FGF2在胰腺癌中的表达及对胰腺癌PANC—1细胞侵袭转移的作用和机制

孙叙秋 鲁朔焱 张羽丰

摘要 目的：探讨成纤维生长因子2（FGF2）在胰腺癌中的表达，以及FGF2对人胰腺癌细胞（PANC-1）的侵袭、转移作用和机制。方法：收治胰腺导管腺（PDAC）癌患者60例，采集其胰腺导管细胞癌组织（PDAC）及癌变部位旁的正常胰腺组织（NP），测定FGF2。把体外培养的PANC-1分成FGF2组、FGF2+LY294002组、FGF2+AZD4547组、对照组。测定细胞支架蛋白（Pallad/n）及蛋白激酶B的蛋白、mRNA，并测定每组PANC-1细胞侵袭、迁移的能力。结果：PDAC组织的FGF2表达率80%，显著高于癌变部位旁正常NP组织的11%（P< 0.05）；PDAC的FGF2的表达率和肿瘤分化程度、临床的TNM分期、淋巴结转移和远处转移呈相关性（P<0.05）。FGF2组的Palladin及蛋白激酶B的蛋白、mRNA表达、侵袭细胞数量比其他组高（P<0.05）；FGF2+LY294002组、FGF2+AZD4547纽的侵袭细胞数量比FGF2组及对照组低（P<0.05）；FGF2组的细胞迁移率最高（P<0.05），FGF2+LY294002组、FGF2+AZD4547组的细胞迁移率比FGF2组及对照组低（P

关键词 FGF2；PANC-1细胞：侵袭转移；作用机制

资料与方法

2010年1月-2016年2月收治经病理检查确诊并进行手术切除的PDAC患者60例，并包含距癌变部位边缘>2 cm的NP标本18例，术前均未进行化疗、放疗。其中男37例，女23例；年龄42～66岁，平均（54±12）岁；依照TNM分期I期、Ⅱ期24例，Ⅲ期、Ⅳ36例；依照UICC的分类标准高分化18例，中分化19例，低分化23例；淋巴结转移33例，淋巴结未转移27例。全部标本均行甲醛定型和石蜡包埋。本次研究通过伦理委员会批准，研究对象均签署知情同意书。

免疫1组化测定FGF2表达：标本5 μm切片，HE染色和免疫1组化染色，PBS液为阴性对照，严格按照试剂盒说明书试验。FGF2阳性表达的定义为细胞胞质中出现棕黄色颗粒，结果由2名病理医师双盲法判断。光学高倍显微镜下选取5个视野，每个视野计数100个细胞，依照染色面积及强度评分，染色面积> 50%为3分，26%～50%为2分，ll%～25%为1分，0～l0%为0分；染色强度3分为强，2分为中，1分为弱，0分为阴性。FGF2染色分级为染色面积+染色强度，>3分FGF2高表达，≤3分FCF2低表达。

细胞体外培养及参数测定：把PANC-1接种在RPMI 1640培养基上，培养24 h，后分4组：FGF2组（在培养液中加入FCF2）、FGF2+ LY294002组（FCF2组+LY294002）、FCF2+AZD4547组（FCF2组+AZD4547）、对照组f在培养液中继续培养）。4组均采用蛋白质印迹法和反转录PCR法测定细胞支架蛋白（palladin）及蛋白激酶B的蛋白、mRNA，并通过细胞划痕试验及Transwell小室细胞侵袭活性试验测定每组PANC-1细胞侵袭、迁移的能力。

结果

FCF2在PDAC组织及NC组织中的表达：FCF2在PDAC组织中为高度表达，主要在细胞质内，为深棕色的颗粒；FCF2在NC组织中染色浅，为低度表达。PDAC中FCF2低表达12例，高表达48例，高表达率80%（48/60）；NP中FGF2低表达者16例，高表达2例，高表达率11010 （2/18）。胰腺导管细胞癌组织中的FCF2高表达率显著高于癌变部位旁的正常胰腺组织（P<0.05）。

FGF2在PDAC表达相关因素分析：X2检验结果表明，FGF2的表达和肿瘤的分化程度、临床TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关，P< 0.05；和患者的性别、年龄和癌变部位无关，P> 0.05。

蛋白质印迹和反转录PCR结果：蛋白质印迹和反转录PCR结果均显示，FGF2+ LY294002组、 FGF2+ AZD4547组、对照组的p-Akt蛋白及Palladin蛋白微量表达，FGF2组p-Akt蛋白及Palladin蛋白表达明显高于其他组（P<0.05）。

癌细胞侵袭、迁移试验结果：结果显示，FCF2组侵袭细胞数和细胞迁移率显著高于另外3组（P<0.05）；且FCF2+LY294002组和FCF2+AZD4547组的侵袭细胞数母、细胞迁移率与对照组和FCF2组相比有所下降（P<0.05），见表l。

讨论

胰腺癌重要的特性是早期侵袭和迅速转移，促细胞生长因子与癌细胞的相互作用机制是近年来的研究重点，促细胞生长因子与其受体特异性结合活化胞内信息通道，在调节细胞的发生、发展过程中有不可或缺的作用。FCF2作为重要的促生长因子，已被发现在乳腺癌、胃癌、甲状腺癌等结构内有高表达，并且不正常的FCF2-FGF2R信息通道会推进肿瘤细胞的发展[1]。但目前没有关于FGF2在PDAC组织的表达及在PDAC发展中反应机制的资料。本次试验结果表明，单独作用于FCF2时的表达与对照组相比显著升高，而在给予PI3K/Akt信息通道抑制剂或FGFR2抑制剂后，Palladin及Akt的表达和对照组比较，无显著变化，但相对于FGF2组而言显著下降。基于此项研究，推测FGF2可能通过PI3K/Akt信息通道引发Akt磷酸化加强，从而激发Palladin的表达，促进肿瘤细胞的运动力，使其侵袭、迁移运动加强。

综上所述，FCF2在胰腺癌组织中呈现为高表达，与胰腺癌细胞的侵袭转移呈现正相关，可能的作用机制为FCF2与其受体反应，激活了PI3K/Akt通道，增强了Palladin的表达，从而推进了PANC-1的侵袭转移。

参考文献

[1]李倩，李莉，郭淑芹，等.成纤维细胞生长因子2、成纤维细胞生长因子受体4蛋白在人甲状腺乳头状癌中的表达及意义[J]解剖学报，2014，45（5）：675-681.