2015～2017年东莞市H3N2亚型猪流感血清学调查

欧阳伟强，陈盛文，温 蕾，陈丽萍 ，王自强，张险朋★

（1.东莞市厚街镇农业技术服务中心，广东 东莞 523960；2.东莞市长安镇农业技术服务中心，广东 东莞 523846；3.东莞市动物疫病预防控制中心，广东 东莞 523086）

猪流感（Swine Influenza,SI）是由正黏病毒科A型流感病毒引起猪的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。猪流感不仅给养猪业带来巨大的经济损失，还对公共卫生构成严重的威胁，引起全球的关注。猪流感疫情首先是在1918年西班牙流感大流行期间被发现，当时发现人群感染流感后，猪群也随后发病，猪群发病后，人也发病，后来证实流感病毒在猪和人之间可以相互传染。1957年亚洲流感、1968年中国香港地区流感和2009年的甲型H1N1流感都是人-猪-禽流感病毒的重配病毒，因此，猪在流感的传播中起到了“混合器”作用。目前，猪群中流行猪流感亚型主要是H1N1、H1N2以及H3N2。猪群中的H3N2亚型与人群中流行H3亚型甲型流感有相关性，因此，掌握猪群中H3N2亚型猪流感的流行情况，对做好人的季节性流感预警、预报具有很重要的意义。为了摸清东莞市猪群中H3N2亚型猪流感流行情况，在2015～2017年在东莞市猪养殖场采集猪血清进行调查，现将调查结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 猪血清 2015～2017年采自东莞市本地猪养殖场，共873份。采用猪前腔静脉采血，3000r/min,分离出血清，-20℃保存，备检。

1.1.2 试 剂 H3N2亚型猪流感抗体ELISA试剂盒，购自加拿大Biovet公司，批号：164806。

1.1.3 仪器设备 Sunrise酶标仪购自奥地利Tecan公司，移液器购自eppendorf公司。

1.2 方法

1.2.1 将包被H3N2亚型猪流感病毒抗原的酶标条放在奇数列上，未包被抗原的酶标条放在偶数列上。用稀释缓冲液1:50稀释猪血清。

1.2.2 A1和A2孔加入100μL阳性对照，B1和B2孔加入100μL阴性性对照，其余孔加入100μL稀释后的猪血清，每份样品分别加入奇数孔和偶数孔。37±2°C孵育30min。

1.2.3 弃去孔内所有液体，每孔加入300μL的1倍洗涤液进行泡洗，重复洗板3次，最后一次在吸水纸上拍干孔内液体。每孔加入100μL稀释后的酶标结合物，封板，37±2°C孵育30min。

1.2.4 弃去孔内所有液体，每孔加入300μL的1倍洗涤液进行泡洗，重复洗板3次，最后一次在吸水纸上拍干孔内液体。每孔加入100μL的底物，23±2℃下避光孵育15min。

1.2.5 对每份样品和阳性、阴性对照，用含H3N2亚型猪流感病毒特异性抗原（A）的OD值减去对照孔（C）的OD值。用该值除以阳性对照的OD值（P）得到比率值。

1.2.6 结果判定 阴性对照的比率值必须小于0.40，阳性对照的OD值必须大于0.75，试验结果成立。样品的比率值小于0.40，判为抗体阴性，样品的比率值大于等于0.40，判为抗体阳性。

2 结果

2015～2017年共检测本地养猪场点64个次，873份猪血清，H3N2亚型猪流感抗体阳性数501份，抗体阳性率为57.39%，其中2015～2017年的抗体阳性率分别为24.20%、66.21%、69.66%，详细结果见表 1。2015～2017年，年度的抗体阳性率呈上升趋势，差异显著，趋势见图1。

图1 2015-2017年东莞市H3N2猪流感抗体阳性率趋势图

3 讨论

根据调查，东莞市本地养猪场未免疫H3亚型猪流感疫苗，因此通过检测猪群血清中的H3N2亚型猪流感抗体，可以判定猪群是否感染或曾经感染H3N2亚型猪流感病毒。根据试验结果，2015～2017年，东莞市H3N2亚型猪流感抗体的阳性率为57.39%，结果表明，东莞市的猪群普遍存在H3N2亚型猪流感的感染。甘平等在2012～2015年对江西省的猪群进行H3亚型猪流感血清抗体调查，结果为23.69%；王隆柏等在2009与2010年对福建省猪群进行H3亚型猪流感血清学调查，2009年和2010年抗体阳性率分别为21.0%、18.4%；徐敏等在2009年和2010年对广东规模猪场进行H3亚型猪流感病毒抗体血清学调查，抗体阳性率为16.8%；金凌艳等对上海某区猪群中猪流感（H3N2）血清学抗体检测结果为抗体阳性率18.8%。上述结果表明，H3N2亚型猪流感在我国不同地区均有流行，抗体阳性率有所差异，可能与采集不同猪群的样品有关。

表1 2015～2017年东莞市H3N2亚型猪流感抗体检测结果

根据试验结果，2015～2017年，东莞市H3N2亚型猪流感抗体阳性率呈上升的趋势，根据从卫生部门的了解，东莞市近3年甲型流感流行的毒株从以前优势株甲型H1N1流感转为以H3N2亚型为主。根据陈英安等对猪养殖场从业人员H3亚型流感抗体的调查，养猪场从业人员的抗体阳性率明显高于社区对照组，墨西哥的一项研究结果也表明，规模猪场从业人员的抗体阳性率也明显高于一般人群。结果表明，猪群中流行的猪流感与人群中的甲型流感有密切的相关性。

猪流感的流行给畜牧业造成很大的经济损失，同时对公共卫生构成严重的威胁，因此做好猪流感的防控显得尤为重要。（1）做好养猪场的生物安全措施，做好消毒和隔离，防止病原带进养殖场。（2）改善养猪场的养殖环境，做好通风，降低饲养的密度。（3）加强养殖从业人员的管理，从业人员发现有流感症状，禁止进入猪场，防止将人的流感传染给猪。（4）加强养猪场猪流感的监测，及时掌握猪群中猪流感流行毒株流行、变异情况，与卫生部门建立联防联控的机制，相互通报监测情况，为猪流感的防控提供准确的数据。