精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（25R）稳定性研究

梅丽，蒋玲，杨桦，栗凤娟

（江苏万邦医药科技有限公司，江苏徐州 221004）

2型糖尿病（T2DM）是由生活方式或遗传因素导致的一种内分泌代谢疾病，近年来发病率呈上升趋势[1-2]。精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（25R）含有25%的可溶性重组赖脯胰岛素（速效）和75%的精蛋白锌重组赖脯胰岛素，皮下吸收速度更加迅速，满足餐后胰岛素的需要。

与鱼精蛋白结合的重组赖脯胰岛素释放缓慢，作用时间延长，可以替代基础分泌[3]。林旋等人的研究发现精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（25R）可明显改善2型糖尿病患者血糖代谢，增强其免疫功能，减轻炎症反应，从而降低其心血管事件的发生[4]。张宏颖等的研究结果表明，精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（25R）能较好地控制餐后血糖，无严重的低血糖事件发生，具有较好的安全性。注射时间非常灵活，进餐即打针，患者使用更加方便[5]。

目前大量研究表明，精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（25R，商品名优泌乐25）在临床治疗2型糖尿病安全、方便、有效，值得临床推广应用[6]。所以研究精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液在临床使用过程中的稳定性具有非常重要的意义。

1 仪器与试药

仪器：岛津20A高效液相色谱仪。

标准品：赖脯胰岛素对照品（批号：140729-200501，中国药品生物制品检定所）。

参比制剂：优泌乐25（批号：C572223，Eli Lilly Italia S.p.A公司）。

样品：精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（25R），产自江苏万邦生化医药集团有限责任公司，批号为B201608504、B201609501、B201609502。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色 谱 柱：Inertsil ODS-SP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.2mol/L硫酸盐缓冲液-乙腈（74∶26）；柱温：40℃；流速：0.8 mL/min；检测波长：214 nm；进样器温度：5℃；进样量：20 μL。

2.2 系统适用性

取赖脯胰岛素对照品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1mL中含1mg溶液，放置，使A21脱氨赖脯胰岛素含量为0.8%～11.0%。在上述色谱条件下，重组赖脯胰岛素主峰与A21脱氨赖脯胰岛素峰之间的分离度不小于3.0，重组赖脯胰岛素主峰的拖尾因子不大于1.5。该色谱条件用于含量测定，按外标法以赖脯胰岛素峰与A21脱氨赖脯胰岛素峰面积之和计算。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取赖脯胰岛素对照品适量，用0.01 mol/L盐酸溶液溶解并制成每1mL中含20单位的溶液，作为对照品溶液。

2.4 检测方法及结果

每批样品分别取12支，分为6组（2支/组）进行试验。按照笔式注射器及笔芯使用说明书缓慢颠倒或滚动笔芯至规定次数，将笔芯和注射器针头正确安装于胰岛素笔式注射器上，排出笔芯中的气泡后，正确设置注射剂量为30 IU（d1～d9，模拟临床中患者用法与用量，按照体重75 kg，0.4 IU/(kg·d)的给药剂量计算），并注射出药液，取下注射器针头，将上述装有笔芯的笔式注射器于室温下避光静置。每24 h重复上述操作，分别在d1、d3、d6、d9收集注射出的药液至容器中，并迅速用微量移液枪快速精密吸取两份200 μL药液备用。按照上述方法注射至行程终点前15 IU处（预实验测定），放置24 h，将笔式注射器及笔芯缓慢颠倒或滚动笔芯规定次数，推注药液至行程终点，用微量移液枪从容器中快速精密吸取200 μL药液，用于剩余药液混匀后的检测。

取200 μL药液，加入0.99 mol/L盐酸溶液6 μL，振摇使其完全澄清，用0.01mol/L盐酸溶液溶解并制成每1mL中含20单位的溶液，作为供试品溶液。取200 μL药液与0.1 mol/L 200 μLTris-盐酸缓冲液[pH 8.2，(25±1)℃ ]，混合，振摇，(25±1)℃放置 1 h，用0.2 μm微孔滤膜滤过，取滤液，每1 mL加入0.99 mol/L盐酸溶液15 μL，作为可溶性赖脯胰岛素供试品溶液。

2.5 检测误差分析

本研究选取江苏万邦医药科技有限公司生产的三批精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（25R）和礼来公司的优泌乐25，按照使用说明书，模拟临床注射操作，选择注射剂量为30 IU，并且选取了患者单次注射剂量100 μL(即10 IU) 作为小样本量待测样品溶液的体积。孙雪等研究发现，小样本量法及大样本量法检测同批次预混注射液，结果无显著区别，并符合方法学验证的要求[7]，因此本次研究可以真实反映每只笔芯的实际含量。

本研究中的注射行程终点是依据万邦笔的使用说明书而确定。选取注射至行程终点前15 IU处作为剩余药液的混匀体积，以考察玻璃珠在笔芯内的运动空间减小后，样品中的重组赖脯胰岛素含量和可溶性重组赖脯胰岛素是否稳定和符合规定。结果表明，精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（25R）在使用过程中和使用终末期含量和可溶性赖脯胰岛素没有显著差异，并且含量和可溶性赖脯胰岛素均符合质量标准要求（90.0%～105.0%与15.0%～30.0%），因此，精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（25R）在使用中和使用终末期可保证成分充分混匀。

由于本实验的温度仅是模拟临床使用药常见的使用和保存温度，不能代表其他特殊温度条件，患者在使用过程中严格按照使用说明书操作时可以完全保证药品的质量。

在可溶性重组赖脯胰岛素的检测过程中，通过向药液中加入Tris缓冲液，可以使部分与鱼精蛋白物理吸附的可溶性重组赖脯胰岛素达到解吸附的效果。混悬液中的晶体大小为1～20 μm，通过0.2 μm滤膜可将其完全滤过，因此检测结果准确可靠。

表1 精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（25R）使用过程中和使用终末期含量和可溶性赖脯胰岛素的检测结果

3 结论

随着精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（25R）在临床中的广泛应用，已经有不少学者研究其在临床应用中的疗效，但对笔芯质量控制及检测使用中的笔芯质量还没有见报道[8-11]。本实验模拟临床使用精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（25R）的操作及室温保存条件，运用高效液相色谱法测定胰岛素含量，考察其在使用过程中的变化，为临床开启预混胰岛素注射液后正确使用和保存提供依据。

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[4]张宏颖,张广颖,杨志霞.赖脯胰岛素25治疗2型糖尿病临床观察[J].河北医药,2011,33(12):1827-1828.

[5]林旋,郎江明,魏爱生,等.精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液对2型糖尿病患者糖代谢与免疫功能的影响及其炎症机制研究[J].中国生化药物杂志,2015(4):144-146.

[6]张继斌,陈胜业,郭贞臻.优泌乐25在临床治疗2型糖尿病的疗效观察[J].中国医药指南,2016,14(10):132-133.

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