安康市部分桑树栽培品种桑叶1—脱氧野尻霉素含量的测定

禚苏 王中兴 韩敏

摘要：为促进蚕桑产业的发展，促进桑叶产品的开发，以安康地区具有代表性的24个桑树栽培品种的桑叶为原材料，运用反相高效液相色潽法测定各品种春季桑叶中1-脱氧野尻霉素（DNJ）的含量。结果表明，安康地区桑树品种中桑叶DNJ含量具有显著差异，其中旬阳青皮荆桑中的含量最高为0.381 5%，显著高于其他品种；大坪2号变异、恒2号、安选1号、流水青桑、当地胡桑、沈2号、大坪桐桑、箔篮桑、前进桑含量较高；而光明桑、荆桑12号等品种含量较低。旬阳青皮荆桑DNJ含量最高，可以作为DNJ提取的桑树品种。

關键词：1-脱氧野尻霉素；桑叶；反相高效液相色潽法；安康市

中图分类号：S888.2；S886.9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2018）11-0093-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.11.023

Abstract： The contents of 1-deoxynojirimycin （DNJ） in spring leaves from 24 representative cultivars of mulberry in Ankang city were determinated using reversed-phase high performance liquid for promoting the development of sericulture industry and the development of mulberry products. The results indicate that the contents of DNJ in different mulberry cultivars have significant differences. The content of DNJ in leaves of Xunyangqingjing is 0.3815%，it is significantly higher than the other varieties. The contents of DNJ in leaves of Daping No. 2 variation，Heng No. 2，Anxuan No. 1， Liushuiqingsang， Local husang，Shen No. 2，Dapingtongsang，Bolansang， Qianjinsang are relatively high； the contents of DNJ in leaves of Guangmingsang，Jingsang are relatively low. The variety of Xunyangqingjing could be as material for exaction DNJ because of the highest content of DNJ.

Key words： 1-deoxynojirimycin； mulberry leaf； reversed-phase high performance liquid chromatography； Ankang city

1-脱氧野尻霉素（DNJ）是一种极性化合物，研究证实它对α-葡萄糖苷酶具有抑制作用[1-3]，对血糖、甘油三酯、胆固醇等多项生理代谢指标具有良好的调节作用[4-8]，可以缓解肝脏的伤害[9，10]，降低胰岛素抵抗[11]，保护血管[12，13]，治疗肥胖症[14，15]，抗病毒[16-18]，抑制肿瘤[19-22]，在医疗保健方面有着重大的应用价值。

DNJ在自然界分布广泛，部分植物、微生物和昆虫体内都存在DNJ，而桑树是已知植物中DNJ含量最高的品种。研究表明，不同桑树品种间DNJ含量具有显著差异[23]，确定高含量DNJ桑树品种，对于DNJ的应用具有重大的现实意义。陕西省安康市座落在秦岭和巴山之间，海拔跨度大，物种丰富，蚕桑产业在该地具有悠久的历史，桑树品种丰富[24-26]，桑树品种选育具有良好的物质和历史基础。本研究运用反相高效液相色潽法对安康市24个典型桑树品种的桑叶进行DNJ含量测定，确定适合DNJ生产的桑树品种，对于蚕桑产业的发展具有重要意义，为DNJ高含量桑树品种的选育奠定了基础。

1 材料与方法

1.1 材料

供试的24个桑树品种桑叶采自安康学院蚕桑研究品种资源圃，品种为前进桑、恒10号、大坪2号变异、旬阳青皮荆桑、恒2号、安康藤桑、荆桑12号、恒7号、当地胡桑、光明桑、沈2号、恒8号、大坪3号、恒3号、流水青桑、流水1号、恒日新街良桑、大坪桑、安选1号、箔篮桑、大坪桐桑、安选2号、秦巴桑、旬阳白皮。选择生长一致的植株，取桑枝顶自下7、8片处，3次重复。

1.2 主要试剂和仪器

1-Deoxynojirimycin-HCl（1-DNJ-HCl，美国Sigma公司）；9-Fluorenyl-methyl chloroformate（FMOC-Cl，Fluca公司）；乙腈、醋酸、甲醇（均为色谱纯）；其余试剂均为分析纯；试验用水为重蒸水。

高效液相色谱仪1260 Infinity（美国安捷伦公司）；超声波清洗机KQ-250D（昆山市超声波仪器有限公司）。

1.3 桑叶DNJ含量的测定

所采样品均采用反相高效液相色潽-紫外检测法测定[27]，每个样品重复测定2次，取平均值。

1.4 数据处理

数据运用PASW Statistics 18进行分析处理。

2 结果与分析

2.1 桑叶测试样品的高效液相色谱

按照“1.3”的方法对DNJ标样和桑叶样品进行含量测定。分离结果见图1。通过图1可见，DNJ的分离效果较佳。

2.2 不同桑树品种间桑叶DNJ含量的比较

通过方差齐性检验（表1）可以看出，显著性没有达到最小值0.05，所以差异不显著，这证明方差是齐性的，各品种间可以采用单因素方差分析进行比较，各桑树品种间DNJ含量见图2。

通过单因素方差分析表2可以看出，部分桑树品种间DNJ含量具有显著性差异。而从同质子集表3中可以看出，根据桑叶中的DNJ含量可将24个品种区分为11类。

3 结论

由上述试验研究可以看出，安康地区桑树品种中桑叶DNJ含量具有显著差異，其中旬阳青皮荆桑中的含量最高，为0.381 5%，显著高于其他品种；大坪2号变异、恒2号、安选1号、流水青桑、当地胡桑、沈2号、大坪桐桑、箔篮桑、前进桑含量较高；而光明桑、荆桑12号等品种含量较低。

这种显著性差异为DNJ的研究和应用奠定良好的基础。第一，对于同一区域、同一时间段生长的不同桑树品种进行桑叶DNJ含量的测定，并且能够得到显著差异，说明不同桑树品种产生DNJ是有差异的，为桑树产生DNJ含量的内在机理奠定基础。

第二，为DNJ的应用奠定基础。提取分离DNJ是DNJ应用的基础，而选择合适的桑树品种则是提取分离DNJ的基础。选择良好的桑树品种，除了要对桑树叶的DNJ含量有所了解，还要对桑树叶片的生长量以及桑树的抗病性等方面有所了解，综合考虑，选择最佳品种。在后续的试验中，将结合桑树本身的生理特性进行研究。

参考文献：

[1] SAUNIER B，KILKER R J，TKACZ J S，et al. Inhibition of N-linked complex oligosaccharide formation by 1-deoxynojirimycin，an inhibitor of processing glucosidases[J].J Biol Chem，1982，257（23）：14155-14161.

[2] GROSS V，ANDUS T，TRAN-THI T A，et al. 1-deoxynojirimycin impairs oligosaccharide processing of alpha 1-proteinase inhibitor and inhibits its secretion in primary cultures of rat hepatocytes[J].J Biol Chem，1983，258（20）：12203-12209.

[3] LI Y G，JI D F，ZHONG S，et al.1-deoxynojirimycin inhibits glucose absorption and accelerates glucose metabolism in streptozotocin-induced diabetic mice[J].Sci Rep，2013，3：1377.

[4] HU X Q，THAKUR K，CHEN G H，et al. Metabolic effect of 1-deoxynojirimycin from mulberry leaves on db/db diabetic mice using liquid chromatography-mass spectrometry based metabolomics[J].J Agric Food Chem，2017，65（23）：4658-4667.

[5] SEVSEK A，CELAN M，ERJAVEC B，et al. Bicyclic isoureas derived from 1-deoxynojirimycin are potent inhibitors of beta-glucocerebrosidase[J].Org Biomol Chem，2016，14（37）：8670-8673.

[6] KWON H J，CHUNG J Y，KIM J Y，et al. Comparison of 1-deoxynojirimycin and aqueous mulberry leaf extract with emphasis on postprandial hypoglycemic effects：in vivo and in vitro studies[J].J Agric Food Chem，2011，59（7）：3014-3019.

[7] LI Y G，JI D F，ZHONG S，et al. Hybrid of 1-deoxynojirimycin and polysaccharide from mulberry leaves treat diabetes mellitus by activating PDX-1/insulin-1 signaling pathway and regulating the expression of glucokinase，phosphoenolpyruvate carboxykinase and glucose-6-phosphatase in alloxan-induced diabetic mice[J]. J Ethnopharmacol，2011，134（3）：961-970.

[8] KOJIMA Y，KIMURA T，NAKAGAWA K，et al. Effects of mulberry leaf extract rich in 1-deoxynojirimycin on blood lipid profiles in humans[J].J Clin Biochem Nutr，2010，47（2）：155-161.

[9] LIU Q，LI X，LI C，et al. 1-deoxynojirimycin alleviates liver injury and improves hepatic glucose metabolism in db/db mice[J].Molecules，2016，21（3）：279.

[10] DO H J，CHUNG J H，HWANG J W，et al. 1-deoxynojirimycin isolated from Bacillus subtilis improves hepatic lipid metabolism and mitochondrial function in high-fat-fed mice[J].Food Chem Toxicol，2015，75：1-7.

[11] LIU Q，LI X，LI C，et al. 1-deoxynojirimycin alleviates insulin resistance via activation of insulin signaling PI3K/AKT pathway in skeletal muscle of db/db mice[J].Molecules，2015， 20（12）：21700-21714.

[12] KIJIMA R E S，HONMA T，YAMAMOTO K，et al. 1-Deoxynojirimycin attenuates high glucose-accelerated senescence in human umbilical vein endothelial cells[J].Exp Gerontol，2014，55（5）：63-69.

[13] CHAN K C，LIN M C，HUANG C N，et al. Mulberry 1-deoxynojirimycin pleiotropically inhibits glucose-stimulated vascular smooth muscle cell migration by activation of AMPK/RhoB and down-regulation of FAK[J].J Agric Food Chem，2013，61（41）：9867-9875.

[14] TSUDUKI T，KIKUCHI I，KIMURA T，et al. Intake of mulberry 1-deoxynojirimycin prevents diet-induced obesity through increases in adiponectin in mice[J]. Food Chem，2013，139（1-4）：16-23.

[15] KONG W H，OH S H，AHN Y R，et al. Antiobesity effects and improvement of insulin sensitivity by 1-deoxynojirimycin in animal models[J].J Agric Food Chem，2008，56（8）：2613-2619.

[16] LIU M，WANG S，ZHOU Y D，et al. An iminosugar N-pentafluorobenzyl-1-deoxynojirimycin as a novel potential immunosuppressant for the treatment of Th2-related diseases[J].Bioorg Med Chem Lett，2012，22（1）：564-570.

[17] 彭忠田，申 璀，譚德明，等.脱氧野尻霉素衍生物抗乙型肝炎病毒的体外试验研究[J].中国药房，2007（1）：22-24.

[18] JACOB J R，MANSFIELD K，YOU J E，et al. Natural iminosugar derivatives of 1-deoxynojirimycin inhibit glycosylation of hepatitis viral envelope proteins[J].J Microbiol，2007，45（5）：431-440.

[19] 娄德帅，范 涛，王储炎，等.全蚕粉中1-脱氧野尻霉素的提取分离及分离物对肿瘤细胞的抑制作用[J].蚕业科学，2010（1）：109-114.

[20] ZHAO Y，LIU W，ZHOU Y，et al. N-（8-（3-ethynylphenoxy）octyl-1-deoxynojirimycin suppresses growth and migration of human lung cancer cells[J].Bioorg Med Chem Lett，2010， 20（24）：7540-7543.

[21] WANG R J，YANG C H，HU M L. 1-Deoxynojirimycin inhibits metastasis of B16F10 melanoma cells by attenuating the activity and expression of matrix metalloproteinases-2 and -9 and altering cell surface glycosylation[J].J Agric Food Chem， 2010，58（16）：8988-8993.

[22] ZHAO Y，ZHOU Y，O'BOYLE K M，et al. Hybrids of 1-deoxynojirimycin and aryl-1，2，3-triazoles and biological studies related to angiogenesis[J].Bioorg Med Chem，2008，16（12）：6333-6337.

[23] 施新琴，陈传杰，李 峰，等.山东省部分桑树栽培品种桑叶中的1-脱氧野尻霉素含量测定[J].蚕业科学，2013（1）：177-182.

[24] 张成和.陕西桑树品种资源及其利用现状[J].陕西蚕业，1985（4）：15-20.

[25] 陈正余.安康市桑树资源状况调查与分析[J].中国蚕业，2005（1）：74-76.

[26] 楚 渠，彭云武.利用SSR标记对陕西地方桑树品种的遗传多样性分析[J].陕西农业科学，2015（6）：17-20.

[27] 施新琴，崔为正，裘立群，等.用反相高效液相色谱-紫外检测法测定1-脱氧野尻霉素的含量[J].蚕业科学，2006（1）：146-149.