烟草叶片组织结构检测的微波快速石蜡制片法研究

苑亚汝，徐后娟，侯欣，刘凯，刘成林，赵环宇，李建东，徐赛，王玉军

山东农业大学，植物保护学院，山东省泰安市泰山区岱宗大街61号 271018

石蜡制片法是一种广泛应用于动植物组织结构研究的实验方法，石蜡切片在显微镜下可以清晰地观测样本组织结构和形态。但目前适用于烟草叶片的常规石蜡制片技术制作周期长，从取材到封片整个制片过程大约需要9 d，且制作过程中使用的有毒试剂较多，如二甲苯、甲醛等，严重影响了制片效率和操作者健康。

目前利用微波法加快试剂渗透速率是缩短石蜡制片时间最为经济有效的方法。现有研究多是对作用试剂或制片时间单一方面的优化，尚缺少在改良试剂基础上缩短制片时间的综合性改良，且研究对象多集中在禾本科植物，在烟草中还未见报道。

本试验以烟草叶片为材料，在改进常规石蜡制片法的基础上结合微波作用的方法，探究一种适用于烟草叶片的微波快速石蜡制片技术。

1 材料与方法

试验烟草为烤烟，品种为NC55。在同一叶片对称部位打孔取样，根据取样的左右侧将叶片分为A、B两组，A组作为对照组用于常规石蜡制片法制片，B组作为试验组用于微波快速石蜡制片法制片，采用正丁醇替代二甲苯作为透明剂，采用松节油替代二甲苯作为脱蜡剂，与常规石蜡制片法不同的步骤见表1：

表1 微波快速石蜡制片法制片处理步骤Tab.1 Treatment step of rapid paraffin production method

2 结果

2.1 制片时间

两种方法中各步骤试剂作用及实际操作耗时情况微波快速石蜡制片法将常规方法需要111.5 h的试剂作用时间缩短到142 min，显著提高了制片效率。

2.2 切片质量

常规石蜡制片法和微波快速石蜡制片法制作的切片在显微镜下的视野图片显示（图1），在相同切片厚度时，两种方法制作的石蜡切片在显微镜下均可清晰分辨表皮、海绵组织、栅栏组织、维管束。微波法制得的切片组织结构完整，没有明显的变形或破裂，完整性和染色效果与常规方法制得的切片相似。2种方法切片的叶片、上表皮、下表皮、栅栏组织和海绵组织的厚度值在95%的置信区间下没有显著差异，表明微波法制得的切片在准确度上和常规方法制得的切片相似。

3 结论

图1 烟草叶片横切面石蜡切片Fig.1 Paraffin section of cross section of tobacco leaves

本试验在常规石蜡制片技术的基础上，改良作用试剂、加入微波处理，应用于制作烟草叶片石蜡切片，在降低试验毒害、缩短制片周期的同时，取得了较好的制片效果，初步确立了一种适用于烟草叶片的微波快速石蜡制片方法，为烟草研究提供了一种更加安全、高效的新技术，具有较高的应用价值。