高效液相色谱法测定苯甲酸钠中邻苯二甲酸含量

李显文，张琪

（武汉有机实业有限公司，湖北武汉 430000）

苯甲酸钠（化学式C6H5COONa）又名安息香酸钠，无臭或微带安息香气味，易溶于水。苯甲酸钠是食品中常用的防腐剂，对酵母菌、霉菌及部分细菌作用效果很好，防腐效果在pH 2.5～4.0最好[1]。苯甲酸钠价廉易得，有很好的防腐抑菌效果[2]，在世界各国均被广泛使用，也用于医药工业和植物遗传研究，染料中间体、杀菌剂。我国GB 2760-2011《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》明确规定了21类食品中苯甲酸及苯甲酸钠最大使用量，除此之外食品不允许添加苯甲酸和苯甲酸钠作为防腐剂[3]。苯甲酸钠中的邻苯二甲酸钠在使用环境是酸性时转化为邻苯二甲酸，而邻苯二甲酸又可以与醇类作用生成邻苯二甲酸酯类，此物质可干扰机体内分泌系统，具有类雌激素作用和抗雄性激素作用[4]，严重危害人体健康。在我国的食品分析检测中，HPLC逐渐作为常用的高通量，高灵敏分析手段，承担着越来越重要的作用[5]。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

安捷伦高效液相色谱仪1260LC（紫外检测器，VWD），超纯水机（武汉品冠仪器设备有限公司），色谱柱（Wakopak ，Handy ODS，250 mm×4.6 mm×5 μm）。

1.2 试剂

冰乙酸（HPLC级，西陇化工股份有限公司），甲醇（HPLC级，TEDIA），邻苯二甲酸（基准试剂，天津市光复精细化工研究所）。

1.3 玻璃仪器

1 mL、5 mL、10 mL移液管，100 mL、25 mL容量瓶。

2 方法

2.1 色谱条件

流动相/溶剂（693 mL超纯水，300 mL甲醇，7 mL冰乙酸）；检测波长：228 nm；流速：1 mL/min；柱温：50 ℃；进样量：20μL；等度冲洗，分析时间40 min；计算方法：外标法（峰面积）。

2.2 实验部分

2.2.1 线性相关性

标准溶液储备液：称取邻苯二甲酸标准样品0.1 g左右，加少量溶剂，超声2 min使溶解，冷却至室温，用溶剂定容至100 mL。

标准工作溶液：将标准溶液储备液取不同的体积并稀释成6个不同浓度的标准工作溶液，并测试，每个标准工作溶液测试2次。

2.2.2 回收率试验

分别配制3个不同浓度的溶液，每个溶液测试3次。

2.2.3 系统适用性

苯甲酸钠溶液：称取苯甲酸钠样品0.5 g，加少量溶剂，超声2 min使溶解，冷却至室温，用溶剂定容至25 mL，上机测试。

3 结果

3.1 线性相关性

标准溶液储备液：称取邻苯二甲酸标准样0.104 6 g，加少量溶剂，超声2 min使溶解，冷却至室温，用溶剂定容至100 mL，浓度为1 046 mg/L。

标准工作溶液配制方法及检测结果见表1。

对浓度和峰面积进行线性处理，得到其关系为：

图1 邻苯二甲酸浓度和峰面积关系图

浓度和峰面积的关系为Y=50.456X+36.811（Y为峰面积，X为浓度），回归曲线的校正系数0.9996＞0.990，线性关系良好，符合要求。

3.2 回收率试验

溶液的配制方法及结果见表2。

回收率的平均值为99.07%，回收率在80%～120%，回收率相对标准偏差（RSD）为0.92%（n=9）

3.3 系统适用性

将苯甲酸钠溶液测试，结果如图2所示。

图2 系统适用性典型图谱

邻苯二甲酸保留时间是6.225 min，苯甲酸钠的保留时间是14.929 min，邻苯二甲酸的对称因子是1.32，塔板数达7 662，邻苯二甲酸和苯甲酸钠的分离度为7.00，均符合要求（分离度R＞1.5）。

表1 标准工作溶液的配制方法及检测结果

表2 回收率试验溶液配制方法及检测结果

3.4 检测限与定量限

取标准溶液储备液，按倍比稀释法稀释，以信噪比（S/N=3）时相应的浓度为检测限；以信噪比（S/N=10）时相应的浓度为定量限[6]。结果显示，邻苯二甲酸的检测限为0.47 mg/L，定量限为1.64 mg/L。

4 结论

综上，邻苯二甲酸的平均回收率为99.07%，回收率的相对标准偏差为0.92%，回归曲线校正系数0.9996，邻苯二甲酸与苯甲酸钠的分离度为7.0；均符合回收率80%～120%，回收率的相对标准偏差≤10%，回归曲线校正系数≥0.990，分离度大于1.5的要求；说明该高效液相色谱法检测苯甲钠中邻苯二甲酸的含量准确可靠，灵敏度高。

[1]沈裕生,林玮.果汁保存技术探讨[J].郑州轻工学院学报(自然科学版),1998(2):54-57.

[2]李丹花,岳丹,乔莉娟,等.苯甲酸钠对新鲜果汁保鲜效果研究[J].湖北农业科学,2014,53(15):3594-3596.

[3]李菊,刘淑君,黄雪琳.苯甲酸和苯甲酸钠安全性与检测方法研究进展[J].粮食与油脂,2002(9):49-51.

[4]巩玉红.邻苯二甲酸酯类增塑剂的应用及危害[J].山东化工,2011,40(5):93-95.

[5]张健泓.陈优生.高效液相色谱法概论[J].中国医药导报,2008(5):28-29.

[6]姚枝玉.吴秋娟,董静,等.阴离子交换高效液相色谱法测定3-硝基邻苯二甲酸中杂质4-硝基邻苯二甲酸,邻苯二甲酸的含量[J].药学与临床研究,2015,23(1):30-33.