应用高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量

庞谢辉

[摘要]目的：分析高效液相色谱法在中药丹参不同部位中丹参酮IIA含量测定中的应用价值。方法：建立反相高效液相色谱测定模式，选用Hypers110DS（C18）色谱柱，以75甲醇/25水为相液流动相比例，分别检测丹参不同部位有效成分丹参酮IIA的含量，并通过实验验证这一方法的有效性、稳定性等。结果：丹参酮IIA面积和浓度呈线性相关，在1.25-21.45yg/ml浓度范围内线性最佳；加样溶液丹参酮IIA回收率平均为99.52%，相对标准偏差值为2.02%；丹参茎、叶未含丹参酮IIA。结论：反相高效液相色谱法，可在短时间内精准获知丹参不同部位丹参酮IIA的含量，为丹参品质鉴定、药用价值和剂量研究工作提供可靠参考资料。

[关键词]高效液相；丹参；丹参酮IIA；色谱柱

丹参是药用价值极高的草本植物，其根部内含丹参酮，常被入药调经疏络、活血祛瘀、消肿镇痛，其中丹参酮IIA是丹参脂溶性成分的代表物质，被广泛用于冠心病防治。但是，丹参入药采购、运输、选品等各个环节均存在危险因素，如部分不法分子试图用伪劣品以假乱真牟取利益，制药工作人员专业水平不达标不能准确鉴别真伪、优劣，严重影响了中医药学的发展。鉴于此，本院开展了丹参不同部位丹参酮IIA含量测定研究，旨在证实高效液相色谱法的应用价值并为丹参药用研究提供参考资料。

1 材料和设备

1.1 实验材料 本实验研究材料包括由中国药品生物制品检定所提供的丹参酮IIA标准品，江阴祥辉化工有限公司提供的色谱纯甲醇，广州致信中药饮片有限公司提供的干燥丹参根（6个月龄）、茎和叶子，实验用超纯水。

1.2 实验设备 本实验研究设备包括高效液相色谱仪（杭州汉泽仪器有限公司，型号为LC-2010HT），紫外检测器（Genesys系列）、色谱柱（Hypersi10DSC18，长度为250mm，内径为4.6mm，填料颗粒直径为Sμm）、电子分析天平（瑞士梅特勒一托利多AB-S系列）、精密可程式干燥箱（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司，BXH-130S）、电热恒温水槽（上海精密仪器仪表有限公司，CU系列）、实验室色谱超生仪（必能信超声上海有限公司，SB2200）。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 建立反相高效液相色谱测定模式，选用Hypersi10DS（C18）色谱柱，以75甲醇/25水为相液流动相比例，将每分钟流速设置为1.2ml，进样量为10μl，柱温控制在30℃，检测波长介于268-270nm之间。

2.2 配制对照品溶液 准备5.5mg丹参酮IIA以及容量为25ml的棕色量瓶，将丹参酮IIA置人瓶内，并持续加入甲醇，直至达到稀释标准，将配制品摇匀；提取摇匀后的溶液2.5ml并将其放置在容量为lOml的棕色量瓶内，持续加入甲醇直至达到稀释标准，摇匀所得即为对照品溶液，将其置入冰箱内保存待检，冰箱温度为4℃。

2.3 配制试验品溶液 准备适量丹参根茎叶并研磨成粉状，称取6.Omg倒入容量为25ml的烧瓶内，混入5ml甲醇，称其重量并记录；在超声仪的辅助下进行提取处理，总时长控制为半小时，待溶液恢复至室温后，再次称其重量，所丢失质量由甲醇补足；充分摇匀溶液，并应用直径为0.22μm的微孔滤膜过滤部分溶液，所得药液倒入容量为25ml的瓶内，持续加入甲醇直至达到定溶标准，此时所得到的溶液即为试验品溶液，将其置于冰箱内保存待检，冰箱温度为4℃。

2.4 测定标准曲线 分别吸取0.25ml、0.50ml、l.OOml、1.25ml、1.50ml对照品溶液，依次滴入五个棕色量瓶（20ml）中，做好标记。持续加入甲醇至稀释标准，以上述色谱条件各自进样3次，将单次进样量设置为10μl，获取色谱图。分析结果可知，丹参酮IIA面积和浓度呈线性相关，在1.25-21.45μg/ml浓度范围内线性最佳。

2.5 测定精密度 吸取lO.Oμl试验品溶液，采用高效液相色谱测定进样6次，测定丹参酮IIA含量，计算丹参酮IIA峰面积相对标准偏差值为1.5%。

2.6 检测稳定性 检测丹参试验品溶液的稳定性，需要在每一小时各进样三次，此时所得丹参酮IIA峰面积相对标准偏差值为2.02%。

表1 加样溶液丹参酮IIA回收率测定

2.7 检测可重复性 将六个月龄的丹参干燥根适量研磨成分粉状，称取lOOmg并平均分为六份，以上述试验品溶液配制方法配制溶液并测定丹参酮IIA含量，计算其相对标准偏差值为2.06%。

2.8 测定加样回收率 将六个月龄的丹参干燥根适量研磨成分粉状，称取6.Omg，均分为六份，以上述试验品溶液配制方法配制溶液，吸取l.Oml同时于每分溶液中各自加入1.Oml对照品储备液，测定加样溶液丹参酮IIA回收率。详细结果见表1所示。

2.9 测定其他样品 以上述试验品溶液制备方法配制丹参茎、叶子粉末溶液样品并进行丹參酮IIA含量测定，结果未测得丹参酮IIA。

3 结论

科学有效的丹参中药材鉴定策略不仅能够为丹参药材质量控制提供支持，还可以为丹参的栽培种植、药用部位扩展、品质鉴定、有效成分剂量研究等提供参考依据，应予以重视。当前，药学工作者测定丹参及其制剂有效成分含量的方法包括毛细管电泳法、薄层扫描法、分光光度法、高效液相色谱法。其中，高效液相色谱法以可操作性强、适用范围广、灵敏度高、结果测定速度快等优势得到了快速发展和应用。曾敬其等人[1]在研究中明确表明，“高效液相色谱法快速、灵敏、便于操作且可靠性高，适用于中药样品中丹参酮类化合物的测定”。另外，一项研究显示[2]，“在流动相为甲醇一水（78：22）、流速为ImL-min-l、检测波长为270nm、柱温为25℃的条件下使用高效液相色谱法对供试品进行测定，其目标峰的峰型良好，分离完全”，为丹参酮ⅡA含量的测定以及丹参药材质量管控工作提供了可靠参考依据。在本次实验研究中，我们应用反相高效液相色谱法分析中药丹参根、茎、叶不同部位丹参酮IIA的含量，结果显示，丹参酮IIA面积和浓度呈线性相关，在1.25-21.45μg/ml浓度范围内线性最佳；加样溶液丹参酮IIA回收率平均为99.52%，相对标准偏差值为2.02%，丹参茎、叶未含丹参酮IIA，再次印证了反相高效液相色谱法的应用价值。

参考文献

[1]曾敬其，李卓碉，赵燕妮，等.高效液相色谱法测定丹参中三种丹参酮含量[J].广州化工，2017，45（08）：113-114+145.

[2]杨新.用高效液相色谱法测定丹参药材中丹参酮ⅡA含量的最优测定条件分析[J].当代医药论丛，2014，12（01）：156-157.