宫颈癌组织中FR-α蛋白及Ki-67表达的关系及其临床意义

赵红果 郭宝芝 刘爱珍 宋芷霜 蔡海瑜 丁俊珊 刘路玖

宫颈癌是恶性肿瘤中的一大典型代表，属于妇科范围，在各种妇科恶性肿瘤中，它的发病率仅仅是低于乳腺癌的[1]。腺鳞癌、鳞癌、腺癌是其比较普遍的几种病理类型，以下是与其发病原因有紧密联系的几点因素：①发挥协同作用的滴虫等病原体的感染、沙眼衣原体、单纯疱疹病毒Ⅱ型；②营食不健康，生活环境差；③感染啦高危型的HPV；叶酸有利于DNA修复和合成、癌细胞快速增殖分裂以及细胞代谢，癌细胞中的DNA合成能够被高效分裂主要是依赖于叶酸，因此，近年来医学界的研究热点聚焦到了转运叶酸的叶酸受体α上。黏液腺癌中的FR-α能够高表达，同时它也在子宫腺癌、宫睾丸绒和某些脑肿瘤中起作用。在增殖细胞核中Ki-67的是1种密切相关于细胞增殖的核蛋白，它在医疗界常被作为标记物去评价细胞增殖，Ki-67的这些特性，在研究肿瘤问题过程中得到广泛应用[2-3]。我们在此次研究宫颈癌组织中Ki-67及FR-α蛋白的表达中用到了免疫组织化学法(immunohistochemistry)，探讨二者的关系及其临床意义。

1 材料与方法

1.1 基本资料

选取2010年1月至2015年12月在本院因子宫肌瘤行子宫全切术、因癌前病变行手术治疗以及因宫颈癌行手术治疗的患者50例。其中15例宫颈癌组从在本院接受过宫颈癌手术的患者中选取(4例宫颈癌Ⅱ期、3例宫颈癌Ⅲ期、8例宫颈癌Ⅰ期)，17例正常宫颈组织组从在本院进行过子宫肌瘤行子宫全切术的患者中选取。18例宫颈上皮内瘤变组从在本院治疗过癌前病变的患者中选取，且这些患者都被证实为是其宫颈上皮内的组织发生瘤变。以上选取的50例患者平均年龄不超过40岁，且无其他癌症史以及与妇科相关的严重病症。

1.2 纳入及排放标准

纳入标准：患者年龄18～80岁，宫颈癌组的患者接受过宫颈癌手术，正常宫颈组则需保证在术前检查宫颈液基时结果正常。所有参与实验的患者知情并且同意此次研究。排除标准：除宫颈癌外还患有其他危重病。

1.3 方法

1.3.1 叶酸受体α的表达 采用免疫组化PV法检测样本石蜡包埋、浸蜡、透明、脱水，将蜡块切片到约4 μm时。染色采用免疫组织化学PV6001法,操作均按照pv法说明书执行[4]。

1.3.2 Ki-67表达 采用免疫组化PV法检测福尔马林液可以有效的固定保存实验中的样本，将蜡块切片到约4 μm时。采用免疫组织化学PV6001法[5]。

1.4 判定标准

1.4.1 判断FR-α蛋白在组织中阳性表达 当棕黄色颗粒出现在细胞胞质内时，FR-α蛋白在组织中呈阳性表达，切片强度判定均用双盲法。细胞染色强度的评分标准如下：淡黄色为1分，棕褐色为3分，棕黄色为2分，未见染色为0分；阳性细胞所占百分比标准如下： 5个高倍镜下的视野，选定每个视野100个细胞进行计数，80%～100%为4，10%～50%为2，0～1%为0，1%～10%为1，50%～80%为3。总评分=细胞染色强度得分×阳性细胞所占百分比得分，其判定结果如下：IHS 0分为(-)，IHS 1～4分为(+)，IHS 5～8分为(++)，IHS 9～12分为(+++)[6]。

1.4.2 判断Ki-67在组织中阳性表达 Ki-67阳性表达定位于细胞核中，切片强度判定均用双盲法。评分细胞染色强度的标准如下：淡黄色为1分，棕褐色为3分，棕黄色为2分，未见染色为0分。评分阳性细胞所占百分比的标准如下：任意观察5个高倍镜下的视野，选定每个视野中较清楚的100个细胞进行计数，阳性细胞数为80%～100%为4分，50%～80%为3，10%～50%为2分，1%～10%为1分，0～1%为0分。总评分=细胞染色强度得分×阳性细胞所占百分比得分，其判定结果如下：IHS 0分为(-)，IHS 1～4分为(+)，IHS 5～8分为(++)，IHS 9～12分为(+++)。

1.5 统计学处理方法

应用SPSS 13.0统计软件处理所有数据，用Fish确切概率法计数资料，用Spearman等级相关分析法分析者者这两组结果变量的关系。P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组中FR-α蛋白表达

FR-α 表达阳性率在18例宫颈上皮内瘤变组织为75.0%、15例宫颈癌组织为80.0%、17例正常宫颈组织6.7%，三组数据比较，差异有统计学意义(P<0.05)。正常组织与宫颈上皮内瘤变组织中FR-α阳性表达率比较，差异有统计学意义(P<0.05)，宫颈癌组织和宫颈上皮内瘤变组织中FR-α 蛋白阳性表达率，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 FR-α蛋白在不同组织中的表达/例

2.2 三组组织中Ki-67蛋白表达

Ki-67蛋白表达阳性率18例宫颈上皮内瘤变组织为72.2%，15例宫颈癌组织为86.7%、17例正常宫颈组织为0.0%，三组数据比较得知，差异有统计学意义(P<0.05)。正常组织和宫颈上皮内瘤变组织中Ki-67蛋白阳性表达率比较，差异有统计学意义(P<0.05)，宫颈癌组织和宫颈上皮内瘤变组织中 Ki-67蛋白阳性表达率比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 Ki-67蛋白在不同组织中的表达情况/例

2.3 FR-α在不同临床分期宫颈癌组织中的表达

FR-α蛋白表达阳性率8例宫颈癌Ⅰ期为65%，宫颈癌Ⅱ期为80%，宫颈癌Ⅲ期为67%，三组数据进行比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 不同分期宫颈癌组织中FR-α蛋白的表达情况/例

2.4 Ki-67在不同临床分期宫颈癌组织中的表达

Ki-67蛋白阳性表达率宫颈癌Ⅰ期为75%，宫颈癌Ⅱ期为50%，宫颈癌Ⅲ期为100%，比较3组数据得知，但差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表4 Ki-67蛋白在不同时期宫颈上皮内瘤变组中的表达/例

3 讨论

宫颈癌是恶性肿瘤中的一大典型代表，属于妇科范围。每年死于宫颈癌的女性大约有二十万。相关实验数据表明人类乳头瘤样病毒(HPV)一旦侵入人体并且未得到有效清除，会导致宫颈癌发病以及其后期的恶掠发展[7]。宫颈上皮内瘤变Ⅱ级(CINⅡ)、宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CINⅢ)、宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)为上皮内病变的3种形式，病变加重时，浸润性宫颈癌形成，宫颈癌Ⅱ期、宫颈癌Ⅲ期及宫颈癌Ⅳ期、宫颈癌Ⅰ期就是凭照瘤细胞浸润的范围来分类的[8-11]。如能尽早诊断出宫颈癌并立即进行有效的治疗，患者的生存率和生存质量会大大提高。在临床上主要是使用HPV分型、宫颈液基细胞学检(TCT)等，在多样的方法中若能找出1种简单、无创伤性、快捷、灵敏性及特异性高的方法，宫颈癌就能被更早发现，患者也就早日能进行有效的治疗，从而降低宫颈癌患者的死亡率。

宫颈癌的发生到发展再到恶化是1个复杂的过程，相关实验表明宫颈癌的发生、发展过程与叶酸受体有着重要的关系。叶酸受体主要分为FR-β、FR-γ，FR-α，Toffoli、Kall等的早年研究表明FR-α对卵巢肿瘤的早期诊断具有相当高特异性的准确的灵敏度。然而却几乎没有报道是关于研究FR-α和诊断宫颈癌关系的。此次实验旨在通过研究宫颈癌中FR-α的表达，得到1种有利于预判宫颈癌是否发生的标记物[12-15]。为了研究癌细胞增殖与FR-α的关系，需同时了解到宫颈癌中Ki-67的表达，位于增殖细胞的细胞核核内的Ki-67，被诸多医学者的相关实验证实能够作为1种有效可靠的细胞增殖标记物。Ki-67能够较准确的预判肿瘤的发展进程以及良恶。 患者的治愈率和宫颈癌的后期发展也都与Ki-67在细胞核中的表达水平有密切关系。用免疫组化方法探究Ki-67和FR-α表达的相关性。宫颈上皮内瘤变组织、正常宫颈组织、宫颈癌组织中的FR-α蛋白表达于细胞质，并以棕黄色颗粒的形状呈现。宫颈上皮内瘤变组织、正常宫颈组织、宫颈癌组织中的Ki-67蛋白表达于细胞核，并以棕黄色颗粒的形状呈现。若想得到更准确的结果，可以增加样本量以减少误差。而通过其在正常样本数内的组之间的比较得知，Ki-67与FR-α有密切的关系，而Ki-67又是1种有效可靠的细胞增殖标记物，因此得出FR-α转运叶酸与癌细胞分裂增殖有关系。

综上所述，FR-α 蛋白表达升高与宫颈癌发病有关，FR-α 蛋白在宫颈上皮内瘤变织和宫颈癌中的表达与 Ki-67 有相关性。由此可得知FR-α 蛋白会在细胞增殖中起作用从而影响宫颈癌。