外周注射Ghrelin对非洲雏鸵鸟小肠中胃蛋白酶含量的影响

王 亮，杨 杰，王家乡

（长江大学动物科学学院，湖北 荆州 432500）

Ghrelin是由日本科学家 Kojima等［1］于 1999年从大鼠胃组织中提取得到的一种含28个氨基酸残基的多肽，能够促进生长激素（Growth hormone，GH）的释放。Ghrelin主要来源于胃组织，下丘脑、垂体、肠、卵巢、睾丸、胎盘等多种组织也能产生，在体内分布广泛［2］。Ghrelin具有调节胃肠功能、心血管功能、记忆、睡眠、内分泌、生殖等多种生物学作用［2］。Ghrelin自被发现就引起了广泛的关注，成为人们不断研究的热点。本课题组前期研究表明，Ghrelin在非洲鸵鸟的胃、肠、胰腺、肝脏、胸腺、肺、睾丸、脾脏、小脑及肾上腺等组织中均有分布［3－9］，且 Ghrelin在消化道的分布与表达随着动物年龄的变化而变化，提示Ghrelin与鸵鸟胃肠道的发育有一定的作用和关系［3］。因此本研究采用放射免疫法检测Ghrelin对非洲雏鸵鸟小肠中胃蛋白酶含量的影响，旨在为非洲雏鸵鸟的生长发育提供新的理论依据。

1 材料与方法

1．1 试验材料

1．1．1 试验动物 选取健康的45 d非洲雏鸵鸟为试验材料，平均体重（5．5±0．8） kg，随机分为 4 组，每组4羽，雌雄不限，均来自于长江大学鸵鸟研究所。

1．1．2 试验基础日粮 试验过程使用自配育雏料，主要是由青菜配合肉用仔鸡前期配合饲料，饲料使用荆州海大饲料有限公司的产品。

1．1．3 试验试剂 非洲鸵鸟 Ghrelin，GSS（Octanoyl）FLSPEYKKIQKQKDPKKPTTKLHC由上海强耀生物科技有限公司合成．

1．2 试验方法

1．2．1 试验设计 通过颈部皮下注射不同浓度外源性Ghrelin，其浓度分别为 0（对照组）、10、50、100 μg／kg，用生理盐水稀释，注射剂量为1 μL／羽，注射时间为每天上午 8：00，连续注射 6 d，于第 7天上午 8：00取材。

1．2．2 饲养管理 整个饲养阶段在长江大学鸵鸟研究所进行，为避免影响试验效果，雏鸵鸟采用分栏饲养。 每天定时给料，具体时间为 8：00、11：00、14：00、17：00四个时间段各饲喂一次，记录每天总采食量。在试验开始前，对鸵鸟舍全场进行全面彻底喷雾式消毒，在饲喂试验期间，严格按照长江大学鸵鸟研究所消毒程序进行。

1．2．3 样品的采集与处理 饲养至第7天的非洲雏鸵鸟称重。经跖静脉注射10%的乌拉坦（1 g／kg）稀释液进行全身麻醉，打开腹腔迅速取部分小肠组织，用0．85%生理盐水洗净食糜，随后置于液氮中保存备用。

1．2．4 胃蛋白酶含量的测定 准确称取组织质量，按 1∶9（g／mL）的比例加入匀浆介质，冰水浴条件下机械匀浆，制成10%的组织匀浆，2 500 r／min离心10 min，取上清液进行检测。采用放射免疫法检测其含量（北京北方生物技术研究所有限公司）。

1．3 统计分析

获得的全部数据用SAS数据处理软件进行统计分析。所得数据以平均值±标准差表示，通过t检验法比较各组间的差异显著性。P＜0．05为差异显著。

2 结果与分析

从表1中可以看出，当Ghrelin浓度为10 μg／kg时，雏鸵鸟所有小肠中胃蛋白酶的含量均有增加，且空肠和回肠中的含量与对照相比差异显著 （P＜0．05）；当 Ghrelin 浓度为 50 μg／kg 时，十二指肠中胃蛋白酶的含量与对照相比显著降低（P＜0．05），而空肠和回肠中胃蛋白酶的含量则显著增加 （P＜0．05）；当Ghrelin浓度为100 μg／kg时，十二指肠胃蛋白酶的含量显著降低（P＜0．05），回肠中胃蛋白酶的含量显著增加（P＜0．05），空肠中变化不明显。

表1 Ghrelin对小肠中胃蛋白酶含量的影响

3 小结与讨论

就哺乳动物鼠类而言，Ghrelin可通过中枢和外周途径参与胃肠功能的调节，给大鼠脑室或静脉注射Ghrelin均可以促进其胃肠蠕动，促进胃酸分泌，加快胃排空，并发现此种作用可被阿托品和迷走神经切断所阻断，推测迷走神经依赖性的胆碱能途径参与了Ghrelin对胃肠运动的调节［2］。此外，Ghrelin还能通过加强大鼠小肠的运输功能来降低其肠梗阻的发病率［10］。Ghrelin对禽类胃肠运动的调节与哺乳动物相似。Kitazawa 等［11］研究发现，Ghrelin 可以促进鸡胃肠道（食道、嗉囊、腺胃、十二指肠、空肠和结肠）平滑肌收缩，并且随着鸡日龄的增大，Ghrelin对其腺胃收缩的诱导作用逐渐下降［12］，而Ghrelin对禽类消化酶有何影响尚未见研究。本研究发现，一定剂量的Ghrelin（10 μg／kg）能够促进雏鸵鸟小肠中胃蛋白酶的含量增加，从而增强其消化吸收能力，促进雏鸵鸟的生长。

［1］ KOJIMA M，HOSODA H，DATE Y，et al． Ghrelin is a growth hormone －releasing acylated peptide from stomach ［J］．Nature，1999，402：656－660．

［2］郑 福，张 珍，黎宗强．Ghrelin结构与生理功能的研究进展［J］．黑龙江畜牧兽医（科技版），2015，10（4）：77－80．

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［6］ ZHANG H F， WANG J X．Morphology of the proventriculus of African ostrich［J］．Indian J Anim Res．，2018，52（1）：37－40．

［7］ WANG J X，LI P，ZHANG X T， et al．Distribution and developmental changes of ghrelin－immunopositive cells in the pancreas of African ostrich chicks （Struthio camelus） ［J］．Poultry Science，2017，96（9）：3445－3451

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［9］ YE L X，WANG J X，LI P，et al．Distribution and morphology of ghrelin immunostained cells in the adrenal gland of the African ostrich［J］．Biotechnic ＆ Histochemistry，2017，1372631．

［10］ GUALILLO O，LAGO F，GOMEZ －REINO J，et al．Ghrelin，a widespread hormone：insights into molecular and cellular regulation of its expression and mechanism of action［J］．FEBS Letters，2003，552（2－3）：105－109．

［11］ KITAZAWA T，YOSHIDA A，TAMANO T，et al．Age－dependent reduction of Ghrelin and motilin induced contractile activity in the chicken gastrointestinal tract［J］．Peptides，2013，43：88－95．

［12］ KITAZAWA T，TERAOKA H，KAIYA H．The chicken is an interesting animal for study of the functional role of ghrelin in the gastrointestinal tract［J］．Endocr J，2017，64（Suppl）：S5．