猪瘟疫苗免疫抗体检测与分析

段正赢，周志忠，周丹娜，杨克礼，郭 锐，刘 威，刘泽文，袁芳艳，焦祖武，田永祥

（1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北 武汉 430064；2.湖北省洪湖市农业综合执法大队，湖北 洪湖 433200）

猪瘟（Classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起猪的一种高度接触性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的传染病[1]，我国将猪瘟列入一类动物疫病病种，是目前危害我国养猪业健康发展的主要疫病，也是我国重点防范的主要疫病。1956年我国研制出了猪瘟兔化弱毒疫苗，经免疫的猪具有持久免疫能力，也减少了被其他病毒感染的概率，该疫苗被认为是最具有安全性和免疫原性最好的疫苗[2]。至今该疫苗仍被许多国家应用于猪瘟病毒的防控。

目前，规模猪场在猪瘟疫苗高密度免疫下，猪瘟的发生与流行已逐步减少，但“非典型猪瘟”以及疫苗免疫失败现象仍时有发生。对猪群进行抗体水平监测，是我们评价免疫效果及优化免疫程序的重要手段。为了使猪群保持较高而整齐的猪瘟抗体水平，保证猪瘟疫苗免疫确实有效，2017年对湖北洪湖某猪场的猪瘟疫苗免疫抗体水平进行了检测与分析，为猪场猪瘟疫苗免疫效果的评价与免疫程序的优化提供参考与指导。

1 材料与方法

1.1 血清

该场存栏母猪610头，种公猪13头。该猪场猪瘟疫苗免疫程序：种猪一年接种4次，免疫剂量为4头份/头；商品猪21日龄进行首免，60日龄进行二免，免疫剂量为2头份/头。根据该猪场养殖数量与猪瘟疫苗免疫现状，分别抽检后备母猪血清样品20份，妊娠母猪血清样品30份，哺乳母猪血清样品50份，种公猪血清样品13份，21日龄（首免前）哺乳仔猪血清样品100份，42日龄（首免后21 d）保育猪血清样品100份，81日龄（二免后21 d）肥育猪血清样品100份，共计抽检血清样品413份。血液样品采集时间为2017年10月，血样在实验室分离血清后，置-20℃冰箱中保存，备用。

1.2 检测试剂

猪瘟抗体ELISA检测试剂盒为IDEXX公司生产，其余试剂、仪器及耗材均由农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室提供。

1.3 方法

采用IDEXX公司生产的猪瘟抗体ELISA检测试剂盒对所有血清样品进行抗体检测，检测程序和判断标准严格参照试剂盒使用说明进行操作。样品猪瘟抗体判定标准：阻断率≥40%为阳性，阻断率≤30%为阴性，30%＜阻断率＜40%为可疑。并计算和分析抗体的离散度、平均值。

2 结果

猪瘟抗体检测样品共计413份，其中种猪群检测样品113份，商品猪群300份。种公猪的抗体阳性率为100%，离散度为13%，平均值为83，表明抗体水平高且整齐度较好；后备母猪、妊娠母猪及哺乳母猪的抗体阳性率分别为100%、97%、98%，离散度分别为23%、21%、17%，平均值分别为 78、79、81，显示抗体水平均较高且较整齐。哺乳仔猪、保育猪及肥育猪的抗体阳性率分别为67%、54%、93%，离散度分别为39%、45%、24%，平均值分别为 53、49、67，可以看出，哺乳仔猪和保育猪抗体水平的整齐度和效价均不高，肥育猪抗体水平较整齐且较高。结果详见表1。

表1 猪瘟抗体检测

3 小结与讨论

目前，疫苗免疫接种仍是控制猪瘟的最重要手段，而猪瘟疫苗免疫抗体水平检测是评价猪群猪瘟疫苗免疫效果的主要方法，对指导猪场制定科学的免疫程序至关重要[3]。本次检测的猪场种猪群的抗体平均值均在78以上，抗体阳性率均达97%以上，离散度均在23%以下，显示抗体效价较高，整齐度较好，猪瘟疫苗免疫效果较好，免疫程序合理科学。

但在商品猪群的猪瘟抗体检测中，哺乳仔猪群首免前母源抗体阳性率达67%，抗体平均值为53，表明此时母源抗体尚维持在较高水平，而选择此时进行猪瘟疫苗的首次免疫，疫苗中的抗原将被较高水平的母源抗体所中和，疫苗抗原刺激机体产生的免疫应答反应十分有限，导致首次免疫后猪瘟抗体水平提高缓慢，至首免后21 d的保育猪群免疫抗体效价平均值为49，离散度达45%，抗体阳性率仅为54%，显示抗体滴度较低，整齐度较差。而二免后21 d的肥育猪群，免疫抗体阳性率达93%，抗体平均值为67，离散度为24%，显示抗体水平较高且整齐度较好。表明该猪场首免时间应调整，应在连续监测母源抗体水平变化后进行优化，调整其免疫程序，而二免的免疫时机掌握较准确，疫苗免疫效果较理想。

因此，抗体水平检测对调整优化免疫程序、保证疫苗免疫效果至关重要。通过此次检测，也表明我国的猪瘟疫苗免疫效果确实，在猪瘟的防控中有不可替代的作用。按照国家《动物疫病防控中长期规划（2012—2020年）》，猪瘟是列入净化的病种之一，目前我国已研发出标记疫苗及配套的检测试剂盒，猪瘟的防控和净化又有了更为有力的工作手段。