Her—2及Topo—Ⅱα与乳腺癌患者临床病理参数的关系及其在新辅助化疗效果评估中的意义

刘燕 刘淑真 马昊 徐秀萍 孟文娟 高远 于国华

[摘要] 目的 探讨人表皮生长因子受体-2（Her-2）及拓扑异构酶Ⅱα（Topo-Ⅱα）与临床病理参数之间的关系，分析Her-2和Topo-Ⅱα表达在以蒽环类为基础的新辅助化疗中的临床意义。 方法 选择2016年1月～2017年10月就诊于潍坊市人民医院经肿物穿刺后确诊为浸润性乳腺癌的54例患者及其石蜡包埋组织。所有患者均进行了雌激素受体（ER）、孕激素受體（PR）、细胞增殖核抗原Ki-67（KI-67）、Her-2表达水平的检测。采用免疫组化方法检测Topo-Ⅱα的表达，观察不同治疗效果患者乳腺癌组织中Her-2及Topo-Ⅱα表达情况。 结果 54例乳腺癌患者中，48例存在淋巴结转移，Her-2阳性率为88.9%，Topo-Ⅱα的阳性率为87.0%。Her-2的表达与患者年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、腋窝淋巴结转移无关（P > 0.05），与分期及基因亚型有关（r= -0.3、0.3，P < 0.05）。Topo-Ⅱα的表达与年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、腋窝淋巴结转移、分期、基因亚型无关（P > 0.05），Topo-Ⅱα的表达与Her-2的表达呈正相关（r = 0.7，P < 0.05）。Her-2阴性患者客观有效率（ORR）为50.0%；阳性患者ORR为75.0%，差异有统计学意义（P < 0.05）。Topo-Ⅱα阳性患者ORR为78.7%，阴性患者ORR为28.6%，差异有统计学意义（P < 0.05）。Topo-Ⅱα和Her-2均为阳性患者的ORR为80.4%，Topo-Ⅱα和Her-2均为阴性患者ORR为20.0%，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 免疫组化检查Her-2和Topo-Ⅱα对于乳腺癌治疗具有重要指导意义，Topo-Ⅱα阳性可以有效改善蒽环类药物辅助治疗效果。Topo-Ⅱα及Her-2阳性的患者在新辅助化疗中可能有增敏效应。

[关键词] 乳腺癌；Topo-Ⅱα；Her-2；新辅助化疗

[中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）08（b）-0017-05

[Abstract] Objective To investigate the relationship between Her-2 and clinicopathological parameters and the relationship between Topo-Ⅱα and clinicopathological parameters， and analyze the clinical significance of Her-2 and Topo-Ⅱα expression in neoadjuvant chemotherapy based on anthracycline. Methods From January 2016 to October 2017， 54 patients in Weifang People's Hospital diagnosis of breast invasive cancer after underwent tumor puncture and their paraffin-embedded tissues were selected. The expression levels of ER， PR， KI-67， and Her-2 of all patients were detected. The expression of Topo-Ⅱα of all patients were detected by immunohistochemistry， the expression of Her-2 and Topo-Ⅱα in patients with different therapeutic effects was observed. Results Among the 54 patients， 48 patients had lymph node metastasis. The positive rate of Her-2 was 88.9%， and the positive rate of Topo-Ⅱα was 87.0%. Her-2 expression was not associated with age， size， location， axillary lymph node metastasis （P > 0.05）， and was related to stage and genotype （r = -0.3， 0.3， P < 0.05）. The expression of Topo-Ⅱα was not related to age， size， location， axillary lymph node metastasis， stage， or subtype （P > 0.05）. The expression of Topo-Ⅱα was positively correlated with Her-2 （r = 0.7， P < 0.05）. The ORR of Her-2 negative patients was 50.0%； the ORR of Her-2 positive patients was 75.0%， the difference was statistically significant （P < 0.05）. The ORR of Topo-Ⅱα positive patients was 78.7%， and the ORR of Topo-Ⅱα negative patients was 28.6%. The difference was statistically significant （P < 0.05）. The ORR of patients with Topo-Ⅱα and Her-2 positive was 80.4%， and the ORR of patients with Topo-Ⅱα and Her-2 negative was 20.0%. The difference was statistically significant （P < 0.05）. Conclusion Immunohistochemical examination of Her-2 and Topo-Ⅱα has important guiding significance for the treatment of breast cancer. Topo-Ⅱα positive expression can effectively improve the anthracycline-assisted treatment. Topo-Ⅱα and Her-2 may have sensitizing effect in neoadjuvant chemotherapy.

[Key words] Breast cancer； Topo-Ⅱα； Her-2； Neoadjuvant chemotherapy

乳腺癌在全球女性常见的恶性肿瘤中发病率和病死率均居第一位[1]，2011年的全球关于肿瘤统计报告表明，乳腺癌已经成为影响全球女性身体健康及生命的首要因素[2]，在城市妇女中，乳腺癌以每年3%～4%的速度增长[3]，尽管近年来，随着手术、化疗、放疗特别是靶向治疗及免疫治疗技术的发展，乳腺癌的死亡率有所降低，但乳腺癌治疗中的耐药问题仍不能解决。据文献报道，10%～35%的乳腺癌患者对新辅助化疗方案不敏感，治疗后非但肿瘤未得到控制，反而有一定程度的肿瘤进展[4]，因此寻找乳腺癌的敏感指标实现精准治疗刻不容缓。2017年CSCO提出新辅助治疗适应证不仅仅依据分期，而应结合肿瘤分子分型，分期及患者意愿个体化确定[5]。提示病理参数在乳腺癌中发挥着越来越重要的地位。而Topo-Ⅱα及Her-2是目前恶性肿瘤中研究的热点，本研究旨在通过对新辅助化疗后手术切除的乳腺浸润性癌组织中Her-2和Topo-Ⅱα蛋白的表达分析及临床疗效为乳腺癌诊断、预后判断、临床用药提供指导。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2016年1月～2017年10月于潍坊市人民医院就诊的54例乳腺浸润性癌患者及其穿刺术后石蜡包埋组织为研究对象。纳入标准：①女性；②年龄24～75岁，中位年龄45岁；③接受基本的病理诊断，包括雌激素受体、孕激素受体、Her-2表达及KI-67；④未进行放化疗、内分泌、靶向及免疫治疗；⑤有影像学可测量的客观评价病灶。所有患者均完成4个周期化疗，术后若存在危险因素则用CE-T重复4个周期，若用TEC方案则重复2周期。

1.2实验试剂及方法

即用通用型兔抗人Topo-Ⅱα单克隆抗体（I抗）及SP试剂盒均为北京中杉生物技术公司产品。采用免疫组化SP法，所有标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片4 μm厚，烤片1～2 h，pH=8高压修复液抗原修复2.5 min，切片常规用3% H2O2阻断溶液作用20 min，依次加入Ⅰ抗、Ⅱ抗，DAB显色，苏木精复染后封片观察。检测后患者均接受以蒽环类药物为基础的新辅助化疗方案（包括CE-T及TAC方案），CE-T方案：多柔比星（海正辉瑞制药有限公司，批号：17038811）60 mg/m2 d1静脉冲入+环磷酰胺（百特国际有限公司，批號：7F165A）600 mg/m2 d1静脉冲入，序贯多西他赛（商品名：多帕菲，生产商：齐鲁制药有限公司，批号：7L00881050）80～100 mg/m2 d1静脉滴注，21 d为1个周期。TEC方案：多柔比星50 mg/m2 d1静脉冲入+环磷酰胺500 mg/m2 d1静脉冲入+多西他赛75 mg/m2 d1静脉滴注，21 d为1个周期。

1.3 结果判定

Her-2判读采用2014版乳腺癌检测指南[6]，Her-2阳性物质呈清晰棕黄色或黄色，分布于细胞膜。Her-2（+++）：>10%的浸润癌细胞呈现强、完整、均匀的细胞膜染色。Her-2（++）：>10%的浸润癌细胞呈现不完整和/或弱至中等强度的细胞膜染色或≤10%的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色。Her-2（+）：>10%的浸润性细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色。Her-2（-）：无染色或≤10%的浸润癌细胞呈现不完整的微弱的细胞膜染色。Topo-Ⅱα阳性物质呈清晰棕黄色或黄色，分布于胞核内。Topo-Ⅱα（+++）：>10%的浸润癌细胞呈现强、完整、均匀的细胞膜染色。Topo-Ⅱα（++）：>10%的浸润癌细胞呈现不完整和/或弱至中等强度的细胞膜染色或≤10%的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色。Topo-Ⅱα（+）：>10%的浸润性细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色。Topo-Ⅱα（-）：无染色或≤10%的浸润癌细胞呈现不完整的微弱的细胞膜染色。在目镜（10×）和物镜（10×）下粗选5个随机视野，每个视野调转至20和40倍物镜下随机计数100个肿瘤细胞，计算染色阳性的肿瘤细胞所占的百分率，并取各视野计数的平均值作为终值。两位医生核对结果，有争议的切片邀请潍坊市人民医院病理科主任组织集体重新判定。

记录患者的年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、TNM分级、淋巴结转移、雌激素受体、孕激素受体及Her-2、KI-67等资料。患者治疗前血常规、肝、肾功能、心电图正常，行双乳腺B超及乳腺X线数字摄影，Karnof-sky（KPS）评分≥70分。

1.4 疗效判断

采用国际规定的RECIST实体瘤疗效评价标准[7]。完全缓解（CR）所有靶病灶全部消失，淋巴结短轴< 10 mm，并至少持续4周以上。部分缓解（PR）所有靶病灶的最大长径总和减少30%以上，并至少持续4周以上。疾病进展（PD）观察期间与最小值相比较最大长径的总和增加20%，或至少病灶增加5 mm，或出现新的病灶。疾病稳定（SD）既不能满足PR，又不能满足PD的病变。所有病例均有可测量的目标病灶，对患者总体疗效进行评价。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，Topo-Ⅱα及Her-2的表达与病理参数之间的关系采用Spearman等级相关分析，双向无序资料采用Pearson相关性分析；多组间有序分类资料采用Kruskal-Wallis H检验，两组间无序资料采用χ2检验，当T < 1时或n < 40时，采用Fisher的精确检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Topo-Ⅱα、Her-2的表达情况

本组54例患者中Topo-Ⅱα主要表达于细胞核，阳性表达率为87.0%；Her-2主要定位于细胞膜，阳性表达率为88.9%。见图1（封三）。

2.2 乳腺癌组织中Topo-Ⅱα及Her-2的表达与临床病理参数的关系

Her-2的表达与年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、腋窝淋巴结转移无关（P > 0.05），与分期呈负相关（r = -0.3，P < 0.05），与基因亚型呈正相关（r = 0.3，P < 0.05）；Topo-Ⅱα的表达与年龄、肿瘤直径、肿瘤位置、腋窝淋巴结转移、分期、基因亚型无关（P > 0.05）。见表1。

2.3 乳腺癌患者Topo-Ⅱα及Her-2的关系

54例乳腺癌患者中，Topo-Ⅱα和Her-2同为阳性者46例，Topo-Ⅱα和Her-2同为阴性者5例，Topo-Ⅱα与Her-2呈正相关（r = 0.7，P < 0.05）。见表2。

2.4 Topo-Ⅱα及Her-2表达水平与化疗效果的关系

54例患者中，有效39例，有效率为72.2%，无效15例，无效率为27.8%。有效患者中Her-2阳性患者36例，Topo-Ⅱα阳性患者37例，不同化疗效果患者间Her-2和Topo-Ⅱα的表达水平比较，差异均有统计学意义（χ2=8.7、12.7，P < 0.05），Her-2和Topo-Ⅱα不同表达水平之间两两比较：Her-2表达“-”与“+”、“-”与“++”、“+”与“++”、“++”与“+++”患者化疗效果比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）；Her-2表达“-”与“+++”、“+”与“+++”患者化疗效果比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）。Topo-Ⅱα表达“-”与“+”、“+”与“++”、“+”与“+++”、“++”与“+++”患者化疗效果比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）；Topo-Ⅱα表“-”与“++”、“-”与“+++”患者化疗效果比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表3。

2.5 Topo-Ⅱα和Her-2的表达与化疗效果的关系

54例患者中，Topo-Ⅱα和Her-2同为阳性的46例患者中，化疗有效者37例，有效率为80.4%，明显高于其他表达水平的患者（P < 0.05）。见表4。

3 讨论

乳腺癌的治疗已经进入分子生物学水平，众所周知Topo-Ⅱα和Her-2成为研究的热点，Topo-Ⅱα及Her-2基因共同位于17q21，是Her-2的下游基因[8]，其编码的蛋白Topo-Ⅱα是ATP 依赖的对细胞起关键作用的水解酶和合成酶，在DNA复制、染色体分离、染色质浓缩及染色体结构的保持等细胞生物学过程中发挥重要作用[9-10]。Topo-Ⅱα的表达与恶性进展和增殖活性的病理分级一致[11]。Her-2可作为恶性肿瘤的参考指标，与肿瘤的发生发展有关[12-13]，提示Her-2基因与Topo-Ⅱα在肿瘤中的表达，影响肿瘤的发生发展。本研究中Her-2的阳性率为88.9%，Topo-Ⅱα的阳性率为87.0%，与帅萍等[14]及贾新建等[15]的研究相差不大，在对Topo-Ⅱα及Her-2双指标进行研究时有3例Her-2（+）Topo-Ⅱα（-）的患者，但无一例Her-2（-）Topo-Ⅱα（+）的患者，表明乳腺癌组织中Topo-Ⅱα的阳性表达并不局限于Her-2（+）的患者；蒋奕等[16]报道在基因的层面证实了此观点；但许洁等[17]的报道分析可以看出Topo-Ⅱα基因扩增在不存在Her-2/neu基因扩增时极为罕见，这与本研究的结果不一致，这可能与研究的方法存在差异及样本数较少有关。本研究显示Her-2的表达与年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、腋窝淋巴结转移无关，与分期及基因亚型有关，提示Her-2可以作为预后指标，与石毅然等[12]的研究结果相同。Topo-Ⅱα的表达与年龄、肿瘤直径、位置、腋窩淋巴结转移、分期、基因亚型无关，Topo-Ⅱα和Her-2存在正相关性（r = 0.7，P = 0.0），这与李蕊等[18]的研究一致，但既往研究表明不同专家研究结果存在差异，目前未达成一致。

随着医学的进步，乳腺癌新辅助化疗的适应证扩大，新辅助化疗在乳腺癌中给患者带来的获益不容小觑，但也有不小一部分的患者疗效欠佳。本研究结果显示：Her-2阳性的患者ORR为75.0%，Topo-Ⅱα阳性的患者ORR为78.7%，Her-2和Topo-Ⅱα共同阳性的患者ORR为80.4%，国内外研究得出：乳腺癌新辅助化疗后临床有效率为50%～80%，CR率为10%～20%，pCR率为10%～30%[19-21]，这与本研究结果差别不大，通过本研究可以看出，Topo-Ⅱα及Her-2的表达与新辅助化疗效果有关，Her-2、Topo-Ⅱα阳性的患者应用以蒽环类为基础的新辅助化疗方案中疗效差异有统计学意义，Her-2与Topo-Ⅱα双阳性患者有增敏效应，差异有统计学意义（P < 0.05），这与DiLeo、何敏等[22-23]的研究结果一致，然而Yao等[24]认为Her-2阴性乳腺癌对蒽环类药物更有效，而Her-2阳性乳腺癌对紫杉醇化疗更有效。李蕊[18]及Taucher等[25]进行研究显示Her-2蛋白的表达水平与新辅助化疗效果不存在相关性。这可能有与分期、应用的化疗方案、样本数量不足，及种族地区差异有关，因此需要研究者在研究过程中扩大样本量，探索新的方法，严格选择合适人群及寻找新的靶点进行多靶点联合检测进行前瞻性研究，进一步提高特异性。

综上所述，多项临床研究表明Her-2、Topo-Ⅱα高表达乳腺癌被认为对含蒽环类新辅助化疗药物敏感[26-27]，且二者同时阳性表达有增敏效应，此两项指标对选择敏感患者有指导意义，为临床上实现精准治疗提供参考，本研究进一步证实了这一观点，为判断患者进行新辅助化疗临床疗效提供参考。但本研究病例数有限，而且除所选的指标及影响因素外，可能存在其他影响其表达及疗效的因素，且目前这些生物学预测因子在新辅助化疗效果评价中的价值尚存争议，尚未有公认预测新辅助化疗效果有效方法，故还不能完全说明Her-2、Topo-Ⅱα的表达状况和蒽环类类药物化疗效果的关系，为实现精准治疗需要继续扩大样本资料进行多中心前瞻性研究提供更多的循证学依据。

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（收稿日期：2018-01-09 本文编辑：任 念）