基于HPLC含量测定的不同产地丹参药材质量研究

（1山东丹红制药有限公司 山东 菏泽 274000）（2菏泽医学专科学校 山东 菏泽 274000）（3浙江大学 药学院 浙江 杭州 310058）

王臣臣1 安芸（通讯作者）2 范波3 陆世海1 郭晓光1 王毅3

丹参为唇形科植物丹参Salviae miltiorrhizae Bge的干燥根和根茎，最早记载于《神农本草经》，在我国已有近两千年的使用历史，在中医中具有“祛瘀止痛、活血通经、清心除烦”等功效[1]。药理学研究表明，丹参具有保护心肌缺血再灌注损伤，抗血栓，清除体内自由基，保护脑神经等作用，其相关制剂在临床上广泛用于冠心病、心绞痛和脑卒中等心脑血管病治疗。此外丹参还具有抗肿瘤、抗纤维化、抗炎等广泛药理作用。丹参主要活性成分为水溶性的丹参酚酸类和脂溶性的丹参酮类，其中丹酚酸B含量占到了丹参酚酸类含量的80%以上。丹酚酸B和丹参酮类的含量测定写入《中国药典》丹参药材标准中，作为评价丹参药材质量的重要指标。为比较山东产地以及其他不同产地丹参药材质量差异，本文使用《中国药典》2015版丹参药材含量测定方法检测丹参中丹酚酸B和丹参酮类含量，为丹参药材的选择和使用提供参考依据。

1.仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪（含VWD检测器）。丹酚酸B、丹参酮ⅡA对照品（纯度均＞98%，购自上海融禾医药科技有限公司）。乙腈、磷酸、甲醇、三氟乙酸均为色谱纯，VEOLIA公司PureLab flex制水。丹参药材由山东丹红制药有限公司提供，产地见表1。

2.方法与结果

2.1 丹参水分测定

取本品粉末（过三号筛）2g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过10mm，精密称定，开启瓶盖在105度干燥5h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1h，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算丹参含水量（%）。

2.2 丹酚酸B含量测定

Agilent ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm)色谱柱。以乙腈-0.1%磷酸溶液（22：78）为流动相；柱温20℃；流速1.2ml/min，检测波长286nm。精密称取丹酚酸B对照品9.88mg，加甲醇-水（8：2）混合溶液，制成终浓度为0.0988 mg/ml的储备液，即得。供试品溶液的制备为，取本品粉末（过三号筛）约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-水（8：2）混合溶液50ml，用封口膜密塞，超声处理30分钟，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，转移至10ml容量瓶中，加甲醇-水（8：2）混合溶液稀释至刻度，摇匀，12000rpm离心10min，取上清液，即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

2.3 丹参酮类含量测定

Agilent ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm)色谱柱。以0.02%磷酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱；柱温20℃；流速1.0ml/min，检测波长270nm。洗脱梯度为0～6分，60%B相；6～20分，61～90%B相。对照品溶液为精密称取丹参酮ⅡA对照品10.62mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成终浓度为21.24μg/ml的储备液，即得。供试品溶液的制备为取本品粉末（过三号筛）约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，用封口膜密塞，超声处理30分钟，摇匀，12000rpm离心10min，取上清液，即得。样品测定步骤为分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定。根据《中国药典》2015版，以丹参酮的峰面积为对照，乘以校正因子3.49，即得丹参酮类含量。

3.结果

不同产地丹参药材含水量、丹酚酸B含量及丹参酮类含量见表1。所有测定的丹参水分含量均低于13%，符合药典标准[2]。16个产地药材丹酚酸B和丹参酮类含量均符合中国药典标准，其中贵州毕节二者含量最高，均显著高于其他产地，而山西长治丹酚酸B含量最低，刚刚达到标准。山东产地中菏泽东明产丹参其二者含量均显著低于其他山东产地。

表1 不同产地丹参药材含水量、丹酚酸B和丹参酮类含量

通过数据分析发现，在选取的16个产地中，西南和东北地区药材丹酚酸B含量相对较高，山西河北一带相对偏低。山东中部产地含量较平均，其中以日照莒县为最高，而山东西南部的菏泽东明丹酚酸B含量却明显低于其他山东地区。此处，9个山东产地除菏泽东明外其他8个产地含量均比较接近，可见陕西商洛、四川德阳和辽宁锦州3个产地药材的丹酚酸B及丹参酮类含量与山东产地较为相似，而山西长治、河北唐山、黑龙江鸡西、贵州毕节4个产地与山东产地相似度相对较低。对不同产地丹参药材丹酚酸B和丹参酮类含量进行相关性分析，相关系数为0.3289，表明丹参中二者含量具有一定的相关性，但相关性不强。比如16个产地中丹酚酸B含量最高的贵州毕节，其丹参酮类含量也最高。而丹酚酸B含量最低的山西长治，其丹参酮类含量却高于四川德阳、黑龙江鸡西、辽宁锦州等产地。

4.讨论

丹参分布广泛，历史上河南、安徽、山西、山东等地区都曾作为丹参的道地产区，四川丹参是有据可查最迟的道地药材。本研究所选取的产地中，四川德阳与山东产地的相似度最高，表明山东丹参和道地药材品质较为相似。本研究通过对丹参药材有效成分的含量测定，为丹参产地选择提供依据。但由于中药成分复杂，其药效活性与成分之间的相关性仍需更深入的研究，可在产地优选时加入合适的活性评价指标，将有助于从成分到药效相对更全面地反映药材质量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京:化学工业出版社，2005.

[2]高枫，孙桂波，任小宇，等.丹酚酸B对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国中药杂志，2012，3:358-361.