分析乙肝病毒DNA病毒载量与各型乙型肝炎血清标志物之间的关系

魏颖

沛县人民医院检验科，江苏徐州 221600

我国是乙型肝炎病毒携带人口大国，乙型病毒性肝炎是我国发病率极高的慢性传染病，其患者免疫功能变差迁延难愈导致病情恶化使肝脏长期受累发展为肝硬化，以至于患者生活受到严重干扰[1]。世界卫生组织报道全球乙型病炎病毒感染率极高，慢性乙型肝炎是乙型肝炎病毒造成常见且严重一类疾病，我国作为乙型肝炎病毒携带人口大国之一，乙型肝炎病毒感染给我国社会造成了极大的不良影响，给患者家庭以及社会带来了沉重负担[2]。HBV-DNA测定从分子生物学水平进行观察，可准确得到病毒存在以及复制的相关信息。化学发光试验依靠检查血清标志物可得到不同免疫模式在病毒感染后出现的免疫应答。为提高诊断准确率，该次研究针对2017年2月—2018年2月该院收治的82例乙肝患者采取HBV-DNA测定以及检查血清标志物的方式进行诊断，旨在通过对乙肝病毒DNA病毒载量与各型乙型肝炎血清标志物之间的关系进行观察，以此了解化学发光法以及荧光定量PCR法测定HBV的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院收治的82例慢性乙型肝炎患者。82例患者均知情并同意参加该研究且获伦理委员批准。患者年龄区间 17.8～70.3 岁，平均年龄（62.32±12.24）岁，男49例，女33例。

1.2 方法

选取 HBV 血清标志物 HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAb以及HBeAg试剂。利用化学发光法测定82例患者 HBV 血清标志物 HBsAg、HBeAg、HBeAb、HB-sAb、HBcAb等，使用仪器为雅培i2000SR。乙型肝炎病毒DNA水平采用荧光定量PCR方法进行检测，乙肝DNA采用的定量仪器为厦门安普利公司提供的9820型PCR扩增仪。

1.3 诊断指标

乙肝标志物 ：HBsAg＜0.05 IU/mL 为 阴性；HB-sAb＜10.00 mIU/mL 为阴性；HbeAg＜1.000 S/CO 为阴性；HBeAb＜1.00 S/CO 为阴性；HBcAb＜1.000 S/CO 为阴性，反之判断为阳性。 HBV核酸荧光PCR检测＜5×102U/mL低于最低检出限诊断为阴性。反之则判断为阳性。

2 结果

结果表明，82例患者血清标志物为大多呈Hbs Ag（+ ）、HBsAb （- ）、HBeAb （+ ）、HBeAg（+ ）、HBcAb（+），HBsAg阳性总例数82例，HBV阳性总例数为42例，阳性检出率为52.50%。乙肝免疫标志物模式与HBV-DNA比率具体见表1。

表1 乙肝免疫标志物模式以及HBV-DNA阳性例数以及比率

3 讨论

乙型肝炎病毒感染的诊断主要依据包括患者的临床症状、既往病史、体征、天门冬酸氨氯基转移酶（Aspartate aminotransferase；AST）、 丙氨酸基转移酶（Alanine transferase；ALT）等生化指标以及分子生物学指标等。此外乙肝两对半在诊断乙型肝炎病毒感染发挥了重要作用，是目前乙肝诊断中具有检测简便、准确率高、耗时短等诸多优点的最常用方法。其主要包括了血清学标志物检测指标 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb[3-4]。 HBV-DNA 载体含量检测是判断HBV病毒复制的准确率最高、结果最为可靠以及最直接的方法。临床通过检测HBV-DNA或者HBsAg是否呈阳性以此判断是否急性肝炎、慢性肝炎以及无症状携带者。

诸多临床研究结果表明HBV-DNA检测阳性较为准确，该次研究采用荧光定量PCR检测HBV-DNA以此判断HBV病毒载体含量的多少，免疫模式1,3,5的阳性率为91.67%。与李仁杰等[5]研究中此模式阳性率90.9%的结果较为接近，证实阳性结果较为准确，可得出HBsAg是否呈阳性是判断乙型肝炎病毒感染的主要病原学诊断指标。该次研究通过对82例患者进行检测，选用了近年来新出现的一种较之酶联免疫吸附试验更高敏感性与特异性的化学发光法，其中部分患者临床检测显示HBsAg阳性而HBV-DNA病毒载体检测为阴性，这种情况可能与FQ-PCR扩增只能通过血中游离的HBV-DNA病毒载体进行判断有关。临床研究中表明HBV感染后病毒整合到肝细胞DNA染色体上，然后会同肝细胞的分裂、复制一同表达，此种情况下FQ-PCR检测结果可呈阴性而利用酶联免疫试验法可检测出阳性。在恢复期或者既往乙肝病毒感染病史的患者在通过药物等治疗方式清除乙肝病毒后抗原、抗体仍处于阳性，但血清中无法通过荧光定量扩增检测到，而血清中无法通过FQ-PCR扩增检测到HBV颗粒存在，所以检测结果为阴性[6-10]。此外出现乙肝病毒突变的情况，此种情况下不能与荧光探针结合，所以检测结果呈阴性。

此外该次研究中有少数乙肝患者被诊断为HB-sAg阴性，此种情况发生的因素可能与急性乙肝发生时出现抗-HBs消失的窗口期。临床无法检测到抗-HBs时或者仅出现低水平的感染可能会影响HBsAg方法的灵敏性。此外重叠感染同样会影响HBsAg检测，其具体机制是患者HBeAg以及HBsAb的感染亚型不同，相同或相继被不同的乙肝病毒亚型感染会出现HBsAb中和同一血清病毒的情况。HBV的s区变异进而导致HBsAg的不表达，由于受检人员者是感染乙肝的高危人群，为保证患者的安全性性，应根据医疗条件为患者进行HBV-DNA以及血清标志物两种检测方法，提高临床诊断准确性。

该次研究结果表明1，3，5阳性组以及1，3阳性组HBV-DNA检出率达到91.67%以及更高，其中1，3组中的HBV-DNA阳性含量大于105U/mL，说明HBeAg阳性患者具有较高传染性，可以将HBeAg阳性患者单独分组进重点治疗。HBeAg是一种可准确反应体内HBV复制以及增殖水平常用的生化免疫学指标。HBeAg具有灵敏度高以及特异性好的优点。HBeAg通常用于判断是否感染恢复、HBV复制能力是否减弱以及HBV传染性强弱。

该次研究中2，4，5阳性组HBV-DNA检出率较低，仅有37.50%，说明患者体内虽然存在抗体在杀伤HBV，但部分患者体内仍存在HBV-DNA复制的现象，利用酶联免疫测试法所得到的阳性率会更低，说明未产生免疫应答以及出现免疫耐受的情况往往无法有效检测，其多是由于低浓度的HBsAg漏检以及免疫功能低下引起的。

综上所述，利用乙肝患者的血清标志物指标和HBV-DNA检测会更有利于判断患者的病情进展，可结合患者病毒载量与感染的免疫标志物模式为临床制定治疗方案提供参考依据，也为临床研究具有高耐药屏障和多作用靶点的药品提供理论依据，有利于临床以合理的治疗方式改善患者肝功能病理改变。