投喂南极磷虾鲜肉对凡纳滨对虾生长、蜕皮及代谢水平的影响

李忠帅 王腾 单洪伟 马甡

摘 要：为探究南极磷虾（Euphausia superba）作为饵料生物在凡纳滨对虾养殖中对其生长、蜕皮及代谢水平的影响，进行了间隔投喂试验，设置对照组（全程投喂配合饲料）、间4组（1天磷虾鲜肉和4天配合饲料间隔投喂）、间2组（1天磷虾鲜肉和2天配合饲料间隔投喂）、间1组（1天磷虾鲜肉和1天配合饲料间隔投喂）及全虾组（全程投喂磷虾鲜肉），养殖试验持续36 d。结果表明，间1组、间2组和间4组对虾体长（Lt）、体重（Wt）、特定生长率（SGR）、相对增重率（WGR）均高于对照组，但都与对照组无显著性差异（P>0.05），间4组和间2组对虾成活率（SR）较对照组分别升高5%和10%，全虾组对虾Lt、Wt、SGR、WGR、SR均显著低于对照组（P<0.05）。投喂磷虾鲜肉能够刺激对虾的蜕皮，其中，投喂磷虾鲜肉各组对虾平均日蜕皮率（ADMR）均高于对照组，在对虾日蜕皮率（DMR）≥10%天数上，全虾组>间1组>间4组>对照组>间2组。间1组和全虾组对虾血淋巴中胆固醇（T-CHO）水平显著高于对照组（P<0.05），而全虾组葡萄糖（GLU）水平显著低于对照组（P<0.05）。投喂磷虾鲜肉影响了对虾肝胰腺中代谢相关酶活力，其中，间2组和间1组对虾肝胰腺中磷酸果糖激酶（PFK）活力显著高于对照组（P<0.05），全虾组对虾肝胰腺中丙酮酸激酶（PK）活力显著高于对照组（P<0.05），间1组、间2组和全虾组对虾肝胰腺中乳酸脱氢酶（LDH）活力和琥珀酸脱氢酶（SDH）活力均显著低于对照组（P<0.05）。综合以上结果，适量投喂南极磷虾鲜肉能够一定程度提高凡纳滨对虾的生长、蜕皮，影响对虾代谢水平。此外，南极磷虾鲜肉不宜投喂过多，以1天磷虾鲜肉和4天配合饲料间隔投喂为宜。

关键词：南极磷虾（Euphausia superba）；生长；蜕皮；代谢水平

饵料生物在对虾养殖中一直发挥着重要作用，相比于配合饲料，具有营养高、来源广、成本低等优点。近几年的研究发现，投喂饵料生物利于对虾生长，具体表现在促进虾苗的变态发育[1]、保证对虾的正常蜕皮[2]、提高虾体的免疫能力[3]等方面。另外，由于饲料中蛋白源的供应主要来自鱼粉，而水产行业对于鱼粉的需求日渐增加，导致鱼粉价格连年上涨，动物性蛋白源的不足已经成为了制约水产饲料发展的一大障碍[4]。饵料生物蛋白含量较高，开发饵料生物资源对水产养殖业的发展有着重要的意义。

南极磷虾（Euphausia superba）主要生活在南极洲水域，储量丰富，生物量约为6.5亿～10亿t，是地球上生物量最大的多细胞生物之一。由于其含有丰富的营养物质，因此被称为“人类未来的动物蛋白库”。研究发现南极磷虾体内含有大量的不饱和脂肪酸和水产动物所需的必需氨基酸[5]。另外，南极磷虾特殊的生长环境使其基本不携带任何病原，这成为其推广应用的重要优势。

近年来，南极磷虾在水产养殖上的应用研究较多，但主要集中在以磷虾粉替代蛋白[6]，且研究对象多以鱼类为主。本文以南极磷虾鲜肉为饵料间隔投喂凡纳滨对虾，研究其对对虾生长、蜕皮和代谢水平的影响，旨在为探讨南极磷虾鲜肉在对虾养殖中的應用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验饲料 本试验使用的南极磷虾购自中水集团远洋股份有限公司，其规格为体长2.45±0.13 cm，使用前去头洗净，虾肉撕碎用于投喂。配合饲料为天津通威饲料有限公司购买的对虾配合饲料8831。

1.1.2 试验用虾 本试验所用的凡纳滨对虾购买自山东省乳市养殖场，对虾生长良好，体色正常，其规格为体长6.55±0.23 cm，体重5.88±0.14 g，购回后驯养一周。

1.2 试验条件

所用水族箱规格为50 cm×35 cm×35 cm，水体积约为50 L，为室内自动循环水养殖系统。

1.3 试验设计与管理

本试验设置对照组（全程投喂配合饲料）、间4组（1天磷虾鲜肉和4天配合饲料间隔投喂）、间2组（1天磷虾鲜肉和2天配合饲料间隔投喂）、间1组（1天磷虾鲜肉和1天配合饲料间隔投喂）、全虾组（全程投喂磷虾鲜肉），每个组设置4个平行，每个平行15尾虾。

试验期间每天投喂2餐，过量投喂，时间分别为8：00和20：00，根据水质情况适当换水，水温25±0.5 ℃，盐度（31±0.5）‰，pH 8.0±0.1，进行为期36 d的养殖试验。

1.4 样品采集与分析

1.4.1 样品采集 每天记录各组对虾死亡数和蜕皮数（以头胸甲数为准），饲养试验结束后测量数据包括体长、体重，取样部位为对虾的肝胰腺和血淋巴。具体操作如下：在每个处理组中随机取样3尾虾，血淋巴取样为在冰上用一次性注射器取腹血窦加抗凝剂取血，4 000 r/min离心10 min，取上清液置于-70 ℃保存待测。肝胰腺取样为用镊子摘取对虾肝胰腺，取样后迅速经液氮冷冻，立即置于-70 ℃保存待测。

1.4.2 生长指标测定 生长指标按照以下公式进行计算：

相对增重率（Weight gain rate）：WGR（%）=[（Wt-W0）/W0]×100

特定生长率（Specific growth rate）：SGR（% d-1）=[（lnWt-lnW0）/T]×100

成活率（Survival rate）：SR（%）=Nt/N0×100

式中，W0表示初始质量（g）；Wt表示终末质量（g）；T表示养殖天数；N0表示初始数量；Nt表示终末数量。

1.4.3 蜕皮数据分析 蜕皮指标按照以下公式进行计算：

日蜕皮率（Daily moulting rate）：DMR（%）=Vi/Ni

平均日蜕皮率（Average daily moulting rate）：ADMR（%）=1T∑Ti=1ViNi

式中，Vi表示第i天蜕皮数；Ni表示第i天对虾数量；T表示养殖天数。

1.4.4 生化指标测定 血淋巴总蛋白（TP）采用考马斯亮蓝法，甘油三酯（TG）采用GPO-PAP酶法，T-CHO采用COD-PAP法，葡萄糖（GLU）采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法进行测定，测定均使用购自南京建成生物工程研究所的试剂盒完成。

1.4.5 代谢酶测定 对虾肝胰腺中测定指标包括HK（己糖激酶）、磷酸果糖激酶（PFK）、丙酮酸激酶（PK）、乳酸脱氢酶（LDH）、琥珀酸脱氢酶（SDH），以上指标的测定均使用购自南京建成生物工程研究所的试剂盒完成。

1.5 数据统计与分析

试验数据以平均数±标准差（X±SD）表示，并用SPSS 25.0对试验数据进行单因素方差分析（ANOVA），通过Duncan检测法进行组间差异显著性分析，P<0.05为显著差异。

2 结果与分析

2.1 投喂磷虾鲜肉对凡纳滨对虾生长及成活率的影响

由表1可知，投喂磷虾鲜肉后全虾组对虾Lt、Wt、SGR、WGR、SR均显著低于对照组（P<0.05）。间1组、间2组和间4组Lt、Wt、SGR、WGR均高于对照组，间4组和间2组SR高于对照组，但均无显著性差异（P>0.05）。

2.2 投喂磷虾鲜肉对凡纳滨对虾蜕皮的影响

由图1和图2可知，随着磷虾鲜肉投喂量的增加，各组凡纳滨对虾ADMR呈升高趋势。在DMR≥10%天数上，全虾组>间1组>对照组>间2组>间4组，且全虾组表现出一定的蜕皮同步性，蜕皮周期在6～7 d。

2.3 投喂磷虾鲜肉对凡纳滨对虾血淋巴生化指标的影响

由图1可知，投喂磷虾鲜肉对凡纳滨对虾血淋巴TP水平无显著性差异，全虾组GLU水平显著低于其余组（P<0.05）。随着磷虾鲜肉投喂比例的增加，各组对虾血淋巴T-CHO水平呈上升的趋势，且间1组和全虾组显著高于对照组（P<0.05）。各组对虾血淋巴中TG水平存在差异，间1 组和全虾组血淋巴TG水平显著低于对照组（P<0.05）。

圖3 各组凡纳滨对虾血淋巴中总蛋白（TP，A）、葡萄糖（GLU，B）、胆固醇（T-CHO，C）、甘油三酯（TG，D）的变化，不同字母表示具有显著性差异（P<0.05）

2.4 投喂磷虾鲜肉对凡纳滨对虾肝胰腺中代谢酶的影响

由图4可知，投喂磷虾鲜肉后对照组、间4组和全虾组对虾肝胰腺中HK活力显著高于间2组和间1组（P<0.05），间4组HK活力显著低于对照组和全虾组（P<0.05）。对照组和间4组对虾肝胰腺中PFK活力均显著低于间2组和间1组（P<0.05）。全虾组对虾肝胰腺中PK活力显著高于其余各组（P<0.05）。投喂磷虾鲜肉对凡纳滨对虾肝胰腺中LDH和SDH活力影响显著，间2组、间1组和全虾组对虾肝胰腺中LDH活力均显著低于对照组和间4组（P<0.05），而对照组与间4组之间无显著性差异（P>0.05）。间4组、间2组、间1组和全虾组对虾肝胰腺中SDH活力均显著低于对照组（P<0.05）。3 讨论

3.1 投喂磷虾鲜肉对凡纳滨对虾生长及成活率的影响

南极磷虾鲜肉营养物质丰富，富含对虾生长所需的多种必需氨基酸和必需脂肪酸[1]。 Nunes等[6]研究发现，南极磷虾粉可以替代凡纳滨对虾饲料中的鱼粉并提高对虾的成活率和生长性能。在本试验中，随着磷虾鲜肉投喂比例的增加，对虾SR、SGR和WGR得到一定程度的提高，但效果不显著。常青等[7]发现间隔三天投喂一次南极磷虾粉组的稚鱼，其特定生长率高于对照组和间隔一天投喂磷虾粉组，且间隔一天投喂磷虾粉组稚鱼成活率会显著降低。本试验也发现全虾组的对虾成活率和生长性能显著低于对照组，可见过量投喂单一的磷虾鲜肉会造成对虾成活率与生长性能的下降，这与刘石林（2006）[8]使用单一沙蚕投喂凡纳滨对虾会影响对虾生长的研究结果相似。

3.2 投喂磷虾鲜肉对凡纳滨对虾蜕皮的影响

甲壳动物的生长是非连续性的，其中蜕皮生长是对虾生长的主要方式，蜕皮指标的高低可以反映对虾的生长状况[9]。好的蜕皮同步性可以有效减少养殖中因为蜕皮导致对虾状态不一、以强欺弱的残食现象，能提高对虾成活率。本试验中，从ADMR来看，投喂磷虾鲜肉能够有效促进凡纳滨对虾的蜕皮，这一点在全虾组较对照组更加显著。从各组的DMR可以发现全虾组和间1组促进蜕皮效果明显。可见投喂磷虾鲜肉促进蜕皮的作用突出，对虾蜕皮率与投喂磷虾鲜肉量呈正相关，在日常对虾养殖中，可在临近蜕皮高峰时进行营养强化，以促进对虾蜕皮。另有研究表明甲壳动物不具备合成胆固醇的能力，需要从摄入的食物中获得生长所需的胆固醇，胆固醇在体内经过一系列转化以促进其蜕皮[10]。杨建梅等[11]研究发现卵磷脂对维持细胞结构和功能以及动物的生长和分化具有重要作用。结合血淋巴T-CHO含量以及磷虾营养成分推测，磷虾鲜肉内丰富的T-CHO和磷脂可能是促进对虾蜕皮的原因之一。

3.3 投喂磷虾鲜肉对凡纳滨对虾血淋巴生化指标的影响

对虾在正常生理状态下能够维持各项生理指标的动态平衡，而血淋巴组成成分的变化在一定程度上能够反映对虾的健康状态[11]。研究表明，血淋巴中TG与T-CHO的含量变化可以反映出动物体内脂类代谢水平，TG是动物体内储存能量的主要形式，T-CHO是很多甲壳动物的必需营养素[12]，是甲壳动物合成蜕皮激素的主要物质[13]。试验结果表明对虾血淋巴中T-CHO含量会随着磷虾鲜肉投喂量的增加显著升高，而过量投喂磷虾鲜肉会显著降低对虾TG含量，说明投喂磷虾鲜肉影响了对虾的脂类代谢，对虾能够从南极磷虾鲜肉中吸收胆固醇，用以加快蜕皮，同时也会造成对虾TG分解供能加快。另外，本试验发现投喂磷虾鲜肉会降低对虾GLU含量，尤其是全虾组对虾GLU含量显著低于对照组，可见投喂磷虾鲜肉还会影响对虾GLU代谢水平。

3.4 投喂磷虾鲜肉对凡纳滨对虾肝胰腺代谢酶的影响

机体内直接供能物质是葡萄糖，糖酵解途径是葡萄糖分解代谢过程的第一步，HK、PFK、PK是糖酵解过程的关键酶[14]，其活力的变化不仅对维持机体血糖水平具有重要作用，而且直接影响着整个糖代谢途径的速度和方向。本试验发现，投喂磷虾鲜肉各组PFK和PK活力均高于对照组，且间2组和间1组的PFK活力显著高于对照组，全虾组的PK活力显著高于对照组，全虾组HK活力较对照组升高。可见，投喂磷虾鲜肉能够显著提高凡纳滨对虾糖酵解酶活力，促进糖酵解途径。LDH可催化丙酮酸和乳酸之间的相互转化[15]，它是机体无氧代谢的标志酶，其活力大小在一定程度上反应了无氧代谢能力的高低。本研究发现，全虾组、间1组、间2组对虾LDH活力显著低于对照组，可见过量投喂磷虾鲜肉会抑制无氧呼吸过程。SDH是柠檬酸循环中唯一掺入线粒体内膜的酶，其活力可在一定程度上反映机体有氧代谢的水平[16]。本试验发现，各试验组的对虾SDH活力均显著低于对照组，可见投喂磷虾鲜肉同样会抑制有氧呼吸。因此，过量投喂磷虾鲜肉会降低对虾的整体糖代谢水平。

4 总结

投喂南极磷虾鲜肉能够影响凡纳滨对虾生长、蜕皮和能量代谢水平。表现在一定的时间间隔投喂磷虾鲜肉会不同程度地促进对虾生长、提高对虾成活率、加快对虾的蜕皮频率、影响对虾血淋巴生化物质含量并会抑制糖类的无氧及有氧分解代谢水平。综合试验结果，建议以1天磷虾鲜肉和4天配合饲料间隔投喂为宜。

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