东莞市动物布鲁氏菌病血清抗体调查

陈盛文，周柱辉，柳小强，陈丽萍 ，王自强，张险朋★

（1.东莞市长安镇农业技术服务中心，广东 东莞 523846；2.东莞市横沥镇农业技术服务中心；3.东莞市动物疫病预防控制中心，广东 东莞 523086）

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起一种变态反应性人畜共患传染病，所有的哺乳动物都可感染，但牛、羊、猪等家畜和野生动物最易感。布鲁氏菌是细胞内寄生菌，可以引起哺乳动物和人类和致病，一般的抗生素难以治愈。家畜感染主要以流产、死胎、睾丸炎、不孕不育和关节炎为特征。人感染主要表现为持续性感染、间歇性流感样症状又称“波状热”，表现多汗、生殖系统疾病、关节炎、肝脾肿大以及肌肉-骨骼系统和中枢神经系统的并发症等。布鲁氏菌病会对畜牧业造成严重的经济损失，对人类的健康和公共卫生安全构成严重的威胁。布鲁氏菌病感染的高危人群主要是兽医、畜牧科技人员、屠宰从业人员、农牧场的人员。另外，普通市民食用了带菌的乳品、生肉或接触受污染的组织等也会引起感染。人类的传染源主要还是患病的动物或受污染的动物产品，因此，要做好人的布鲁氏菌病防控，必须从源头抓起，控制好动物的布鲁氏菌病，能大大降低人感染布鲁氏菌的几率，减少人的病例。为了掌握东莞市布鲁氏菌病的流行情况，在2012～2016年，对采自东莞市动物的血清进行检测，现将检测结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 被检血清

2012～2016年间，采自东莞市的动物血清，共25500份，其中猪血清20221份，牛血清 203份，羊血清239份，犬血清4508份，马血清329份。

1.1.2 试 剂

布鲁氏菌病虎红平板凝集抗原、试管凝集抗原、标准阴性和阳性血清购自青岛易邦生物工程有限公司。

1.1.3 仪器设备

生化培养箱购自三洋公司，移液器购自eppendorf公司。

1.2 方法

1.2.1 虎红平板凝集试验

用涡旋振荡器混匀血清和虎红平板凝集抗原，在玻璃板上标记待检血清号，分别吸取30μL的血清和抗原加于玻璃板上。用灭菌牙签快速混匀血清和抗原，涂成2cm直径的圆形，混匀后4min，在自然光下观察。试验同时设阴、阳性血清对照。结果的判定，在阴性血清不出现凝集、阳性血清出现凝集时，试验成立；出现肉眼可见凝集现象者判定为阳性(+)，无凝集现象且反应混合液呈均匀粉红色者判定为阴性（-）。

1.2.2 试管凝集方法

在96孔U型板的第1孔加184μL稀释液；第2～4孔各加入100μL稀释液；第1孔加入16μl待检血清，混匀，倍比稀释至第4孔；稀释后，第1至第4孔的血清稀释度分别 为 1：12.5、1：25、1：50 和 1：100； 牛 血 清 的 第 1 孔 加192μL稀释液和8μL受检血清,其稀释度分别为1：25、1∶50、1∶100和1∶200。阴、阳标准血清按照待检血清稀释方法稀释。加入抗原100μL至上述各孔稀释好的血清中,振荡混匀。抗原对照孔加100μL抗原和100μL稀释液，观察抗原是否有自凝现象。将加完样的96孔U型反应板，封板后放湿盒内置温箱（37℃±1℃）孵育18～24h,记录结果。

当阳性血清出现完全凝集（++++），而阴性血清无凝集（-），抗原对照无自凝(-)现象时，试验成立。受检血清出现“++”及以上凝集现象时，判定为阳性；受检血清出现“+”凝集现象时，判定为可疑；受检血清出现“-”时，判定为阴性。试验结果可疑牛、羊经30d后采血重检,如果仍为可疑,该家畜判为阳性。

2 结果

2.1 猪血清检测结果

共检测猪血清20221份，布鲁氏菌抗体阳性7份，抗体阳性率为0.035%；其中养猪场检测6756份，抗体阳性4份，抗体阳性率为0.06%，结果（见表1）；猪屠宰场检测13465份，抗体阳性3份，抗体阳性率为0.02%，结果（见表2）。

2.2 牛血清检测结果

表1 2012～2016年猪养殖场布鲁氏菌病抗体检测结果

表2 2012～2016年猪屠宰场布鲁氏菌病抗体检测结果

2012～2016年共检测活牛交易市场牛血清275份，抗体阳性2份，抗体阳性率为0.73%，结果（见表3）。

2.3 羊血清检测结果

表3 2012～2016年活牛交易市场布鲁氏菌病抗体检测结果

共检测羊血清5024，抗体阳性4份，抗体阳性率0.08%；其中本地羊养殖场羊血清192份，抗体阳性1份，抗体阳性率为0.52%，结果（见表4）；检测羊批发市场羊血清4832，抗体阳性3份，抗体阳性率为0.06%，结果见（表5）。

2.4 犬血清检测结果

表4 2012～2016年羊养殖场布鲁氏菌病抗体检测结果

表5 2012～2016年羊批发场布鲁氏菌病抗体检测结果

2012～2016年检测本地养殖犬血清4508份，抗体阳性4份，抗体阳性率0.09%，结果（见表6）。

2.5 马血清检测结果

表6 2012～2016年犬布鲁氏菌病抗体检测结果

2014～2016年检测本地马场马血清329份，未检出抗体阳性，结果（见表 7）。

3 讨论

表7 2014-2016年马布鲁氏菌病抗体检测结果

根据血清学检测结果表明，猪、牛、羊、犬的布鲁氏菌抗体阳性率分别为0.04%、0.73%、0.08%、0.09%，结果表明东莞市，猪、牛、羊、犬都可能存在布鲁氏菌的感染；马清霞等对青岛莱西市布鲁氏菌病血清学调查结果为场户血清流行率为2.55%，个体血清流行率为0.38%；马晓箐等在2012～2014年对新疆牛羊布鲁氏菌抗体血清学调查结果为牛羊抗体阳性率为0.77%～2.87%；林元清在对青海省牛、羊布鲁氏菌病血清学检测抗体阳性率分别为1.23%、0.06%；项夫等在2008～2009年对1200只宠物犬，布鲁氏菌抗体阳性率1.75%；于清磊等通过对2006～2015年甘肃省517172头奶牛样品的血清学检测，抗体阳性率为0.26%。上述结果猪、牛、羊、犬的布鲁氏菌抗体阳性率虽然有所差异，但结果都表明，猪、牛、羊、犬都存在布鲁氏菌病不同程度的感染。

从1994年开始我国布鲁氏菌病疫情开始回升，2000年以后呈迅速增长趋势，卫生部门统计数据显示1994年新发病人数为815人，而到2008年新发病人数约为3万人，2017年新发病例数为41241例。历史上广东省属于布鲁氏菌病低发省份，但近年来报告布病的地市数逐年增多，2017年广东省新发人感染布鲁氏菌病病例数为386例，显示我省布病疫情有进一步扩散趋势。由于布鲁氏菌是细胞内寄生菌，人感染布病后往往难以治愈，因此给人类健康和畜牧业生产带来严重的危害。

对布鲁氏菌病的防控，（1）要加强动物疫情的监测，对病原阳性的家畜要及时淘汰进行无害化处理，对易感家畜进行免疫接种，引种时做好隔离措施。（2）做到非免区要禁止接种疫苗，在非免疫区发现血清抗体阳性的家畜及时淘汰。（3）做好从业人员的防护，实验室人员要做好生物安全防护，为家畜接产的人员要做好防护措施，禁止徒手接产，及时处理流产物并做好消毒措施。（4）要加大宣传力度，让市民意识到布鲁氏菌病的危害性，从业人员做好个人防护，做到群防群控，发现疫情及时上报，及时处理。（5）做好卫生部门和农业部门的联防联控，发现人的感染布鲁氏菌病例，通知农业部门，一起做好疫情的流行病学调查，做好病原的溯源。（6）加强布鲁氏菌病科研力度，摸清布鲁氏菌病的致病机理和传播机制，掌握本地区布鲁氏菌的流行情况和地区分布。