银杏叶提取物制备工艺研究

杨京

（上海中医药大学 上海 201203）

银杏叶为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶，味甘、苦、涩，平。归心、肺经。具有活血化瘀，通络止痛，敛肺平喘，化浊降脂之功效[1]。银杏叶提取物为银杏叶经加工制成的提取物，对心血管、神经、呼吸、免疫等多系统疾病均有效[2-3]。因而对银杏叶提取物的制备工艺进行研究具有重要意义。

1.仪器与材料

1.1 仪器

高效液相色谱仪（Aligent公司）；旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；电子分析天平（赛多利斯）。

1.2 材料

银杏叶（上海康桥中药饮片有限公司）；无水乙醇、甲醇、盐酸、磷酸均购自国药集团化学试剂有限公司

2.实验方法与结果

2.1 银杏叶提取物的制备

精确称取10g 银杏叶细粉于圆底烧瓶中，加入乙醇加热回流提取，合并提取液，过滤，回收乙醇，并浓缩至适量，精密量取1ml置于100ml容量瓶中，甲醇定容。

2.2 银杏叶提取物中总黄酮醇苷含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Dikma Diamonsil Plus C18（5μm，4.6mm×250mm），流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（53∶47），检测波长：360nm，柱温：30℃。

2.2.2 供试品溶液的制备 取银杏叶提取物0.1g，精密称定，加甲醇-25%盐酸溶液（4∶1）的混合溶液25ml，置水浴中加热回流30min，迅速冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 单因素考察试验

2.3.1 乙醇浓度对总黄酮醇苷提取率的影响

精确称取10g 银杏叶细粉，分别加入8倍量的不同浓度的乙醇（20%、40%、60%、80%）加热回流提取3次，考察不同浓度乙醇对总黄酮醇苷提取率的影响。结果表明，随着乙醇浓度升高，总黄酮醇苷的提取率逐渐升高，当乙醇浓度升至60%之后，总黄酮醇苷的提取率升至85.2%±12.1%，并且提取率趋于稳定。当乙醇浓度升至80%，提取率为87.3%±9.7%。因此，将选择乙醇浓度为60%、70%、80%进行正交试验，结果见图1。

图1 乙醇浓度对银杏叶提取物总黄酮醇提取率的影响

2.3.2 提取次数对总黄酮醇苷提取率的影响

精确称取10g银杏叶细粉，分别加入8倍量的60%乙醇加热回流提取，考察不同提取次数（1次、2次、3次、4次）对总黄酮醇苷提取率的影响。结果显示采用60%乙醇提取银杏叶总黄酮醇苷，提取3次以上，提取率基本趋于稳定，结果见图2。为了节省时间，特选择提取次数为3次。

图2 不同提取次数对银杏叶提取物总黄酮醇提取率的影响

2.4 正交试验

单因素考察结果显示，影响银杏叶提取物收率的主要因素有乙醇浓度、溶媒用量、提取时间，对以上三个因素各选三个水平，利用L9（34）表进行正交试验，见表1。

表1 因素水平表

由方差分析结果显示，银杏叶乙醇回流过程中，乙醇浓度（A）、乙醇体积（B）、回流时间（C）三因素中的主要因素是乙醇浓度（A），最佳提取工艺为A2B2C2，见表2～3。即称取银杏叶药材粉加入8倍量的70%乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液，过滤，回收乙醇，真空干燥，即得。

表2 正交实验设计表及结果

表3 评价指标正交试验方差分析结果

2.5 银杏叶乙醇回流工艺条件验证

按照正交试验优选的实验条件进行提取，平行三次，测定回流液中总黄酮醇苷的提取率，测定结果见表4。结论：正交实验优选的乙醇回流工艺稳定可靠，可用于银杏叶提取物的制备。

表4 正交试验验证

3.结论

本研究通过单因素试验和正交试验，确定了银杏叶提取物制备的最佳工艺条件为：8倍量的70%乙醇回流提取3次，每次2h。