关于不同来源胰蛋白酶质量控制的思考

秦丽静

【摘 要】本文对不同来源的胰蛋白酶所存在的质量安全风险进行了相应的分析，并针对所分析的风险，提出了相应的控制手段，从而保证无论哪种来源的胰蛋白酶，均可很好的将其质量控制在要求的安全限度内，从而保证最终药品的质量安全。

【关键词】重组源；动物源；质量控制

【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】2095-6851（2018）05--01

胰蛋白酶是目前生物制药企业生产常用的一种蛋白水解酶，属于絲氨酸家族，由223个氨基酸残基组成，在一些重组产品或细胞培养的生产过程中起酶切转化或消化作用等。胰蛋白酶的来源主要分为两种，一种来自于生物体的胰脏，如牛、猪的胰脏，其成份复杂，单纯靠检验标准很难达到质量安全；另一种是利用重组技术通过发酵生产的重组胰蛋白酶。重组胰蛋白酶相对于动物源的胰蛋白酶其成份简单，无支原体、噬菌体和病毒外源因子的风险，但由于重组技术生产的成本较高，因此价格相对于动物源胰蛋白酶高出许多。通常生物制药企业在生产时对于胰蛋白酶的使用量相对较大，会造成生产成本提高，所以目前市场上仍以动物源胰蛋白酶为主。

一 胰蛋白酶的功能

胰蛋白酶是一种肽链内切酶，它可以在赖氨酸和精氨酸C段将多肽切断。在培养细胞的时候，胰蛋白酶的主要功能就是将细胞之间的黏蛋白和糖蛋白进行分离，这种将培养的细胞进行分离的方法，能够促进细胞同培养液进行全方位接触，利于培养，胰蛋白酶的活力主要是通过分解相应的酪蛋白的能力来对其进行标识[1]。

二 不同来源的胰蛋白酶的安全风险分析

动物源胰蛋白酶的主要来源就是由对动物胰脏浸出液体进行制作，其原料主要来自猪或牛的胰脏。在使用牛的胰脏时，首先要考虑牛是否具有疯牛病，并且也要对牛源病毒的风险进行控制，所以目前也有许多企业生产猪胰蛋白酶。根据相关报道，目前已经发现了80多类猪源可携带相应病毒，猪和人有68种病毒基本一致。虽然在制作胰蛋白酶的过程当中采用了合适的方法对其进行了处理，但是动物的胰脏很可能带有多种病原体，而制作方法的除菌性较弱，所以导致制作出的胰蛋白酶仍旧携带某种外源性病毒。根据《中国药典》2015年版三部中的《生物制品生产用原材料及辅料质量控制规程》的风险等级划分，动物源胰蛋白水解酶为风险等级的第4级，是风险等级最高的物料。

对于重组胰蛋白酶，由于其生产是利用重组发酵技术，因此所生产出的胰蛋白酶存在的主要安全风险为生物技术所固有的残留量方面，如宿主蛋白的残留，宿主DNA的残留、抗生素残留等。根据《中国药典》2015年版三部中的《生物制品生产用原材料及辅料质量控制规程》的风险等级划分，重组源的蛋白水解酶为物料风险等级的第3级，其风险级别低于动物源胰蛋白酶。

三 如何加强动物源胰蛋白酶质量控制

（一）加强对胰蛋白酶外源性病毒的检测。若想做好胰蛋白酶的质量控制环节，其重点就是对内源和外源性病毒的控制。最近这几年来，国外已经对外源性病毒的检测手段进行了完善，这使得胰蛋白酶的外源性病毒检查种类得到了一定增加，同时也能够最大程度上控制了胰蛋白酶中的外源性病毒潜在风险。针对外源性病毒的检查方式主要包括特异性和非特异性外源病毒因子的检测形式。特异性检查主要是针对某种特定特定病毒的检测方法，非特异性检查主要是采用合适的方法来对具有某种特征的病毒进行普遍检查。特异性检测方式的精准度和灵敏性都要优于非特异性检查方法[2]。

（二）创造良好的病毒灭活方法。虽然对胰蛋白酶的外源性病毒检测力度正在不断增强，但是目前的检测手段仍然具有较高的局限性，在生产时依旧会蕴藏着较大的风险，所以在制作胰蛋白酶的过程中，应该采用合适的病毒灭火方法，这样就能股使外源性病毒得到最大程度的清除，也是目前防止胰蛋白酶中存在外源性病毒的最佳防护手段。目前我国在对胰蛋白酶进行病毒灭活的主要方法为加热法或者是γ射线照射法。但是在使用这两种方法的同时，也会在一定程度上降低了胰蛋白酶的活性。所以科研人员逐渐使用紫外线照射或者电子束照射技术来代替传统方法，这两种照射方式不但保障了病毒灭活的效果，同时也能够防止出现胰蛋白酶活性降低的现象。在制作胰蛋白酶时可以采取以上方法中的任意一种，或者多种灭活方法进行结合的方式，这样就能够使外源性病毒灭活效果达到最佳，在使用相关灭活方法的时候，一定要按照相关方法的实施规定和要求进行。

四 如何加强重组胰蛋白酶质量控制

重组胰蛋白酶若想做好质量控制，重点是保证上游发酵和下游纯化的整个生产过程中的相关杂质及残留得到有效控制。由于目前生物制品的生产技术成熟，所有工艺杂质及工艺残留情况均可以通过优化后续的生产工艺技术使杂质及残留得到有效控制，并达到国家标准规定的安全限度，从而保证风险物质得到有效去除或控制，同时也可通过现有的残留检测技术得到有效证明。

五 结束语

胰蛋白酶的质量与生物制品的质量和安全性有着紧密联系，其作为一种源自动物的生物产物，只依靠对产品的检验无法达到对其质量的控制，尤其是检查其外源性病毒感染情况。所以，应该对生物制品生产所用的胰蛋白酶进行全方位的质量控制，建立完善的质量控制以及检查方式，遵循去除外源性病毒的处理方式，这样才能够真正彻底的做到控制甚至消除胰蛋白酶带来的威胁，增强生物制品的安全性。对于重组胰蛋白酶，主要控制工艺相关杂质及工艺残留物质，如宿主蛋白、宿主DNA及抗生素残留等，从而保证生物制品的安全性。

参考文献

苗立中，王艳，陈士运.质量保证体系在兽用生物制品生产企业质量管理中的作用[J].中国兽医杂志，2015，51（08）：106-108.

杨新建，段素云，王伟青，李凌燕，施鹏飞，田璐，肖海峻.基于任务驱动的课程改革思路、措施与成效——以“生物制品生产与检测”课程为例[J].北京农业职业学院学报，2015，29（01）：97-102.