良附丸对该模型胃溃疡有效，推测这可能与良附丸具有行气疏肝作用有关。

束缚-水浸应激型胃溃疡模型是以束缚加寒冷刺激的应激手段造成模型大鼠胃黏膜的急性损伤，从胃黏膜损伤的形态及程度上来看，此种模型大鼠胃溃疡与人类的慢性胃溃疡相似。从现代医学角度，束缚-水浸应激法引起胃溃疡的发病机制可能与胃黏膜缺血及胃腔内H+过量进入胃黏膜内有关。应激时，儿茶酚胺含量增加促使血液重新分布，因此造成了胃黏膜缺血。黏膜缺血致使黏膜血流量减少和上皮细胞能量不足，二者均可导致碳酸氢盐减少，既能使黏膜屏障功能减弱又不能中和过量的H+，因黏膜血流量降低，过量的H+也不能被血液及时带走，从而胃黏膜内pH值下降，造成黏膜损害。研究表明，束缚-水浸应激型胃溃疡的溃疡程度与浸泡水温和浸泡时间密切相关，即在动物体质耐受情况下，水温越低，浸泡时间越长，则溃疡程度越重，更有利于评价药效[7]。本实验中良附丸对束缚-水浸应激型胃溃疡防治效果明显，该胃溃疡模型类似于中医寒邪客胃型胃脘痛，其防治效果明显可能与良附丸具有祛寒作用有关。

消炎痛型胃溃疡模型属于药物引发型胃溃疡模型。消炎痛为非甾体抗炎药，是一种强环氧化酶抑制剂,能选择性抑制COX-1和COX-2，从而降低炎症介质前列腺素(PG)的合成，达到抗炎、止痛和解热等作用，但消炎痛所引起的胃肠道不良反应亦十分明显[8]。前列腺素对胃黏膜的保护作用可概括为增加血流量、加快上皮细胞增殖、促进黏液生成。消炎痛引起胃溃疡的作用机制为抑制前列腺素合成，阻断前列腺素对胃黏膜的保护作用，使黏膜屏障作用减弱，同时黏膜攻击因子增强而发生溃疡。本实验中良附丸对消炎痛型胃溃疡模型大鼠的疗效不明显，且对溃疡有加重表现，这可能是由于大鼠内源性前列腺素减少，减弱了黏膜的抵抗力而增强了黏膜的攻击因素，致使黏膜功能紊乱，再予以良附丸行气疏肝，祛寒止痛之品，则不利于溃疡的愈合。

醋酸涂抹型胃溃疡模型是以具有强腐蚀性的冰醋酸直接接触胃壁浆膜面，以腐蚀胃壁各层，导致胃组织缺血坏死，最终脱落形成溃疡，从溃疡的形态及损伤程度上看其特点类似于人类胃溃疡。本法是目前最常用的实验性胃溃疡的造模方法。本实验中良附丸对醋酸涂抹型胃溃疡模型大鼠治疗效果不佳，主要是该模型类似于中医胃热型胃脘痛，良附丸具有的散寒作用与其病机相悖有关。

故本实验中，良附丸对幽门结扎型和束缚-水浸应激型胃溃疡均有一定的防治作用，但对水浸应激型胃溃疡的疗效最好。