一个遗传性对称性色素异常症家系ADAR1基因突变分析

陈源昊琪 焦亚宁 杨彪 董辉 吴昊 喻楠 葛新红

750004银川，宁夏医科大学临床医学院（陈源昊琪），总医院皮肤科（焦亚宁、杨彪、董辉、喻楠、葛新红）；四川省都江堰市医疗中心（吴昊）

遗传性对称性色素异常症（dyschromatosis symmetrica hereditaria，DSH，MIM127400）是一种少见的单基因遗传性皮肤病，呈常染色体显性遗传，有较高的外显率和较低的发病率［1］。2003年Miyamura等［2］利用基因连锁分析和一代测序技术将其致病基因定位于常染色体1q11⁃1q21上的ADAR1基因。我们应用Sanger测序技术检测一DSH家系ADAR1基因突变情况。

一、临床资料

先证者男，8岁。2岁时双手背、足背开始出现粟粒大小散在色素沉着斑及色素减退斑，不相互融合，对称分布，无自觉症状，皮损随年龄增加而逐渐增多、扩大；5岁时颜面出现雀斑样皮损。日光照射后皮疹颜色加深，冬轻夏重（图1）。皮肤科检查：双手背、足背、颈项部、踝部可见米粒至蚕豆大小褐色沉着斑和色素减退斑，似网状，对称分布，局部皮损未见融合，无皮肤萎缩，颜面及颈部散在雀斑样损害；系统检查未见异常。手背部皮损病理表现：色素沉着处棘层和基底层内黑素细胞增加，真皮上部噬色素细胞增多；白斑处黑素细胞减少甚至消失。

先证者的母亲、外祖母及其他患者均自幼出现上述类似皮损，随年龄增加，双手背、足背出现色素沉着斑和色素减退斑，颈部、颜面部有雀斑样损害。所有患者均无外伤史、特殊色素性药物接触史，否认日光性皮炎史。患者父母非近亲婚配。对该家系4代29例成员中目前有6例患者（男1例，女5例），多于婴幼儿期发病，无隔代遗传现象，遗传方式符合常染色体显性遗传（图2）。

图1 先证者手部（1A）及颈部（1B）皮损

图2 遗传性对称性色素异常症家系图

二、方法

1.DNA提取：签署知情同意书后取该家系8例成员（5例患者、3例非患者）及100例无血缘关系的健康人对照外周血各4～5Ml，乙二胺四乙酸抗凝，-80℃保存。采用北京康为世纪DNA试剂盒提取DNA，标化质量浓度80mg/L。

2.引物设计：根据文献［3］设计，ADAR1基因2号外显子有3对引物，4～5、8～9、10～11、14～15外显子分别共用1对引物，共13对引物，由北京华大基因技术有限公司合成。

3.ADAR1基因PCR扩增：扩增ADAR1基因的15个外显子。PCR体系为50μl，PCR 反应混合试剂（Mix）25μl，上下游引物各1 μl，DNA模板2 μl，ddH2O 21μl，反应条件为：94℃预变性5min；94℃ 35 s，52～ 58℃ 30 s，72℃ 40 s，35个循环；充分延伸10min，4℃保存产物，产物纯化后用ABI 3730XLDNA测序仪进行直接测序。

三、结果

将ADAR1基因的15个外显子序列与GeneBank中ADAR标准序列对比，发现家系中5例患者在2号外显子的第1420位碱基C均突变为T，此突变为无义突变，即c.1420C ＞ T（p.Arg474X）（图3），且均为杂合突变，而家系正常成员和100例健康对照无此突变。

图3 遗传性对称性色素异常症家系成员和健康对照ADAR1基因测序图 家系患者（先证者和其母亲）ADAR1基因1 420位碱基C突变为碱基T，而家系非患者成员和健康对照均无此突变

四、讨论

研究证实，DSH的致病基因为ADAR1，到目前为止，人类基因突变数据库（HGMD）已收录188种突变位点，基因突变方式主要包括错义突变、无义突变、移码突变、剪切位点突变，移码突变及错义突变多见［4］。本研究检测到该家系中患者的ADAR1基因2号外显子末端存在c.1420C＞T（p.Arg474X）无义突变。Miyamura等［2］曾报道该突变，其导致提前产生终止密码子并编码出无效截短蛋白，不完整的缺陷蛋白不能形成同源二聚体，不具有与底物识别和结合功能，可能影响后续重要的功能区域，引起蛋白结合功能域的结构和功能异常，从而导致皮肤色素异常。Zhang等［5］回顾2003—2013年发表的关于DSH家系ADAR1基因突变的文章，发现R474X、R1083C、R1096X和R1155W突变多次在不同的家系中被检测出，推测这4个突变可能是DSH的热点突变。本研究虽然没有发现新的突变，但进一步证实该位点可能为突变热点。本文家系中，在基因型和临床表型之间没有发现明显的相关性，患者都有相同的突变，但皮损部位和程度不尽相同，先证者皮损最重且累及颈部，色素沉着和色素减退差异明显，而先证者祖母和母亲皮损相对较轻，未累及踝部，提示DSH表型可能与其他因素相关，如日照、温度、病毒感染等。此前也有研究发现，该病临床表型与基因型之间无明确相关性［6⁃7］。